一种RNA中肌苷单碱基分辨率定量检测的方法技术

本发明专利技术公开了一种RNA中肌苷单碱基分辨率定量检测的方法，属于生物技术领域。本发明专利技术利用丙烯腈会选择性的与肌苷反应生成N1氰乙基肌苷(ce1I)，ce1I上的氰乙基由于破坏了氢键相互作用，会造成逆转录在该位点停止。随后通过实时定量PCR(qPCR)腺苷和肌苷在RNA序列上的差异可以被放大，以此来评估特异性肌苷位点的修饰水平。本发明专利技术方法简单、高效、灵敏度高、操作简单，可成功用于低丰度生物样品中肌苷的单碱基分辨率准确测定，为今后肌苷的功能研究和动态控制奠定了基础。动态控制奠定了基础。动态控制奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种RNA中肌苷单碱基分辨率定量检测的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种RNA中肌苷单碱基分辨率定量检测的方法。

技术介绍

[0002]肌苷是最丰富的RNA修饰类型之一，也是核酸中发现的最早的碱基修饰之一。肌苷是由次黄嘌呤形成的嘌呤核苷，由作用于RNA的腺苷脱氨酶(adenosine deaminases acting on RNA，ADARs)催化RNA双链区域中的腺苷水解脱氨基生成。这个过程也称为A
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to
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I RNA编辑。无脊椎动物和脊椎动物的正常行为和发育都需要ADARs酶的参与。
[0003]在RNA中，肌苷有两个主要功能。tRNA反密码子上的肌苷扩大了tRNA可以识别的三联体的范围。在mRNA中，肌苷可以改变双链区域的三维结构，从而影响与RNA结合蛋白的相互作用。肌苷由于可以和胞苷(cytidine，C)配对，因此被认为是鸟苷(guanosine，G)，从而可以影响转录和翻译的准确性。因此肌苷是翻译效率和准确性的主要调节因子，有助于跨物种蛋白质组的多样性。A...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种RNA中肌苷单碱基分辨率定量检测的方法，其特征在于：包含如下步骤：(1)将待检RNA均分为两份，一份用丙烯腈进行氰乙基化处理，一份不进行氰乙基化处理；(2)向两份样品中分别加入DNA探针，用Bst 3.0DNA聚合酶对两份RNA样品分别进行逆转录；所述的DNA探针一部分与目标RNA位点下游互补配对，另一部分用于后续的PCR扩增；(3)将逆转录的产物进行qPCR，计算RNA的量；未进行氰乙基化处理的RNA，通过qPCR测定的是RNA的总量；经氰乙基化处理的RNA，通过qPCR测定的是含有A的RNA的量；待检RNA某位点处的肌苷修饰水平通过下述公式计算：肌苷修饰水平I％＝(RNA的总量
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含有A的RNA的量)/RNA的总量。2.根据权利要求1所述的RNA中肌苷单碱基分辨率定量检测的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁必锋，丁姜慧，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：