本公开涵盖用一种或多种Yap突变变体从现有细胞产生细胞或组织的方法。在具体实施方案中，本公开涉及用一种或多种Yap突变变体治疗现有心肌细胞，所述治疗使所述现有心肌细胞分裂并产生新的心肌细胞。在特定情况下，所述Yap突变变体在Yap的1、2、3、4、5、6个或更多个丝氨酸处具有丝氨酸到丙氨酸的置换。酸处具有丝氨酸到丙氨酸的置换。酸处具有丝氨酸到丙氨酸的置换。
【技术实现步骤摘要】
作为Hippo效应子的显性活性Yap诱导染色质可及性和心肌细胞更新
[0001]本申请是申请日为2018年3月14日、专利技术名称为“作为Hippo效应子的显性活性Yap诱导染色质可及性和心肌细胞更新”的中国专利技术专利申请No.201880025311.X的分案申请。
[0002]本申请要求2017年3月14日提交的美国临时专利申请62/471,204的优先权，该临时专利申请通过引用整体并入本文。关于联邦政府资助的研究或开发的声明
[0003]本专利技术是在国立卫生研究院(NIH)授予的HL 127717下受政府支持完成的。政府享有本专利技术的某些权利。
[0004]本公开的实施方案至少涉及细胞生物学、分子生物学、生物化学、心脏病学和医学领域。
技术介绍
[0005]C
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年代测定实验表明，人类心肌细胞的完整来源建立在出生的第一个月内并且成体心肌细胞以每年约1％的速率更新1。成体小鼠心肌细胞具有类似低的更新速率2。Hippo通路是进化上保守的激酶级联，该激酶级联导致转录辅助激活因子Yap被大肿瘤抑制因子(Lats)1和2激酶磷酸化且抑制3。出生后缺失Hippo通路组分可适度地增加CM更新，就如同表达具有单个丝氨酸(S)到丙氨酸(A)突变的活性形式的Yap可增加CM更新一样4‑7。
[0006]Lats1/2通过使5个共有NDR(核Dbf2相关)激酶家族基序HXRXXS的S残基磷酸化来抑制Yap。体外报告基因测定显示，虽然许多Hippo抑制是通过S127磷酸化(在人类中为S127，在小鼠中为S112)进行的，但其他S磷酸化事件也有助于Yap抑制8。
[0007]本公开满足心肌细胞更新领域的长期需求，包括对心脏修复的长期需求。
技术实现思路
[0008]本公开的实施方案包括用于任何类型的组织更新的方法和组合物，所述任何类型的组织更新包括例如在心脏、视网膜、中枢神经系统的神经元和耳部毛细胞中的组织更新。本公开的实施方案包括与细胞再生相关的方法和组合物，包括用于治疗哺乳动物个体(诸如人、狗、猫、马等)的一种或多种病症的方法和组合物。本公开的实施方案包括用于使一个或多个有需要的个体中的细胞再生的方法和组合物。所述个体可能患有需要细胞再生的任何种类的病症或易患所述病症或存在患所述病症的风险。在具体实施方案中，提供了与心肌细胞、视网膜细胞、中枢神经系统的神经元或耳部(包括内耳或外耳)的毛细胞的再生相关的方法和组合物，包括用于治疗哺乳动物个体的一种或多种病症的方法和组合物。在针对视网膜的特定情况下，将Yap突变体暴露于米勒胶质细胞(Muller glial cell)中，使这些细胞分化成视网膜神经元。在心肌细胞再生的情况下，个体可能患有心脏病症或有心脏病症的风险。个体可能因以下因素而有患心脏病症的风险：个人和/或家族病史、其为吸烟者、肥胖或超重，以及这些因素的组合等等。
[0009]在具体实施方案中，所述方法和组合物涉及一种或多种Yap突变体。在某些实施方案中，一种或多种Yap突变体具有促进细胞(包括心肌细胞视网膜细胞、中枢神经系统的神经元或耳部毛细胞)更新的活性，所述细胞更新使得任何相关医学病症得到改善。在替代实施方案中，所述一种或多种Yap突变体可改善任何医学病症但无法可检测地促进细胞更新。然而，在具体实施方案中，一种或多种Yap突变体刺激整体染色质重构以促进细胞更新。在特定情况下，所述突变体是具有1、2、3、4、5、6个或更多个氨基酸置换的Yap突变体。置换可以在或可以不在丝氨酸处，并且在一些情况下置换是某一种氨基酸置换为丙氨酸。在特定方面中，作为实例，成体心肌细胞中在Lats激酶的主要磷酸化位点处具有五个丝氨酸到丙氨酸的置换的突变体Yap5SA刺激整体染色质重构，从而促进心肌细胞更新。此类Yap突变体或其他Yap突变体可类似地用于促进视网膜或毛细胞更新。Yap突变体可以作为多核苷酸或多肽提供给个体。
[0010]前面已经相当广泛地概述了本专利技术的特征和技术优势，以便可以更好地理解后面对本专利技术的详细描述。下文将会描述构成本专利技术权利要求的主题的本专利技术的其他特征和优点。本领域的技术人员应该认识到，所公开的概念和具体实施方案可以容易地用作修改或设计用于实现本专利技术相同目的的其他结构的基础。本领域的技术人员还应该意识到，此类等同构造并不脱离如所附权利要求中所阐述的本专利技术的精神和范围。当结合附图考虑时，根据以下描述可以更好地理解被认为是本专利技术特色的有关其组织和操作方法的新颖特征，以及其他目的和优点。然而，应该清楚地理解，提供每幅附图仅仅是为了说明和描述的目的，而非旨在作为对本专利技术的限制的定义。
附图说明
[0011]为了更全面地理解本专利技术，现结合附图对以下描述进行参考，附图中：
[0012]图1A
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1E.Yap5SA转基因的设计和表达。图1A.(上)条件Yap5SA等位基因的结构。(下)过表达的Yap变体的人蛋白序列，其中加下划线的丝氨酸残基突变为丙氨酸。图1B.在发育中的心脏中具有GFP表达的代表性e9.5 Tg(Jojo_Flag::Yap5SA)5JFM小鼠。图1C.取自P0新生小鼠的对照和转基因心脏中GFP荧光的图像。图1D.(左上)在成体CM中表达Yap5SA的繁育和诱导策略。(左下)显示FlagYap5SA表达的蛋白质印迹(Western Blot)。左侧为分子量标记。(右)通过蛋白质印迹对Yap表达的定量显示为平均值+/
‑
SEM。n＝3只小鼠/基因型。图1E.用抗Yap抗体和DAPI染色的经分离的对照和Yap5SA OE心肌细胞的免疫荧光图像。(右)Yap免疫荧光的核/细胞溶质比的定量显示为平均值+/
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SEM。所有统计数据通过ANOVA与Bonferroni事后检验获得。对照n＝3个心脏，60个细胞。Yap5SA n＝3个心脏，67个细胞；
[0013]图2A
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2J.Yap5SA OE小鼠的向心性心力衰竭和死亡。图2A.代表对照(n＝8)和Yap5SA OE(n＝7)小鼠的Kaplan Meier存活率分析。统计数据通过Mantel
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Cox检验来计算。图2B.来自对照和濒死期Yap5SA心脏的Masson三色染色(第7天)。图2C.在第四次注射他莫昔芬(tamoxifen)之前和一天之后同一动物中左心室的代表性B型图像。图2D
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2E.在收缩期(图2D)和舒张期(图2E)，左心室后游离壁厚度。图2D
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2E显示为平均值+/
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SEM。(之前Yap5SA n＝7，之前对照n＝6，之后Yap5SA n＝10，之后对照n＝9)通过ANOVA与Bonferroni事后检验来计算统计数据。图2F.在第四次注射他莫昔芬之前和一天之后，对照和Yap5SA OE心脏的代表性M模式超声心动图(M
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mode echocardiography)。图2G.收缩末期左心室腔直径。图
2H.舒张末期本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.SEQ ID NO:1所示的人Yap蛋白的突变变体在体外再生心肌细胞的方法中的用途，其中SEQ ID NO:1的位置61、109、127、164和381处的丝氨酸被丙氨酸取代。2.编码SEQ ID NO:1所示的人Yap蛋白的突变变体的多核苷酸在体外再生心肌细胞的方法中的用途，其中SEQ ID NO:1的位置61、109、127、164和381处的丝氨酸被丙氨酸取代。3.SEQ ID NO:1所示的人Yap蛋白的突变变体在制备用于再生心肌细胞的制剂中的用途，其中SEQ ID...
【专利技术属性】
技术研发人员：T，
申请(专利权)人：贝勒医学院，
类型：发明
国别省市：
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