多细胞染色试剂组、盒及多细胞染色方法技术

用于多种血细胞同时快速染色的多细胞染色试剂组、盒及多细胞染色方法中，染色试剂C包括染色剂A10、调节盐C10和水；染色剂A10即新亚甲蓝浓度为0.8

【技术实现步骤摘要】
多细胞染色试剂组、盒及多细胞染色方法


[0001]本申请属细胞明场识别用的染色
，尤其涉及一种在细胞悬浮液状态下进行血液细胞中多种细胞同时染色，尤其是白细胞和红细胞同时快速染色，以便同时识别出多种不同类型细胞的染色试剂组、盒及细胞染色方法。

技术介绍

[0002]血液细胞中同时存在多种细胞，以哺乳动物的血液细胞为例，通常包括红细胞、白细胞、血小板。对哺乳动物血液来说，血液中的成熟红细胞不存在细胞核物质也无需染色，在明场显微放大的情况下，都能被看见并能被识别，而白细胞却需要在染色后才能进行准确的细胞类型识别。然而白细胞的种类识别对不同的疾病状态的指征意义又特别大，不同类型的白细胞的浓度和状态意味着不同的病症感染状态和进程。
[0003]在基于血液细胞悬浮液显微放大成像后进行细胞种类识别的时候，是需要基于染色过程将不同的细胞形态呈现，才能基于染色后的显微放大图像进行细胞种类的识别；因此染色的效率和质量对后续的识别是至关重要的。
[0004]采用常规单一染色剂配方的染色剂，对血液细胞悬浮液进行染色时，通常是白细胞被染色了，但是其他类型的红细胞还没有染上色，不足以同时进行多种细胞的明场识别。如果要分别进行不同种类细胞的染色以便识别，耗时耗力，并不经济。即使能同时对不同种类的细胞染色，其染色的质量也会有所偏差，对更精细的细胞类型识别比如白细胞的六分类并不足够。白细胞中包括了中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞；其中中性粒细胞又包括中性杆状核粒细胞、中性分叶核粒细胞；白细胞的6分类是指分别对中性杆状核粒细胞、中性分叶核粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞进行识别。
[0005]在细胞悬浮液状态下进行细胞染色，挑战之一是，悬浮液中的离子浓度调节。以细胞膜当作半透膜，若细胞悬浮液的离子浓度处于高渗状态，细胞会萎缩难以保持原来的形态，也会影响到后续细胞的识别；当悬浮液中的离子浓度处于较为低渗状态下，细胞很容易被胀大，严重时甚至会破裂，最终无法维持细胞形态，使得染色效果无法保持到细胞观察完成；尤其是不同细胞的细胞膜特性有差异时，更难；且低渗状态下，需要被染色突出的细胞核以及核酸物质也处于趋于扩散，难以被染色团聚，会对基于细胞核以及核酸类物质形态的后续识别带来困扰；即使在低渗状态下完成了染色，要维持住染色的效果也并不容易，越低渗的溶液越难维持住染色效果。
[0006]若要采用单一染料将不同类型的白细胞都染到可以用于明场显微成像并用于细胞类型的识别，对染色试剂配方提出了巨大的挑战。
[0007]名词解释：
[0008]核酸物质是指，细胞内存在的具有遗传特性的物质即DNA或RNA或及其片段。
[0009]EDTA盐是指，乙二胺四乙酸盐；乙二胺四乙酸盐会与血液中的钙离子结合形成配位化合物，从而阻止血凝。EDTA盐常规用作血液抗凝剂。
[0010]渗透压：隔以半透膜，一方为溶酶的水，另一方为溶液，水通过半透膜向溶液一方渗透；为阻止水的移动在溶液侧所加的压力称为渗透压。水的运动之所以停止，是该压力与通过膜的水的化学势能相等所致。渗透压以渗透压摩尔浓度作为单位，该单位通常以每千克溶剂中溶质的毫渗透压座尔来表示渗透压。
[0011]本申请中的部分物质的CAS编号如下：
[0012]物质名称CAS编号磷酸氢二钠10039
‑
32
‑
4磷酸二氢钾7778
‑
77
‑
0NaCl2647
‑
14
‑
5EDTA
·
K22001
‑
94
‑
7EDTA
·
K317572
‑
97
‑
3EDTA
·
Na26381
‑
92
‑
6新亚甲蓝229
‑
516
‑
6水7732
‑
18
‑
5商品化37％甲醛溶液50
‑
00
‑
0商品化50％戊二醛溶液111
‑
30
‑8[0013](CASRegistryNumber或称CASNumber,CASRn,CAS#)，又称CAS登录号或
[0014]CAS登记号码，是某种物质(化合物、高分子材料、生物序列
[0015](Biologicalsequences)、混合物或合金)的唯一的数字识别号码。
[0016]本申请中的水，是纯化水。纯化水是指符合《中国药典(2015版)》纯化水标准的水，其主要参数为：使用离线电导率仪检测，25℃温度下，标示装量不大于10ml(毫升)时，电导率不大于25μS/cm(微西门子每厘米)的水。
[0017]《GB/T6686
‑
2006染料分类》中将碱性染料归入阳离子染料中，“碱性染料：
[0018]旧称碱性染料的品种，是在水溶液中能解离生成阳离子色素的染料；阳离子染料：是一类在水溶液中能解离生成阳离子色素的染料，该类染料可在弱酸性染浴中对含有阴离子染席的物质进行染色。

技术实现思路

[0019]为了提供一种高效实现多种不同类型细胞同时染色的染色试剂系统和方法，本专利技术提出了一种多细胞染色试剂组和试剂盒及制备方法和细胞染色方法。
[0020]本申请解决上述技术问题的技术方案是一种多细胞染色试剂组，用于多种血细胞同时快速染色，包括染色试剂C，染色试剂C包括染色剂A10、调节盐C10和水；染色剂A10为新亚甲蓝；新亚甲蓝浓度为0.8
×
10
‑4g/ml～8.0
×
10
‑4g/mL；调节盐C10，用于提供低渗透压环境和pH值7
‑
8的碱性环境；低渗透压环境中，渗透压摩尔浓度范围140mosmol/kg～210mosmol/kg；染色试剂A中包括染色试剂C；染色试剂A中还包括抗凝促染剂A20；抗凝促染剂A20包括EDTA盐，用于促进染色剂A10进入细胞对磷酸基团染色。
[0021]抗凝促染剂A20包括EDTA盐；染色试剂A中EDTA盐浓度范围为2.0
×
10
‑4mol/L～2.0
×
10
‑3mol/L；EDTA盐包括EDTA
·
K2，EDTA
·
K3或EDTA
·
Na2。
[0022]染色试剂A中，调节盐C10包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钾；用于人类或犬类染色的
染色试剂A中，调节盐C10包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钾；渗透压范围是140mosmol/kg～180mosmol/kg；pH值为7.0～7.6；磷酸氢二钠浓度为3.0
×
10
‑2mol/L～4.8
×
10
‑2mol/L，磷酸二氢钾浓度为5本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多细胞染色试剂组，其特征在于，用于多种血细胞同时快速染色，包括染色试剂C，染色试剂C包括染色剂A10、调节盐C10和水；染色剂A10为新亚甲蓝；新亚甲蓝浓度为0.8
×
10
‑4g/ml～8.0
×
10
‑4g/mL；调节盐C10，用于提供低渗透压环境和pH值7
‑
8的碱性环境；低渗透压环境中，渗透压摩尔浓度范围140mosmol/kg～210mosmol/kg；染色试剂A中包括染色试剂C；染色试剂A中还包括抗凝促染剂A20；抗凝促染剂A20包括EDTA盐，用于促进染色剂A10进入细胞对磷酸基团染色。2.根据权利要求1所述多细胞染色试剂组，其特征在于，抗凝促染剂A20包括EDTA盐；染色试剂A中EDTA盐浓度范围为2.0
×
10
‑4mol/L～2.0
×
10
‑3mol/L；EDTA盐包括EDTA
·
K2，EDTA
·
K3或EDTA
·
Na2中的任意一种或多种。3.根据权利要求1所述多细胞染色试剂组，其特征在于，染色试剂A中，调节盐C10包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钾；用于人类或犬类染色的染色试剂A中，调节盐C10包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钾；渗透压范围是140mosmol/kg～180mosmol/kg；pH值为7.0～7.6；磷酸氢二钠浓度为3.0
×
10
‑2mol/L～4.8
×
10
‑2mol/L，磷酸二氢钾浓度为5.8
×
10
‑3mol/L～1.5
×
10
‑2mol/L。4.根据权利要求1所述多细胞染色试剂组，其特征在于，染色试剂A中，调节盐C10包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钾；用于猫类的染色试剂A中，调节盐C10包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钾；渗透压范围是170mosmol/kg～210mosmol/kg；pH值为7.2～8.0；磷酸氢二钠浓度为4.3
×
10
‑2mol/L～6.0
×
10
‑2mol/L，磷酸二氢钾浓度为7.0
×
10
‑3mol/L～2.0
×
10
‑2mol/L。5.根据权利要求3或4所述多细胞染色试剂组，其特征在于，调节盐C10还包括NaCl；NaCl浓度为2.2
×
10
‑2mol/L～3.5
×
10
‑2mol/L。6.根据权利要求1所述多细胞染色试剂组，其特征在于，还包括稳定试剂B；稳定试剂B包括促染稳定剂B10、缓冲盐B20和水；稳定试剂B在染色试剂A与样本混合后使用；稳定试剂B中的促染稳定剂B10包括醛类物质。7.根据权利要求6所述多细胞染色试剂组，其特征在于，用于人类或犬类染色的稳定试剂B中，缓冲盐B20包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钾；渗透压范围是180mosmol/kg～240mosmol/kg；pH值为6.5～7.0；磷酸氢二钠浓度为2.5
×
10
‑2mol/L～6.0
×
10
‑2mol/L，磷酸二氢钾浓度为2.4
×
10
‑2mol/L～5.4
×
10
‑2mol/L；所述促染稳定剂B10包括甲醛和戊二醛；甲醛浓度为1.5
×
10

【专利技术属性】
技术研发人员：王志平，梅高接，汪椿树，
申请(专利权)人：深圳安侣医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：