一种用于大组织的快速透明染色试剂、透明化及染色方法技术

本发明专利技术公开了一种用于大组织的快速透明染色试剂、透明化及染色方法。快速透明染色试剂是由表面活性剂、辅助表面活性剂和N

【技术实现步骤摘要】
一种用于大组织的快速透明染色试剂、透明化及染色方法


[0001]本专利技术属于生物样品处理、组织标记和生物医学成像领域，具体涉及一种用于大组织的快速透明染色试剂、生物组织透明化及染色方法和应用。

技术介绍

[0002]组织光透明技术是利用有机试剂或去污剂等对生物组织进行处理，减弱生物组织对光的散射和吸收，然后利用高折射率溶液改变生物组织内部的折射率，从而提高光对生物组织的穿透，进而提高光学显微镜对生物组织的成像深度，有利于实现大体积生物组织的三维重构和神经环路解析。目前光透明技术最常用的有DISCO系列、CUBIC系列以及CLARITY系列。其中DISCO系列方法由于使用了有机试剂，虽然能实现较好的透明效果，但会淬灭生物组织的荧光信号。CUBIC系列方法对荧光信号友好，但是透明化过程耗时久，且会使生物组织产生较大的膨胀。CLARTIY系列透明度最好，其使用离子型表面活性剂处理，这使得生物组织发生严重的膨胀，且细胞膜结构被完全破坏，而且表面活性剂渗透入组织的速度很慢。

技术实现思路

[0003]为了解决
技术介绍
中的问题，本专利技术提出了一种适用于大组织的透明染色试剂，能够对生物组织进行快速的透明，并促进染色进程。此外，还可降低组织形变和荧光淬灭，获得良好的成像效果。
[0004]本专利技术采用的技术方案如下：
[0005]一、一种快速透明染色试剂
[0006]本专利技术的主要试剂成分有表面活性剂、辅助表面活性剂以及N
‑
丁基二乙醇胺，其中表面活性剂、辅助表面活性剂以及N
‑
丁基二乙醇胺与蒸馏水的质量体积比分别为5％
‑
25％、5％
‑
25％、10％
‑
40％。
[0007]所述表面活性剂包括但不限于十二烷基苯磺酸钠、CHAPS、TritonX
‑
100，其作用为破坏细胞膜结构，加速透明化进程，具有一定的脂质去除能力，且能够促进N
‑
丁基二乙醇胺对于组织的渗透。
[0008]所述的辅助表面活性剂包括但不限于辛二醇，正丁醇，己二醇，能够增强表面活性剂的渗透能力和脂质去除能力。
[0009]所述的N
‑
丁基二乙醇胺为市售产品，是主要的透明化成分，作用溶解脂质。
[0010]二、一种用于大组织的快速透明染色试剂的应用
[0011]针对离体生物组织透明化处理和组织标记中的应用，尤其是在大体积生物样品的透明化处理、染色中的应用。
[0012]三、一种透明化的染色方法，包括以下步骤：
[0013]A)生物组织的获取和固定；
[0014]B)将生物组织浸泡在透明化试剂中；
[0015]C)对生物组织进行染色；
[0016]D)待染色进程完成后，将生物组织转移到折射率匹配液中直到生物组织变得透明；
[0017]所述步骤A中，生物组织为离体的人与其他哺乳类动物的脑、外周神经、内脏器官、生殖器官、皮肤组织。
[0018]所述步骤B中，浸泡在恒定温度和振荡情况下进行，优选的温度为20
‑
60摄氏度，振荡速度为30
‑
100rpm/min。
[0019]所述步骤C中，染色采用免疫荧光染色、原位杂交染色、化学染料染色、免疫组化染色。
[0020]所述步骤D中，折射率匹配液采用CUBIC
‑
R(45％(w/v)安替比林，30％(w/v)烟酰胺)。
[0021]本专利技术的有益效果：
[0022]①
本专利技术所使用的透明化试剂成分简单，且可根据不同场景灵活选择；
[0023]②
本专利技术的方法简单易行，适用性广；
[0024]③
本专利技术提出的试剂能大大缩短在大组织研究中不可避免的免疫染色和透明过程的时间，相比于现有技术中的组织透明化试剂缩短了样品处理的时间；
[0025]④
相比于现有技术中的组织透明化试剂，本专利技术提出的试剂对组织形变小，不会产生明显的组织形变和微观结构破坏；
[0026]⑤
相比于现有技术中的组织透明化试剂，本专利技术提出的试剂荧光保留好。
附图说明
[0027]图1为固定分离后的小鼠脑片图片；
[0028]图2为试剂处理一天后的小鼠脑片图片；
[0029]图3为透明前后的小鼠脑片的形态变化的统计结果；
[0030]图4为固定分离后的小鼠全脑图片；
[0031]图5为试剂处理五天后的小鼠全脑图片；
[0032]图6为直接染色深度图片；
[0033]图7为试剂处理后染色深度图片；
[0034]图8为使用本专利技术的方法处理染色的生物组织的荧光保留效果图片；
[0035]图9为验证添加辅助表面活性剂使得渗透性增加的图片；
具体实施方式
[0036]下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步说明。
[0037]本专利技术的目的是提供一种用于大组织的快速透明染色试剂，该试剂本身的透明效果好，且处理后的生物组织渗透性大大增加，从而提高了抗体的渗透深度，使得毫米级甚至厘米级的大组织完整透明染色得以实现。
[0038]本专利技术用于大组织的快速透明染色试剂成分包含表面活性剂、辅助表面活性剂以及N
‑
丁基二乙醇胺。比例分别为5％
‑
25％、5％
‑
25％、10％
‑
40％。
[0039]可针对不同生物样品选择不同比例，对于厚度小于1mm的生物组织来说，所述试剂
中可含有5％
‑
20％(v/v)TritonX
‑
100、5％
‑
20％(w/v)CHAPS、5％
‑
20％(v/v)正丁醇、5％
‑
20％(v/v)1,2
‑
己二醇、10％
‑
30％(v/v)N
‑
丁基二乙醇胺，优选5％(v/v)TritonX
‑
100、10％(v/v)正丁醇和20％(v/v)N
‑
丁基二乙醇胺。
[0040]所述生物组织来自于离体的脑、心脏、肝脏、胰腺、肺、肠，但不限于以上所述。
[0041]所述生物组织可以是片状样品(厚度小于1mm)，也可以是完整的动物器官，如小鼠脑(尺寸约为1.5*1.2*1cm)。
[0042]本专利技术的具体实施步骤为：
[0043]A.样品的获取与固定；
[0044]B.根据样品配置透明染色试剂，用其孵育生物组织；
[0045]C.清洗样品，对处理后生物组织进行第一抗体的孵育；然后清洗样品，对处理后生物组织进行第二抗体的孵育；
[0046]D.孵育完成后，清洗样品，进行折射率匹配；
[0047]透明试剂处理、免疫染色之后的生物组织需要进行折射率匹配才能完成透本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于大组织的快速透明染色试剂，其特征在于，透明染色试剂是由表面活性剂、辅助表面活性剂和N
‑
丁基二乙醇胺溶于蒸馏水中形成的混合试剂。2.根据权利要求1所述的一种用于大组织的快速透明染色试剂，其特征在于：所述表面活性剂与蒸馏水的质量体积比为5％
‑
25％，所述辅助表面活性剂与蒸馏水的质量体积比为5％
‑
25％，所述N
‑
丁基二乙醇胺与蒸馏水的质量体积比为10％
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40％。3.根据权利要求1所述的一种用于大组织的快速透明染色试剂，其特征在于：所述表面活性剂包括但不限于十二烷基苯磺酸钠、CHAPS、TritonX
‑
100。4.根据权利要求1所述的一种用于大组织的快速透明染色试剂，其特征在于：所...

【专利技术属性】
技术研发人员：斯科，肖啸，龚薇，王子筝，
申请(专利权)人：之江实验室，
类型：发明
国别省市：