冠状病毒即时检验凝集测定制造技术

本说明书提供了用于快速检测SARS

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】冠状病毒即时检验凝集测定
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年8月14日提交的美国临时专利申请63/065,993的权益，其全部内容以引用方式并入本文。

技术介绍

[0003]有许多已用于检测个体的病毒感染的测定技术。虽然已经开发并且正在开发针对COVID
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19的病原体SARS
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CoV
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2的多种测定，但这些测定中的许多测定需要实验室、复杂的装备、受过专门培训的人员以及大量时间来进行测定。这些要求限制了此类测定用于快速鉴定可能在公共集会上传播COVID
‑
19的感染个体的有用性。

技术实现思路

[0004]需要用于检测和/或定量COVID
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19的病原体SARS
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CoV
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2病毒的即时检验(point
‑
of
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care,POC)测定。本文公开了用于快速POC测定的试剂和方法，无论何时可遇到可能感染的个体，都可以进行所述快速POC测定，其中所述测定可以在几分钟(例如，5分钟)内完成，并产生视觉上可检测的结果。该测定只需要来自被测对象的唾液样品。
[0005]在另外的实施方式中，该测定程序可以适用于临床实验室，在所述临床实验室中例如在96孔板中并行处理多个样品以实现高通量。在这些实施方式的一个方面中，可以定量样品中的病毒量。
[0006]所公开的测定使用包被有抗SARS
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CoV
>‑
2表面抗原的抗体的珠粒，在SARS
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CoV
‑
2存在下所述珠粒会发生凝集。在一些实施方式中，抗体识别SARS
‑
CoV
‑
2的S1或S2刺突蛋白。在一些实施方式中，该抗体识别S1刺突蛋白的受体结合结构域(receptor binding domain,RBD)。在一些实施方式中，该抗体识别S1刺突蛋白的N末端结构域(N
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terminal domain,NTD)。在一些实施方式中，该抗体是中和抗体。在其他实施方式中，该抗体所识别的表面抗原是血凝素蛋白、基质(matrix,M)蛋白或包膜(envelope,E)蛋白。在一些实施方式中，通过竞争性ELISA测得，中和抗体的IC50为3
‑
4nM。
[0007]在一些实施方式中，珠粒是胶乳珠粒。在一些实施方式中，珠粒是磁性珠粒。在一些实施方式中，珠粒具有深或强颜色。
[0008]在一些实施方式中，珠粒是荧光的。在一些实施方式中，珠粒是用荧光素酶或其他发光剂标记的。在仍其他实施方式中，珠粒是用任何其他产生视觉上或分光光度法可检测的信号的试剂标记的。
[0009]在一些实施方式中，珠粒的直径为1.3μm至1.9μm或约0.55μm至约2.7μm。在一些实施方式中，珠粒的直径为约550nm。在一些实施方式中，珠粒的直径为约1.6μm。在一些实施方式中，珠粒的直径为约2.7μm。这些直径大小是指在添加链霉亲和素、抗体或其他包衣或修饰之前的珠粒直径。
[0010]在一些实施方式中，珠粒是链霉亲和素化的。在一些实施方式中，珠粒是羧基珠粒，并且链霉亲和素使用1
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乙基
‑3‑
(3
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二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)化学共价附接至所
述珠粒。在一些实施方式中，抗体是生物素化的并通过生物素
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链霉亲和素结合包被到链霉亲和素珠粒上。在一些实施方式中，抗体包衣包含25μg抗体/mg珠粒至35μg抗体/mg珠粒。在一些实施方式中，抗体包衣包含30μg抗体/mg珠粒。
[0011]在一些实施方式中，抗SARS
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CoV
‑
2抗体用除链霉亲和素以外的另一种亲和试剂缀合至珠粒。在各种实施方式中，缀合亲和试剂是蛋白A、蛋白G和抗Fc抗体、抗物种Ig抗体(例如，山羊抗兔Ig或兔抗小鼠Ig)、或抗标记抗体(例如，识别生物素、荧光素、葡聚糖等的抗体)，具体取决于抗SARS
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CoV
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2抗体的性质和该抗体已经进行的修饰。
[0012]在一些实施方式中，抗体使用EDC化学直接附接至羧基珠粒。在一些实施方式中，抗体直接附接至甲苯磺酰基活化的珠粒或环氧树脂活化的珠粒。
[0013]基本检测程序包括将经抗SARS
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CoV
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2表面抗原的抗体包被的珠粒与来自待测试SARS
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CoV
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2感染的受试者的唾液样品组合；混合所述珠粒和所述唾液样品以形成混合物；孵育所述混合物；以及检测是否已发生凝集。在一些实施方式中，孵育进行约5分钟。在一些实施方式中，孵育在室温下进行。在其他实施方式中，孵育于37℃下进行。
[0014]在基本检测程序的变型中，将经抗SARS
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CoV
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2表面抗原的抗体包被的珠粒与来自待测试SARS
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CoV
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2感染的受试者的唾液样品在多孔板中组合；将所述珠粒在室温下孵育1
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10分钟(例如，5分钟)；并将所述板置于平板摇床中达某一时段。在一些实施方式中，该时段是5分钟。在一些实施方式中，摇床处于室温下。在其他实施方式中，平板摇床处于37℃下。在一些实施方式中，使用线性振荡运动。在一些实施方式中，振荡是快速的，例如，约1000次循环/分钟。
[0015]在一些实施方式中，唾液样品包含在口腔冲洗流体中。该口腔冲洗流体可以通过用盐溶液(例如，0.9％盐溶液)鼓漱并吐出到收集器皿中来获得。在一些实施方式中，使用5mL的盐水溶液进行冲洗。在一些实施方式中，进行鼓漱30秒。
[0016]或者，在一些实施方式中，鼻拭子或鼻咽拭子试样是通过在流体中搅动拭子以分散试样中存在的任何病毒而收集在盐水溶液或其他运送介质中的。在另一种变型中，将拭子在含有唾液样品的口腔冲洗溶液中搅动，以便可以检测到其中存在的病毒。该运送介质可以是Universal Transport Medium
TM
(Copan Diagnostics,Inc.Murrieta,CA)，是一种室温下稳定的病毒运送介质，其用于病毒和其他感染性试样的收集、运送、维持和长期冷冻储存，所述病毒运送介质由汉克平衡盐溶液、牛血清白蛋白、L
‑
半胱氨酸、明胶、蔗糖、L
‑
谷氨酸、HEPES缓冲液、酚红、蔗糖、万古霉素、两性霉素B和粘菌素组成。该介质是等渗的，并且对哺乳动物宿主细胞无毒。
[0017]在一些实施方式中，每个个体的唾液样品通过检测与收集分开处理。在一些实施方式中，将来自多个个体的混合物或其等分试样在混合或孵育步骤后被转移到多孔板的单独孔中，并且在酶标仪或微微阵列数字读取器中进行检测。在一些实施方式中，在孵育步骤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种检测一个或多个个体的SARS
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CoV
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2感染的方法，所述方法包括：a)将经抗SARS
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CoV
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2表面抗原的抗体包被的珠粒与来自所述一个或多个个体中的每个个体的唾液样品单独组合以形成与每个个体对应的混合物；b)混合每个个体的混合物的所述珠粒和唾液样品；c)孵育所述混合物；以及d)检测每个个体的混合物中是否已发生凝集。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述表面抗原是S1或S2刺突蛋白。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述抗体识别所述S1刺突蛋白的受体结合结构域或N末端结构域(NTD)。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的方法，其中所述唾液样品包含在口腔冲洗流体中。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述口腔冲洗流体是通过以下方式获得的：使所述一个或多个个体中的每个个体在其口腔中鼓漱盐水溶液，然后吐出到收集器皿中，由此获得所述口腔冲洗流体。6.根据权利要求4或5所述的方法，其中所述经抗SARS
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CoV
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2表面抗原的抗体包被的珠粒是有色的并且具有深或强的色度。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述经抗SARS
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CoV
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2表面抗原的抗体包被的珠粒是磁性的。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的方法，其中所述经抗SARS
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CoV
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2表面抗原的抗体包被的珠粒是链霉亲和素化的。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述抗体是生物素化的并且生物素部分与链霉亲和素结合。10.根据权利要求1
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9中任一项所述的方法，其中所述经抗SARS
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CoV
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2表面抗原的抗体包被的珠粒的直径为1.3μm至1.9μm。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述经抗SARS
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CoV
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2表面抗原的抗体包被的珠粒的直径为1.6μm。12.根据权利要求1
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9中任一项所述的方法，其中所述经抗SARS
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CoV
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2表面抗原的抗体包被的珠粒的直径为2.7μm。13.根据权利要求1
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12中任一项所述的方法，其中所述经抗SARS
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CoV
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2表面抗原的抗体包被的珠粒包含25μg抗体/mg珠粒至35μg抗体/mg珠粒。14.根据权利要求13所述的方法，其中所述经抗SARS
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CoV
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2表面抗原的抗体包被的珠粒包含30μg抗体/mg珠粒。15.根据权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：乔舒亚，
申请(专利权)人：维拉维斯公司，
类型：发明
国别省市：