一种组合型接头的选择验证和质控方法技术

本发明专利技术提供了一种针对现有技术中大量复杂的样本在测序时所需的建库接头选择、验证和质控的方法，该方法首先进行特异序列扩增，接着回收扩增产物进行标签接头扩增、跨平台建库，最后上机测序并拆分数据进行分析。本发明专利技术的方法只需要进行两次PCR扩增，并且同时适用于MGI测序仪和Illumina测序仪双平台，能够在简化实验流程、节约测序成本的同时保证检测质量。量。量。

【技术实现步骤摘要】
一种组合型接头的选择验证和质控方法


[0001]本专利技术涉及分子生物学领域，具体涉及高通测序仪的测序文库建库接头选择、验证和质控方案。

技术介绍

[0002]核酸序列是生命信息的载体，而高通量测序技术已成为生物和医学领域的核心技术之一。随着高通量测序技术成本减低和精确检测的大规模检测应用场景的需要，这种大规模检测应用的是遗传突变，相对应的体细胞突变检测低频突变，遗传突变是0、50％和100％三种突变分类。过去这种检测一般会使用一代测序，或由于先前对基因测序利用比较有限，导致基因组信息不清楚，不能有效的利用分子标记信息。
[0003]在HLA分型检测中，过去大部分用的是一代测序，然而一代测序在人力和财力上都是巨大的浪费，在大规模应用需求下已经是一种相对落后的手段。HLA(Human Leucocyte Antigen)即人类白细胞抗原，也称为主要组织相容性抗原，由位于人类6号染色体短臂上的基因复合体编码，该复合体是目前已知的最复杂的人类基因系统，在3600kb范围内含有224个基因座，每个基因座又分别含有多个等位基因。为了降低检测成本和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种针对组合型接头进行验证和质控的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)特异序列扩增：获取样本的基因组DNA，并用基因特异引物扩增固定的区域；(2)标签接头扩增：将标签引物组合，进行第二轮扩增；(3)跨平台建库：把Illumina文库用MGI建库接头构建混合文库；(4)上机测序和数据拆分：使用磁珠纯化文库，在MGI测序仪上进行测序，分析组合引物是否正确。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标签引物为双端唯一标签引物。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因特异引物共96组。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标签引物共包含96种P5端序列和40种P7端序列，混合成3840种组合。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述数据拆分按照MGI标签拆分数据。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述特异序列扩增的PCR反应体系为：10ng DNA样本、10μl多聚酶链反应混合液、1μlF端基因特异引物、1μlR端基因特异引物，并用水将体积填补到20μl。7.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡玉刚，章明晔，吴强，
申请(专利权)人：纳昂达南京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：