一种蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法技术

本发明专利技术提供一种蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法，包括以下步骤：S1、将蕙兰的根状茎转接至增殖培养基上进行增殖培养；增殖培养基的配方为：基础培养基、蔗糖、琼脂、NAA、椰子粉、抗坏血酸、活性炭，pH5.4；S2、将根状茎转接至分化培养基上进行分化培养；分化培养基的配方为：基础培养基、蔗糖、琼脂、NAA、6

【技术实现步骤摘要】
一种蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法


[0001]本专利技术涉及花卉组织培养
，具体涉及一种蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法。

技术介绍

[0002]蕙兰，属兰科兰属植物，其气色高雅，具有很高的观赏价值。蕙兰的繁殖一般采用种子繁殖和无性繁殖。由于蕙兰的种子十分细小，种子内的胚通常发育不完全，几乎无胚乳，因此，蕙兰的种子在自然条件下很难发芽。而在生产上蕙兰一般会采用分株扩繁，这种扩繁方式所需的时间较长，且其分株能力较弱，繁殖系数较低，不足以满足商品化生产的需求。野生的蕙兰资源已濒临灭绝，因此，利用组织培养的方式对蕙兰进行扩繁，不仅有利于蕙兰的商品化需求，且对于保护蕙兰野生种质资源具有重要意义。
[0003]在对蕙兰进行组织培养过程中发现，兰苗经常携带各种病原，由于不当的分株方式容易使分株繁殖过程造成病原的积累，而这类内生的病原很难通过表面消毒的方式进行消除，且往往随着继代培养次数的增加，使病原逐渐累积，有研究尝试采用连续添加青霉素的方式来防止外植体的污染，然而这样的培养方式往往会出现幼苗的黄化现象。
[0004]目前，蕙兰的组织培养主要是由母株上取8cm左右的新芽，在用水冲洗后，经70％酒精处理
‑
10％次氯酸钠处理
‑
5％次氯酸钠处理
‑
1％次氯酸钠处理，然后经无菌水冲洗数次，以此达到消毒的目的。以新芽的茎尖为外植体，接入培养基中培养。增殖培养基的配方是：改良KC+KT 0.05mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖2％+琼脂条0.6％～0.85％，pH5.2～5.6；生根壮苗培养基的配方是：改良KC+NAA 0.2mg/L+蔗糖2％+琼脂条0.6％～0.85％，pH5.2～5.6。培养条件是：温度22～25℃，光照强度2000lx，光照时间12小时/天，以固体培养为佳。在研究过程中还发现，在培养基中添加香蕉泥可以促进蕙兰的增殖和分化，这主要与香蕉泥中的有机质和天然激素有关。
[0005]但是，上述培养基仍然存在以下问题：
[0006]第一，以新芽的茎尖为外植体还存在内生菌在组培苗中传播的情况；
[0007]第二，外植体在培养基中仍然存在褐变的问题；
[0008]第三，外植体的增殖率为4.1，存在增殖效率低。

技术实现思路

[0009]为解决上述问题，本专利技术的目的在于提供一种蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法。
[0010]为实现上述目的，本专利技术的技术方案如下。
[0011]一种蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法，包括以下步骤：
[0012]S1、将蕙兰的根状茎转接至增殖培养基上进行增殖培养；
[0013]所述增殖培养基的配方为：基础培养基、蔗糖20～22g/L、琼脂4～5g/L、NAA 0.5～1.0mg/L、椰子粉0.1～0.2g/L、抗坏血酸0.08～0.1g/L、活性炭0.8～1.0g/L，pH为5.4；
[0014]S2、将S1增殖培养后的根状茎转接至分化培养基上进行分化培养；
[0015]所述分化培养基的配方为：基础培养基、蔗糖20～22g/L、琼脂4～5g/L、NAA 0.1～0.3mg/L、6
‑
BA 5～7mg/L、椰子粉0.1～0.2g/L、抗坏血酸0.08～0.1g/L、活性炭0.8～1.0g/L，pH为5.4。
[0016]进一步，S1和S2中，所述基础培养基是由1/2MS、芦荟汁和荷叶水提物以质量比1：0.01～0.1：0.002～0.006配置而成。
[0017]更进一步，所述芦荟汁是将芦荟鲜叶去皮后粉碎匀浆，过滤，即得。
[0018]更进一步，所述荷叶水提物是将荷叶与水按照质量比1：8～15混合，然后在80～90℃下回流提取1～2h，过滤，即得。
[0019]进一步，S1中，增殖培养的条件为：
[0020]温度23
±
0.2℃，光照强度2000Lux，光照时间12小时/天。
[0021]进一步，S2中，分化培养的条件为：
[0022]温度23
±
0.2℃，光照强度2000Lux，光照时间12小时/天。
[0023]进一步，S1中，蕙兰的根状茎是由蕙兰种子经无菌播种，萌发后形成的无菌、且生长良好的根状茎。
[0024]本专利技术中，播种前已对种子进行了消毒，种子相比茎尖等外植体更易消毒，萌发出的根状茎一般不存在内生菌污染。
[0025]更进一步，所述根状茎的长度为0.5
±
0.1cm。
[0026]本专利技术的有益效果：
[0027]1、本专利技术主要以蕙兰的根状茎为外植体，且在增殖和分化过程中添加了芦荟汁、荷叶水提物、椰子粉、抗坏血酸等组分，不仅能够抑制内生菌的污染，使培植体能够健康生长，还能够解决褐变问题。
[0028]2、本专利技术的方法利用无菌播种萌发的根状茎进行增殖和分化成苗培养，可以缩短扩繁时间，且可以提高扩繁系数，解决生产上蕙兰扩繁难题。
[0029]3、本专利技术的方法可以增加蕙兰繁殖系数，同时降低病原积累，且对蕙兰野生种质资源保存具有重要意义。
附图说明
[0030]图1是实施例1中蕙兰根状茎在增殖培养基中增殖培养的照片。
[0031]图2是实施例1中蕙兰根状茎在分化培养基中分化出芽的照片。
[0032]图3是实施例1中蕙兰根状茎在分化培养基中分化成苗的照片。
具体实施方式
[0033]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0034]基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0035]下述各实施例中所述实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如
无特殊说明，均可在市场上购买得到。
[0036]实施例1
[0037]一种蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法，包括以下步骤：
[0038]S1、采用蕙兰种子经无菌播种，萌发后形成无菌、且生长良好的根状茎。
[0039]S2、配置基础培养基
[0040]将芦荟鲜叶去皮后粉碎匀浆，过滤，得到芦荟汁；将荷叶与水按照质量比1：10混合，然后在80～90℃下回流提取1～2h，过滤，得到荷叶水提物；将1/2MS、芦荟汁和荷叶水提物以质量比1：0.08：0.004混合，配制得到基础培养基。
[0041]S3、配置增殖培养基
[0042]增殖培养基的配方为：基础培养基、蔗糖20g/L、琼脂5g/L、NAA 1.0mg/L、椰子粉0.2g/L、抗坏血酸0.1g/L、活性炭1.0g/L，pH为5.4。按照配方将各组分混合，定容到1L，即得。
[0043]S4、配置分化培养基
[0044]分化培养基的配方为：基础培本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将蕙兰的根状茎转接至增殖培养基上进行增殖培养；所述增殖培养基的配方为：基础培养基、蔗糖20～22g/L、琼脂4～5g/L、NAA0.5～1.0mg/L、椰子粉0.1～0.2g/L、抗坏血酸0.08～0.1g/L、活性炭0.8～1.0g/L，pH为5.4；S2、将S1增殖培养后的根状茎转接至分化培养基上进行分化培养；所述分化培养基的配方为：基础培养基、蔗糖20～22g/L、琼脂4～5g/L、NAA0.1～0.3mg/L、6
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BA5～7mg/L、椰子粉0.1～0.2g/L、抗坏血酸0.08～0.1g/L、活性炭0.8～1.0g/L，pH为5.4。2.根据权利要求1所述的蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法，其特征在于，S1和S2中，所述基础培养基是由1/2MS、芦荟汁和荷叶水提物以质量比1：0.01～0.1：0.002～0.006配置而成。3.根据权利要求2所述的蕙兰根状茎增殖和分化成苗的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘涛，王亚静，王天舒，苏晨，田野，侯倩茹，张文波，
申请(专利权)人：西安市农业技术推广中心，
类型：发明
国别省市：