一种泰洛沙泊含量的HPLC测定方法技术

本发明专利技术公开了一种泰洛沙泊含量的HPLC测定方法，包括：分别配制泰洛沙泊惰化柱子溶液、泰洛沙泊对照品溶液、待测样品供试品溶液，泰洛沙泊惰化柱子溶液的浓度大于泰洛沙泊对照品溶液的浓度；先将泰洛沙泊惰化柱子溶液注入高效液相色谱仪对色谱柱进行特异性吸附；再分别对泰洛沙泊对照品溶液、待测样品供试品溶液进行高效液相分析，采用外标法测定待测样品中泰洛沙泊的含量。本发明专利技术泰洛沙泊含量的HPLC测定方法简单、快捷、准确性好、灵敏度高，大大缩短了检验用时，尤其适用于测定特强保湿润滑滴眼剂中泰洛沙泊的含量，有助于提高泰洛沙泊液体制剂的质量控制及用药安全性，可以作为评价含泰洛沙泊制剂质量的有效方法。含泰洛沙泊制剂质量的有效方法。含泰洛沙泊制剂质量的有效方法。

【技术实现步骤摘要】
一种泰洛沙泊含量的HPLC测定方法


[0001]本专利技术涉及一种泰洛沙泊含量的高效液相色谱法(HPLC)测定方法，具体涉及一种泰洛沙泊液体制剂中泰洛沙泊含量的HPLC测定方法，特别是涉及一种保湿润滑滴眼剂中泰洛沙泊含量的HPLC测定方法。

技术介绍

[0002]泰洛沙泊，英文名Tyloxapol，又名安利维尔、四丁酚醛、四丁酚醇、TRITON WR
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1339(高血脂造模剂)，CAS号：25301
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4。泰洛沙泊是一种烷基芳基聚醚醇类非离子液体聚合物，作为一种药用辅料，广泛应用于各种不同剂型、治疗不同病症的药物中，如用作液化时的表面活性剂、去除黏脓性的和支气管肺的分泌物，还可以抑制血浆脂解活性，从而分解富含三酰甘油的脂蛋白。
[0003][0004]专利技术人经过查询，中国、英国、欧洲等药典中未收录泰洛沙泊，美国药典收录了泰洛沙泊但没有给出含量检测的方法；文献中也未见有相关泰洛沙泊检测方法。随着泰洛沙泊在药物制剂中越来越广泛的应用，需要建立一种方便快捷的检测方法对药物中泰洛沙泊的含量进行快速检测。
[0005]高效液相色谱法是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。高效液相色谱法因其具有高压、高速、高效、高灵敏度、应用范围广、色谱柱可以反复使用、样品量需求少且容易回收等优势，已成为化工医药等学科领域中重要且十分成熟的一项技术，且因其长期的发展和使用，在安全性、合规性、成本上都优于气相色谱法等其它检测方法。
[0006]分子排阻色谱法也称作空间排阻色谱法(SEC)、凝胶色谱法。分子排阻色谱法利用多孔凝胶固定相的特点，充分利用凝胶孔隙的孔径大小与高分子样品分子线团尺寸这二者
[0023][0024]方法1：以流动相A(pH2.5 50mmol Buffer:乙腈＝90:10)为流动相，精密量取10μL0.6mg/mL泰洛沙泊溶液，注入液相色谱仪，连续进样两次，记录图谱(图1)，色谱图中有多个峰，无法确定目标峰。
[0025]方法2：以流动相B(pH2.5 80mmol Buffer)为流动相，精密量取10μL 0.6mg/mL泰洛沙泊溶液，注入液相色谱仪，记录图谱(图2)，泰洛沙泊出峰，保留时间为6.057min。精密量取10μL滴眼剂供试品溶液，注入液相色谱仪，记录图谱(图3)，该条件下泰洛沙泊(Rt＝6.038min)与相邻峰未达到基线分离，专属性不符合要求，可以在流动相B的基础上进一步优化方法，因此考虑增加一根同型号色谱柱以提高分离度。
[0026](4)、两根同型号色谱柱串联
[0027]溶剂(pH2.5 80mmol Buffer)，流动相B(pH2.5 80mmol Buffer)。
[0028]泰洛沙泊贮备液(3mg/mL)：精密称量泰洛沙泊约60mg，置于20mL量瓶中，加入适量溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0029]聚维酮溶液：精密称量聚维酮约25mg，置于50mL量瓶中，加入适量溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0030]滴眼剂供试品溶液：量取滴眼剂约2mL，经0.22μm PTFE滤膜过滤，取约2mL续滤液，置于10mL量瓶中，加入适量溶剂稀释至刻度，摇匀。
[0031]泰洛沙泊溶液(0.6mg/mL)：精密量取泰洛沙泊贮备液2mL，置于10mL量瓶中，加入适量溶剂稀释至刻度，摇匀。
[0032]高效液相色谱仪参数如下：
[0033]表2.方法3的液相色谱条件
[0034][0035]分别依次精密量取3mg/mL泰洛沙泊贮备液、0.6mg/mL泰洛沙泊供试品溶液、0.5mg/mL聚维酮溶液、滴眼液供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录图谱，分别对应图4、图5、图6、图7。由图4可知，高浓度下，泰洛沙泊贮备液(3mg/mL)连续两次进样，均未出峰；由图5可知，低浓度下，泰洛沙泊溶液(0.6mg/mL)连续两次进样，同样也未出峰；由图6和图7可知，聚维酮溶液和滴眼剂供试品溶剂分别连续两次进样，均检出聚维酮，未检出泰洛沙泊目标峰。因此，增加一根色谱柱后未检出目标峰，需进一步调整方法。
[0036](5)、供试品溶液浓度选择
[0037]方法3液相色谱条件下，泰洛沙泊供试品未出峰，专利技术人经分析发现色谱柱Welch XtimateSEC
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120的内部填料存在非特异性吸附位点，针对不同的目标物，需先配制一份高于目标浓度的样品，重复进样多次，对非特异性吸附位点进行吸附，然后进行正常进样，以确保后续正常浓度样品在走样时不因非特异性吸附位点的吸附而损失自身浓度。根据分析结果，先配制一份高于目标浓度(3mg/mL)的高浓度泰洛沙泊溶液用于对色谱柱进行饱和。
[0038]流动相B(pH2.5 80mmol Buffer)：称量NaH2PO4约24.96g，量取水2000mL，超声搅匀，用25％ H3PO4调节pH至2.50，超声搅匀即得。
[0039]溶剂(pH2.5 80mmol Buffer)：同流动相。
[0040]高浓度泰洛沙泊溶液(30mg/mL)：精密称量泰洛沙泊约600mg，置于20mL量瓶中，加入适量溶剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0041]泰洛沙泊贮备液(3mg/mL)：精密称量泰洛沙泊约60mg，置于20mL量瓶中，加入适量溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0042]聚维酮溶液：精密称量聚维酮约25mg，置50mL量瓶，加入适量溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀。
[0043]滴眼剂供试品溶液：量取滴眼剂约2mL，经0.22μm PTFE滤膜过滤，取约2mL续滤液，置10mL量瓶，加入适量溶剂稀释至刻度，摇匀。
[0044]泰洛沙泊溶液(0.6mg/mL)：精密量取泰洛沙泊贮备液2mL，置于10mL量瓶中，加入适量溶剂稀释至刻度，摇匀。
[0045]液相色谱仪参数如下：
[0046]表3.方法4的液相色谱条件
[0047][0048]精密量取10μL 30mg/mL泰洛沙泊供试品溶液，注入液相色谱仪，连续重复进样5次，对色谱柱进行特异性吸附后进行后续考察。
[0049]设置检测波长220nm，精密量取聚维酮溶液、3mg/mL泰洛沙泊贮备液、滴眼剂供试品溶液、0.6mg/mL泰洛沙泊溶液各10μL，分别依次注入液相色谱仪，每份样品重复进样2次，结果分别如图8、图9、图10、图11所示。由图8可知，聚维酮的保留时间为10.677min，图9可知，3mg/mL泰洛沙泊贮备液两次进样峰面积分别为289.1171mAU*min和285.2989mAU*min，保留时间分别为11.918min和11.915min，峰高分别为536.04mAU和529.37mAU。由图10可知，滴眼剂供试品检出目本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种泰洛沙泊含量的HPLC测定方法，其特征在于：包括：分别配制泰洛沙泊惰化柱子溶液、泰洛沙泊对照品溶液、待测样品供试品溶液，泰洛沙泊惰化柱子溶液的浓度大于泰洛沙泊对照品溶液的浓度；先将泰洛沙泊惰化柱子溶液注入高效液相色谱仪，对色谱柱进行特异性吸附；再分别对泰洛沙泊对照品溶液、待测样品供试品溶液进行高效液相分析，采用外标法测定待测样品中泰洛沙泊的含量。2.根据权利要求1所述的泰洛沙泊含量的HPLC测定方法，其特征在于：所述的泰洛沙泊惰化柱子溶液的配制：精密称量泰洛沙泊600mg，置于20mL量瓶中，加入适量缓冲液
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乙腈超声使溶解，加入缓冲液
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乙腈至刻度，摇匀，得到浓度为30mg/mL的泰洛沙泊惰化柱子溶液。3.根据权利要求1所述的泰洛沙泊含量的HPLC测定方法，其特征在于：所述的泰洛沙泊对照品溶液的配制：精密称量泰洛沙泊150mg，置于50mL量瓶中，加缓冲液
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乙腈适量，超声至全部溶解，静置至室温，加缓冲液
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乙腈稀释至刻度，摇匀，得到浓度为3mg/mL泰洛沙泊对照品溶液。4.根据权利要求2或3所述的泰洛沙泊含量的HPLC测定方法，其特征在于：配制泰洛沙泊惰化柱子溶液、泰洛沙泊对照品溶液时，超声的功率为200W。5.根据权利要求1所述的泰洛沙泊含量的HPLC测定方法，其特征在于：所述的待测样品供试品溶液的配制：量取待测样品，经0.22μm PTFE滤膜过滤，取2mL续滤液，置于10mL量瓶，加入适量缓冲液
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乙腈溶解，加入缓冲液
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乙腈至刻度，摇匀，得到待测样品供试品溶液。6.根据权利要求1或5所述的泰洛沙泊含量的HPLC测定...

【专利技术属性】
技术研发人员：谷丽，林娟，王鹏，
申请(专利权)人：南京樟益医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：