肺癌相关基因高通量扩增子文库的制备方法、多重PCR引物对及应用技术

本发明专利技术涉及高通量测序技术领域，尤其是涉及肺癌相关基因高通量扩增子文库的制备方法、多重PCR引物对及应用。(1)本发明专利技术能够通过一步多重PCR和一步产物磁珠纯化步骤即可完成肺癌相关基因文库制备，大大缩短了高通量测序文库的操作步骤和实验时间。由于不需要使用更多的PCR和纯化试剂，可以更大地降低实验成本。在减少PCR和磁珠纯化步骤的同时，降低了实验过程中样本多次加样和多次纯化带来的气溶胶污染，可以提高检测结果的准确性。(2)本发明专利技术含有双端标签序列，可以比只有单端标签序列的文库进行更严格的数据拆分质控，从而能降低拆分样本的数据污染，提高数据质控的准确性。(3)本发明专利技术制备的文库含有5

【技术实现步骤摘要】
肺癌相关基因高通量扩增子文库的制备方法、多重PCR引物对及应用
[0001]本专利技术为分案申请，母案申请号为2022115394195，主题名称为高通量扩增子文库的制备方法、多重PCR引物对及应用，申请日为2022年12月02日。


[0002]本专利技术涉及高通量测序
，尤其是涉及肺癌相关基因高通量扩增子文库的制备方法、多重PCR引物对及应用。

技术介绍

[0003]高通量测序(Next Generation Sequencing,NGS)技术由于可以对样本进行高通量、并行大规模测序，相比传统的一代测序、qPCR等技术，可以同时对更多基因组区域进行研究，且灵敏度更高、成本更低。扩增子测序(Amplicon Sequencing)方法是测序文库制备的一种，相比常规的杂交捕获文库则不需要经过基因组片段化、末端修复、3
’
加A尾、连接接头、探针杂交捕获、目标区域富集和产物纯化等繁琐的过程。研究者可以通过更短的时间、更低的成本，只对需要研究的基因区域进行扩增，即可获得目标区域文库产物，进行快速的高通量测序。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.肺癌相关基因扩增子文库的制备方法，其特征在于，使用多重PCR方法对样本中的肺癌相关基因进行扩增，而后仅经过一步纯化获得扩增子文库；所述多重PCR使用的引物对包括如下上游引物和下游引物：上游引物的核苷酸序列从5
’
端至3
’
端依次为：5
’‑
正向接头序列
‑
标签序列1
‑
正向测序引物序列
‑
肺癌相关基因扩增的特异性正向引物序列
‑3’
；下游引物的核苷酸序列从5
’
端至3
’
端依次为：5
’‑
反向接头序列
‑
标签序列2
‑
反向测序引物序列
‑
肺癌相关基因扩增的特异性反向引物序列
‑3’
；所述标签序列1和标签序列2为互相不同的6～10bp的核苷酸片段。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述正向接头序列如SEQ ID No：1所示；所述反向接头序列如SEQ ID No：2所示。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述正向测序引物序列如SEQ ID No：3所示；所述反向测序引物序列如SEQ ID No：4所示。4.根据权利要求1～3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述上游引物和/或下游引物的5
’
端具有磷酸化修饰。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，同一样本的肺癌相关基因的数量≥1；优选地，同一样本中肺癌相关基因的数量＞1，不同肺癌相关基因所使用的上游引物和下游引物具有相同的标签序列组合。6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，不同样本所使用的上游引物和下游引物具有不同的标签序列组合。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述样本包括来源于全血、血浆、唾液、组织、福尔马林固定样本、石蜡包埋样本或穿刺样本中的DNA样本或RNA样本。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述多重PCR反应程序依次包括：98℃下反应5min循环1次；98℃下反...

【专利技术属性】
技术研发人员：相学平，范贤，杨金龙，杜江丽，郑云飞，张文静，牛红梅，王诺，
申请(专利权)人：杭州布平医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：