一种纤维蛋白溶酶原活化蛋白制造技术

本发明专利技术公开了一种纤维蛋白溶酶原活化蛋白，是从蚯蚓中分离提取的生物大分子，构成纤维蛋白溶酶原活化蛋白的氨基酸序列与SEQ ID No.1序列具有同源性。本发明专利技术通过提供的纤维蛋白溶酶原活化蛋白能够促进体内在纤溶作用、促进血栓溶解；不影响凝血和抗凝指标；对血液流变学指标有明显改善。变学指标有明显改善。变学指标有明显改善。

【技术实现步骤摘要】
一种纤维蛋白溶酶原活化蛋白


[0001]本专利技术涉及生物药物领域，特别涉及一种纤维蛋白溶酶原活化蛋白。

技术介绍

[0002]心脑血管疾病占据全世界死亡原因首位已经至少有20年了，2016年，造成最多死亡人数的前三类疾病为：心脑血管疾病—1760万；肿瘤—893万；慢性呼吸系统疾病—354万。
[0003]为此，科学家为寻求治疗血栓疾病的药物付出了极大的努力。目前应用于治疗血栓疾病主要有：链激酶、尿激酶、蛇毒蛋白、t
‑
PA。但未能改变这个现状。甚至2006年到2016年，全球心脑血管疾病造成的死亡人数还增加了14.5％。由此可见尚未有合适的产品应对严峻现实。
[0004]市场中针对心脑血管疾病的药物和保健品甚多，但是距离人类抵抗这类疾病的要求还远远不够。
[0005]1986年，日本科学家美源恒首次应用现代生物技术方法提取蚯蚓中溶栓活性成分。确认口服蚯蚓粗蛋白提取物对血栓溶解、预防血栓形成以及降低血液粘度等方面有效。并且分离了六种蛋白酶组分，申请了专利——US4,568,545。认为血栓溶解的活性组分就是这六个组分其中之一或几个的组合。这六个蛋白酶组分分别是：
[0006]F
‑
O
‑
HM
‑
45分子量：24,500
±
2,000道尔顿
[0007]F
‑
I
‑1‑
HM
‑
54分子量：27,500
±
2,000道尔顿
[0008]F
‑
I
‑2‑
HM
‑
15分子量：27,000
±
2,000道尔顿
[0009]F
‑
II
‑
HM
‑
64分子量：27,800
±
2,000道尔顿
[0010]F
‑
III
‑1‑
HM
‑
27分子量：32,400
±
2,000道尔顿
[0011]F
‑
III
‑2‑
HM
‑
89分子量：32,800
±
2,000道尔顿
[0012]在此基础上，我国科学家在90年代初推出了蚯蚓粗蛋白提取物口服溶栓胶囊，目前在我国有多家大型制药企业生产该类药物，如“江中制药”的“博洛克”、“青岛双龙”的“普恩复”等等。
[0013]在此之后，对蚯蚓中溶栓活性有效组分的确定方面有大量的研究工作。但是，蚯蚓中溶栓活性组分的最终确定的研究一直没有进一步的进展。使蚯蚓的药用功能进一步应用受到限制。

技术实现思路

[0014]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了如下的技术方案：
[0015]本专利技术提供了一种新的纤维蛋白溶酶原活化蛋白和该纤维蛋白溶酶原活化蛋白的应用。
[0016]本专利技术从蚯蚓中分离得到一种新的蛋白质，研究表明此蛋白没有直接降解纤维蛋白活力，该蛋白没有直接降解纤维蛋白活力，也没有蛋白酶的活性，但在体内有明显增强体
内纤溶作用、促进血栓溶解；对血液流变学指标有明显改善；而且不影响凝血系统和抗凝指标。使用该蛋白酶用于全身治疗可以溶解已生成的血栓和抑制血栓的生成，显示出强大的抗血栓活性。同时，该蛋白有改善微循环的作用。提供治疗由血栓形成引起的疾病和微循环障碍有关疾病的方法。
[0017]将这种蛋白酶命名为纤维蛋白溶酶原活化蛋白(PlasminogenActivatorProtein)。此蛋白的特征还在于氨基酸序列与SEQIDNo:1具有实质上的同源性，其氨基酸序列为：
[0018][0019][0020]术语纤维蛋白溶酶原活化蛋白也包括具有实质上与所说的蛋白同源的氨基酸序列并且能够促进体内在纤溶作用、促进血栓溶解；不影响凝血和抗凝指标；对血液流变学指标有明显改善的多肽的片段、修饰的多肽和肽。例如，氨基酸的沉默取代。其中所说的用结构上或化学上类似的氨基酸进行取代没有明显地改变多肽的结构、构象或活性，这是本领域公知的。
[0021]术语“纤维蛋白溶酶原活化蛋白”包括截短的多肽或者肽，其中从纤维蛋白溶酶原活化蛋白的一端或两端或多肽的内部区域除去一个或多个氨基酸，而产生的分子仍然保持原有的全部或部分作用活性，这一点也是公知的。
[0022]术语“纤维蛋白溶酶原活化蛋白”也包括加长了的多肽或肽。其中在纤维蛋白溶酶原活化蛋白多肽的一端或两至或中间位置加入一个或多个氨基酸，而产生的分子仍保持着原有的全部或部分作用活性。
[0023]纤维蛋白溶酶原活化蛋白多肽和肽片段的修饰也包含在术语纤维蛋白溶酶原活化蛋白的定义中。这样的修饰包括其它分子(包括但不限于天然和非天然存在的氨基酸)在特异性位点天然发生的氨基酸的取代。这样的取代可以改变纤维蛋白溶酶原活化蛋白的生物活性和产生生物或者药理上的激活剂或者抑制剂。(例如，经修饰后，多肽保持它的专一
性，其酶活性丧失，被用于抑制纤维蛋白溶酶原活化蛋白的目标物活性)术语纤维蛋白溶酶原活化蛋白也包括纤维蛋白溶酶原活化蛋白的N末端片段或末端的片段。
[0024]可以从蚯蚓中分离获得纤维蛋白溶酶原活化蛋白、可以从重组来源、从植入到动物或植物中的遗传上改变的细胞、肿瘤、细胞培养物和其它途径产生纤维蛋白溶酶原活化蛋白。或者通过化学或者生物合成方法(例如细胞培养、重组基因表达，肽合成和体外酶催化前体分子以产生具有活性的纤维蛋白溶酶原活化蛋白)产生纤维蛋白溶酶原活化蛋白。重组技术包括但不限于利用聚合酶链式反应(PCR)由DNA进行基因扩增和利用反转录酶/PCR的RNA 的基因扩增等。
[0025]可以通过本领域技术人员公知的自动多肽合成方法产生本专利技术的促进体内在纤溶作用多肽。
[0026]可以根据已知的氨基酸序列、密码子(三个核酸碱基的序列)与氨基酸的对应关系知识制备对应于(编码)纤维蛋白溶酶原活化蛋白和纤维蛋白溶酶原活化蛋白类似物核酸序列。由于遗传密码的简并性，在密码子中的三个碱基发生变化仍可能编码同一氨基酸，对于任何特殊的多肽或者肽片段都可以得到多种不同的碱基序列的核酸。
[0027]使用本领域公知的自动系统合成核酸序列，可以合成整个序列，或者合成一系列较短寡核苷酸，然后将这些寡核苷酸连接到一起产生全长序列。
[0028]此外，可以使用以N
‑
末端氨基酸序列为基础设计的寡核苷酸探针和公知的用于克隆物质的技术从基金库得到所说的核酸序列。
[0029]实验表明，可以通过向患有因血栓生成及微循环障碍有关疾病的患者，以足以溶解血栓的量包含纤维蛋白溶酶原活化蛋白或纤维蛋白溶酶原活化蛋白的组合物，用来治疗血管闭塞性疾病。包括脑血栓的形成，脑栓塞；心绞痛，心肌埂死；肺栓塞；高凝血症；周围动、静脉栓塞症。血栓形成引起的疾病或改善微循环的方法。本专利技术对急性缺血性心脑血管病、慢性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.纤维蛋白溶酶原活化蛋白，其特征在于，所述纤维蛋白溶酶原活化蛋白为从蚯蚓中分离提取的生物大分子，构成纤维蛋白溶酶原活化蛋白的氨基酸序列与SEQ ID No.1序列具有同源性。2.根据权利要求1所述的纤维蛋白溶酶原活化蛋白，其特征在于，所述纤维蛋白溶酶原活化蛋白是通过重组表达系统中重组表达产生。3.根据权利要求1所述的纤维蛋白溶酶原活化蛋白，其特征在于，还包括对所述纤维蛋白溶酶原活化蛋白的氨基酸序列中的部分氨基酸残基，采用替代、添加、消减、或者修饰方式中的一种或多种手段，在序列中的一处或多处进行处理，所获得的衍生物。4.根据权利要求3所述的纤维蛋白溶酶原活化蛋白，其特征在于，所述氨基酸序列的片段为拥有全部或部分纤维蛋白溶酶原活化蛋白活性的多肽，包括处理所获得的所述衍生物。5.权利要求1至4中任一项所述的纤维蛋白溶酶原活化蛋白的制备方法，其特征在于，在...

【专利技术属性】
技术研发人员：张益民，黄天平，张为民，
申请(专利权)人：湖北中吉之星健康管理有限公司，
类型：发明
国别省市：