用于检测和贫化样品干扰物的组合物和方法技术

本发明专利技术提供了对抗链霉亲合素物质干扰和抗生物素物质干扰具有特异性的试剂和微粒结合表面的制备方法。还公开了在诊断测试之前如何使用试剂和微粒结合表面来阻断、贫化样品中的抗链霉亲合素物质干扰和抗生物素物质干扰或将其浓度降低至低于测定阻断阈值(ABT)。或将其浓度降低至低于测定阻断阈值(ABT)。或将其浓度降低至低于测定阻断阈值(ABT)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测和贫化样品干扰物的组合物和方法
[0001]与相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年4月7日提交的美国临时申请No.63/006,630和2019年6月25日提交的No.62/866,318的优先权，每个所述临时申请的全部内容通过参考并入本文。

技术介绍

[0003]每9分钟就有一人因诊断错误或延迟而死亡[1]。医生依靠诊断测试来指导治疗，但由于血液或尿液中的多种干扰物(例如血液测试中的生物素)，2％或更多的测试可能不准确[2]。
[0004]也被称为维生素B7、维生素H和辅酶R的生物素是一种水溶性维生素，常常以高剂量存在于非处方(OTC)膳食补充剂、复合维生素和产前维生素中。生物素主要用于健康和美容，包括头发、皮肤和指甲生长以及减肥。它也以高治疗剂量提供给患者以治疗某些医学病症，例如多发性硬化症。然而，生物素会显著干扰某些实验室测试并导致不正确的测试结果，可能变得未检测到并可能导致误诊或延误治疗[3
‑
13]。
[0005]2017年，FDA因不良事件的数量与不准确的测试结果和生物素补充有关而发布了安全警告[14]。2019年6月13日，FDA发布了一份关于“在体外诊断装置中生物素干扰的测试”(Testing for Biotin Interference in In Vitro Diagnostic Devices)的指导文件草案的通知[15]。
[0006]体外诊断(IVD)公司正积极工作以重新设计或重新制定它们的测试，以减轻生物素干扰或提高生物素干扰阈值，使得需要高得多的生物素浓度才能干扰测试。然而，这些基于生物素的测试仍然容易受到与生物素或患者使用生物素或抗生物素干扰物相关的二次干扰机制[16
‑
17]以及与在测试设计中使用链霉亲合素捕获已被偶联到抗体、蛋白质或抗原的生物素或抗链霉亲合素干扰物相关的干扰机制[18
‑
26]的影响。
[0007]抗生物素和抗链霉亲合素抗体和蛋白可以显著干扰某些实验室测试并引起不正确的测试结果。与引起测试信号降低或取决于测定法设计和格式引起假低或假高患者结果的生物素干扰物相似，抗生物素物质和抗链霉亲合素干扰物也引起测试信号降低但机制不同，因此它们可能被误认为是生物素干扰物[16
‑
26]。
[0008]尽管FDA最近提供了指导要求IVD公司应按照临床和实验室标准协会(CLSI)标准中的建议测试浓度高达1200ng/mL的生物素干扰物，并且为了反映当前生物素消费的趋势，但对于与由人类抗生物素或人类抗链霉亲合素干扰物造成的不准确测试结果相关的不良事件，FDA尚未发布安全警告[15]。尽管人类抗链霉亲合素和人类抗生物素干扰物在文献中已有报道，但很难检测和确认这些特定干扰物的机制或将它们与生物素干扰物区分开。
[0009]用固定化或共价偶联到捕获部分或干扰物特异性靶的结合表面(即磁性珠子、非磁性珠子、纳米粒子、微量滴定板/孔、比色杯、载片、传感器、芯片、杆、滤膜、膜、试管或用于加工样品的任何其他固相)进行的样品预处理，可用于在诊断测试之前贫化、富集和/或表征样品干扰物或生物标志物，以提高测试结果的质量和准确性[27]。

技术实现思路

[0010]很大比例的IVD测定法利用链霉亲合素
‑
生物素结合。这些测定法受到来自于游离生物素和竞争或以其他方式干扰测定试剂与链霉亲合素或生物素之间的结合的试剂、包括抗链霉亲合素抗体和抗生物素抗体的嗜异性干扰的影响。干扰测定试剂与链霉亲合素或生物素之间的结合的物质在本文中被称为抗生物素物质或抗链霉亲合素物质，不论所述物质是否是抗体。本文公开的试剂(珠子)可用于：1)检测或量化这些不同类型的干扰物，和2)除去或贫化可能存在于测定试剂、样品或反应混合物中的干扰性物质，以便可以获得更准确的测定结果。还提供了制备和使用这些试剂的方法。
[0011]某些本文公开的试剂包含已用链霉亲合素包被的纳米粒子，以形成链霉亲合素珠子。在某些实施方式中，一些或所有所述链霉亲合素被共价偶联到所述纳米粒子。在某些实施方式中，所述纳米粒子是磁性的，以便于从储存溶液和处理过的样品、测定试剂等分离所述珠子。在某些实施方式中，所述纳米粒子可以是磁性也可以不是磁性的，并且所述珠子与储存溶液和处理过的样品的分离通过沉降(例如离心)或过滤来实现。其他实施方式包含游离(或可溶的)链霉亲合素。在游离或包被的珠子中的任一类型的实施方式中，将所述链霉亲合素用最低过量的生物素饱和(或淬灭)，优选为饱和，使得所述链霉亲合素不能在生物素化的测定试剂分子之间桥接并变成嗜异性干扰物的来源。饱和意味着所述链霉亲合素上的所有可及生物素结合位点均被生物素占据。所述游离生物素饱和的链霉亲合素适合用作抗链霉亲合素嗜异性干扰物阻断试剂，其例如可以被添加到测定反应混合物(存在于其中)。所述生物素饱和的链霉亲合素包被的珠子适合用作抗链霉亲合素嗜异性干扰物清洁试剂，其例如可以被添加到待测定的生物学流体或提取物(样品)，然后在将所述样品添加到所述测定反应混合物之前除去。在某些用法中，可以将清洁试剂添加到测定试剂或一部分测定反应混合物，并在完成所述测定反应混合物并开始测定反应之前除去。
[0012]在整个本公开中描述了利用链霉亲合素的实施方式。然而，也设想了包含替选物例如亲合素、去糖基化亲合素(中性亲合素)、CaptAvidin、单体亲合素的其他实施方式。也设想了天然和重组版本的链霉亲合素及其替选物。这些试剂可以被称为结合生物素的手段或结合抗链霉亲合素干扰物的手段。
[0013]在整个本公开中描述了利用生物素来淬灭或饱和链霉亲合素活性生物素结合位点的实施方式。然而，也设想了使用生物素化试剂例如生物素
‑
PEG
n
‑
COOH或生物素
‑
PEG
n
‑
CH3或生物素
‑
PEG
n
‑
OH或其他生物素
‑
R
‑
(非反应性末端化学基团)(其中R是碳链或环结构)的其他实施方式。生物素和这些生物素的修饰形式可以被称为结合链霉亲合素的手段或结合抗生物素干扰物的手段。
[0014]在其他实施方式中，所述链霉亲合素包被的珠子、生物素饱和的链霉亲合素包被的珠子、链霉亲合素或淬灭的链霉亲合素通过偶联一个或多个另外的捕获部分进行修饰，用于除去其他嗜异性或交叉反应性干扰物(除了抗链霉亲合素干扰物之外)。在这些实施方式的一种情况下，所述另外的捕获部分是偶联到所述生物素饱和的链霉亲合素包被的珠子的生物素，并且另外适合用作抗生物素嗜异性干扰物清洁试剂。在这些实施方式的其他情况下，所述另外的捕获部分是钌(一种元素)；鲁米诺、吖啶酯、ABEI或环状ABEI(类似于生物素，小有机分子)；或蛋白质，例如产生信号的酶，例如碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶；链霉亲合素；抗体，例如来自于非人类物种的抗体；或抗原。在其他情况下，所述捕获部分可以是
任何本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种减少来自于液体生物样品的干扰物的方法，所述方法包括：a)将所述样品与包含链霉亲合素的粒子合并提供混合物；b)将所述混合物混合以促进所述干扰物与所述链霉亲合素的结合；以及c)从所述样品分离所述粒子；从而除去所述干扰物或降低所述干扰物的量。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述链霉亲合素上的生物素结合位点空置，以便除去或降低由抗链霉亲合素物质、生物素或两者造成的干扰。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述链霉亲合素上的生物素结合位点被生物素饱和，以便除去或降低由抗链霉亲合素物质造成的干扰。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述链霉亲合素被生物素化，以便除去或降低由抗链霉亲合素物质、抗生物素物质或两者造成的干扰。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的方法，其中将所述链霉亲合素与另外的非生物素捕获部分偶联，以便还除去或降低由结合所述捕获部分的物质造成的干扰。6.根据权利要求1
‑
5中任一项所述的方法，其中所述粒子是磁性的。7.根据权利要求6所述的方法，其中从所述样品分离所述粒子包括将所述混合物暴露于磁铁下并收集所述液体样品。8.一种减少来自于液体生物样品的干扰物的方法，所述方法包括：a)将所述样品与用生物素饱和的链霉亲合素(QSAv)合并提供混合物；b)将所述混合物混合以促进所述干扰物与所述链霉亲合素的结合；从而阻断抗链霉亲合素干扰物或降低所述抗链霉亲合素干扰物的量。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述QSAv被生物素化，以便阻断或降低由抗链霉亲合素物质、抗生物素物质或两者造成的干扰。10.根据权利要求8或9所述的方法，其中所述QSAv与另外的非生物素捕获部分偶联，以便还阻断或降低由结合所述捕获部分的物质造成的干扰。11.根据权利要求4、5、9或10中任一项所述的方法，其中所述生物素化或偶联是共价的。12.根据权利要求11所述的方法，其中所述生物素化包括使用酯衍生化的生物素。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述酯衍生化的生物素选自NHS
‑
生物素、NHS
‑
LC
‑
生物素、NHS
‑
LC
‑
LC
‑
生物素、TFP
‑
LC
‑
生物素、NHS
‑
chromalink
‑
生物素、NHS
‑
PEO4
‑
生物素、TFP
‑
(PEO)n
‑
生物素和NHS
‑
(PEO)n
‑
生物素。14.根据权利要求4、5、9或10中任一项所述的方法，其中所述生物素化或偶联由非共价结合到所述链霉亲合素上的生物素结合位点的生物素
‑
连接物介导。15.根据权利要求6或7所述的方法，其中所述QSAv主要是单体的。16.根据权利要求1
‑
15中任一项所述的方法，其中所述QSAv或包含链霉亲合素的粒子已被阻断。17.根据权利要求16所述的方法，其中包含链霉亲合素的QSAv或粒子已通过PEG化被阻断。18.一种在诊断测定期间减少干扰物的方法，所述方法包括：a)将液体生物样品与用生物素饱和的链霉亲合素合并提供混合物；
b)将所述混合物混合，以促进所述干扰物与所述链霉亲合素的结合；以及c)进行所述诊断测定；从而在所述诊断测定中阻断所述干扰物或降低所述干扰物的量。19.一种在诊断测定...

【专利技术属性】
技术研发人员：乔舒亚，
申请(专利权)人：维拉维斯公司，
类型：发明
国别省市：