用于分析和治疗用途的抗原特异性抗体的富集制造技术

本发明专利技术涉及用于使用包含含有如本文所述的捕获部分的表面的颗粒(例如，微米微粒、纳米微粒；磁性的、非磁性的)在诊断测试或分离并用于预防或治疗目的之前去除如本文所述的干扰物或富集生物标志物，尤其是抗体。尤其是抗体。尤其是抗体。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于分析和治疗用途的抗原特异性抗体的富集
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年4月10日提交的美国临时专利申请号63/008,472的优先权权益，该美国临时专利申请的全部内容以引用方式并入本文。


[0003]本公开涉及用于使用包含含有如本文所述的捕获部分的表面的颗粒(例如，微米颗粒、纳米颗粒；磁性的、非磁性的颗粒)以分离抗原特异性抗体以供用于后续的分析、预防或治疗用途的方法。

技术介绍

[0004]实验室测试在健康评定、医疗保健以及最终公众健康方面发挥着至关重要的作用，并且影响处于每个生命阶段的人。几乎每个人都会在其一生中经历一次或多次的实验室测试。据估计仅在美国每年就进行了70亿到100亿次实验室测试，并且实验室测试结果影响了约70％的医疗决策。
[0005]此外，由于联邦医疗保险和医疗补助服务中心(Centers for Medicare and Medicaid Service,CMS)于2018年1月1日根据《保障医疗保险法案》(Protecting Access to Medicare Act,PAMA)的要求实施了新的临床实验室费用表(Clinical Laboratory Fee Schedule,CLFS)，PAMA正在减少实验室测试补偿。更加重要的是，实验室结果首次准确，故障排除工作减少或花费更少的时间，不会影响实验室工作流程。
[0006]干扰物是存在于患者试样中的物质，所述物质可改变诊断测试结果的正确值(例如通过干扰抗体结合)，或者可以通过桥接、空间位阻或自身抗体机制增加或减少测定信号。虽然已知免疫测定易受干扰物影响，但是如果仪器(分析仪)或实验室未识别和标记错误结果，或者如果医生未通知实验室患者结果不符合临床情况，则临床实验室仍可报告此类结果。在没有切实可行的手段来提前识别任何可能导致问题的样本，则使用此类样本时可能会意外出现错误结果。这种干扰物的后果是错误结果可导致假阴性和假阳性的测试结果，这可影响患者护理，并且可导致不必要的侵入性诊断或治疗程序，或治疗患者失败。
[0007]临床实验室中有很多样品特异性干扰物来源，例如样品类型(即血浆)、残留(carry
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over)、冻/融、稳定性、溶血、黄疸、脂血症、抗凝剂的影响、样品储存、结合蛋白、药物和药物代谢物、和交叉反应性。然而，嗜异性抗体干扰物，例如人抗动物抗体(human anti
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animal antibody,HAAA)和人抗小鼠抗体(human anti
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mouse antibody,HAMA)干扰物是麻烦且有问题的，因为它们难以检测并且可影响患者管理。
[0008]尽管干扰物会引起并发症，但是生物标志物筛选和诊断测试是困难的，例如因为它们在生物样品中的低存在量或丰度。
[0009]因此，虽然在体内发现的生物标志物可用于检测、预测或管理疾病，但是发现许多生物标志物的丰度太低，以至于现今无法使用商业上可用的测试来检测。临床上对新诊断技术的需求尚未得到满足，该新诊断技术制备临床样品以提高测试准确性、测量难以发现
的生物标志物、降低成本并最终挽救生命。
[0010]生物素，也称为维生素B7，是一种水溶性B族维生素，常见于复合维生素和非处方保健和美容补充剂中。采用链霉亲和素
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生物素结合机制的体外实验室诊断测试有可能受到高循环生物素浓度的影响。生物素可以通过共价键附接至各种靶标—从大抗体到类固醇激素—对它们与亲和素、链霉亲和素或中性抗生物素蛋白的特异性非共价结合影响最小。因此，生物素已经被频繁地用于不同形式的免疫测定的检测系统中。
[0011]免疫测定通常分为夹心免疫测定(非竞争性)或竞争性抑制免疫测定。通常，在测定孵育期间使用链霉亲和素
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生物素结合将夹心免疫测定中的生物素化的抗体或竞争性免疫测定中的生物素化的抗原与链霉亲和素包被的表面偶联。当生物试样含有过量的生物素时，生物素会与所述生物素化的抗体或所述生物素化的抗原竞争结合链霉亲和素包被的表面，从而导致生物素化的抗体或生物素化的抗原的捕获减少。过量的生物素会在夹心免疫测定中产生假低结果，因为测定信号与分析物浓度成正比。竞争性免疫测定中过量的生物素会导致假高结果，因为测定信号与分析物浓度成反比。
[0012]来源于饮食和正常代谢的生物素的正常循环浓度太低(<1.2ng/mL)以至于无法干扰生物素化的免疫测定。然而，摄入高剂量的生物素补充剂(例如，5mg或更高)可导致显著升高的血液浓度，该显著升高的血液浓度可干扰常用的生物素化的免疫测定。一些研究已表明，对于每天服用20mg生物素的补充剂的受试者，生物素的血清浓度可在摄入生物素后的第一个小时内达到高达355ng/mL，而对于单剂量摄入300mg生物素的受试者，血清浓度达到高达1160ng/mL。根据FDA，取决于测定的设计，从摄入高水平生物素的患者采集的血液或其他样品中的生物素可导致基于生物素的免疫测定中的假高结果或假低结果。
[0013]取决于测定的设计，从摄入高水平生物素的患者采集的血液或其他样品中的生物素可导致基于生物素的免疫测定中的假高结果或假低结果。不正确的测试结果可导致不适当的患者管理以及误诊。
[0014]生物素干扰物阈值在不同的测定中差异很大，即使在单一平台上也是如此。生物素干扰物阈值<51ng/mL的测试被认为是高风险测试、或脆弱的免疫测定和竞争方法。
[0015]基于生物素的测试也易受与用于捕获已缀合至抗体、蛋白质或抗原的生物素的测试设计中链霉亲和素的使用相关的干扰机制的影响，或易受与抗链霉亲和素干扰物相关的干扰机制的影响。抗链霉亲和素抗体和蛋白质可显著干扰某些实验室测试并导致不正确的测试结果。与取决于测定设计和形式而导致降低的测试信号和假低或假高患者结果的生物素干扰物类似，抗链霉亲和素干扰物也会导致降低的测试信号，但是是经由不同的机制，因此所述抗链霉亲和素干扰物可能被误认为是生物素干扰物。尽管抗链霉亲和素抗体的原因尚不完全清楚并且存在争议，但是一种可能的原因可能来自细菌亲和素链霉菌(S.avidinii)。人们认为，许多人在日常生活中暴露于这些细菌，并可能发展出对所述细菌的免疫反应。
[0016]因此，存在对用于在诊断测试之前消除或最小化样品干扰物并富集生物标志物浓度，而不会影响实验室工作流程和周转时间的简单、廉价、可自动化和有效的解决方案的临床需求。

技术实现思路

[0017]本文描述了用于简单、有效和成本有效地调适生物样品以管理和减轻多种可导致错误的测试结果和增加的患者安全性风险的已知样品特异性干扰物(例如在已用单克隆小鼠抗体治疗或已出于诊断目的接受单克隆小鼠抗体的患者体内的的异嗜性抗体)的方法。本文所述的方法还可以管理和减轻由生物素引起的样品特异性干扰，该生物素可来自消费者为健康和美容以及减肥或治疗(例如，治疗多发性硬化症)而服用的非处方(over the coun本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种从生物样品中分离抗原特异性抗体的方法，所述方法包括：a)将所述样品与包含用于所述抗原特异性抗体的捕获部分的第一颗粒组合以提供混合物；b)混合所述混合物以提供与生物标志物的颗粒复合物；和c)从所述生物样品中分离出所述颗粒从而从所述生物样品中分离出所述抗体。2.根据权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括从所述颗粒解离所述抗原特异性抗体。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述解离包括从所述第一颗粒切割或洗脱所述抗体。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述方法进一步包括对所述释放的抗体进行表征。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述表征包括与缀合至可检测标记的抗免疫球蛋白抗体形成复合物。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述可检测标记是荧光标记。7.根据权利要求4至6中任一项所述的方法，所述方法进一步包括将与所述抗原特异性抗体相关的信号与免疫球蛋白的标准曲线进行比较。8.根据权利要求5至7中任一项所述的方法，其中所述抗免疫球蛋白抗体不是同种型特异性的。9.根据权利要求5至7中任一项所述的方法，其中所述抗免疫球蛋白抗体是同种型特异性的。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述同种型特异性抗免疫球蛋白抗体包含各自缀合至不同的标记的抗IgA、抗IgG和抗IgM中的至少两者。11.根据权利要求1所述的方法，所述方法进一步包括预处理，所述预处理包括a)将生物样品与包含用于干扰物的捕获部分的第二颗粒组合以提供混合物；b)混合所述混合物以提供与所述干扰物的第二颗粒复合物；c)去除或消除所述第二颗粒复合物以提供经耗竭...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔舒亚，
申请(专利权)人：维拉维斯公司，
类型：发明
国别省市：