用于扩增子测序的index组合及相应测序方法技术

本申请提供了用于扩增子测序的index组合及相应测序方法，所述index满足以下条件：(1)不与靶标引物相同或互补；(2)index间不能有连续3个以上的碱基相同，各种碱基比例接近25％；(3)长度为3～7bp。本申请解决了在测序过程中由于文库碱基不平衡导致测序质量降低的问题，在引物扩增步骤中加入index后上机样本数可以大幅度增加，降低测序成本并节约测序时间。降低测序成本并节约测序时间。

【技术实现步骤摘要】
用于扩增子测序的index组合及相应测序方法


[0001]本申请属于测序方法领域，具体地，本申请提供了用于扩增子测序的index组合及相应测序方法。

技术介绍

[0002]扩增子测序常采用对多个样品加标签进行混池建库的方法进行测序，目前主流方法主要有PCR产物建库法、一步扩增法和两步扩增法。其中，PCR产物建库法：使用5
’
端或3
’
端的单端或双端含有约6～8bp的标签(index)的靶标的通用引物对基因组进行扩增，纯化靶标扩增产物，使用Qubit或qPCR方法进行定量，将约20～40个样本等量混合后进行构建一个普通DNA文库，此法引物较短，PCR扩增的保真效果好，但实验步骤繁琐，且需要经过多步的DNA建库环节，时间长、成本高。一步扩增法：使用含带有标签的单链测序接头和通用引物一起合成，在靶标扩增的同时，将PCR产物带上测序所需要的接头，即可直接得到文库，操作简便、速度快、成本低，但带上完整测序接头的单条引物长达90bp，在PCR扩增环节容易导致扩增效率低(如扩增失败，总量偏低)，出现引物二聚体、杂带，甚至会本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于扩增子测序的index组合，其特征在于，所述index满足以下条件：(1)不与靶标引物相同或互补；(2)index间不能有连续3个以上的碱基相同，各种碱基比例接近25％；(3)长度为3～7bp。2.根据权利要求1所述的index组合，其中所述index组合序列包括下列index中的任意两个或者两个以上：两个或者两个以上：
3.根据权利要求2所述的index组合，其中所述index组合序列为：B01ATCB25CGTTCB02TACGCAGB26GTATAAGB03AACGTB27GCAB04TACGCGAB28GTATAGAB05TACGTTCB29GTATATCB06ACTB30CGTACB07AACTGB31CATB08TACACCTB32GTAGACGB09AACACB33GTAGACAB10TACACAGB34CTGB11TACACGAB35GTAGAGTB12AACCAB36CGTCAB13ACGAGTCB37TGAB14GTAGTB38CGTTGTCB15ACGAGCTB39TCGGTB16GGCB40CGTT...

【专利技术属性】
技术研发人员：张媛媛，刘婷婷，王海印，王震，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京地坛医院，
类型：发明
国别省市：