AML相关的lncRNA标志物、检测试剂盒及方法在AML诊断与预后中的应用技术

本发明专利技术公开了一种与AML相关的LncRNA标志物，其特征在于，所述的LncRNA标志物为LncRNA FOXN3

【技术实现步骤摘要】
AML相关的lncRNA标志物、检测试剂盒及方法在AML诊断与预后中的应用


[0001]本专利技术属于基因工程生物
，特别是涉及一种AML相关的lncRNA标志物、检测试剂盒及方法在AML诊断与预后中的应用。

技术介绍

[0002]急性髓细胞性白血病(AML)是一种遗传多样性的造血系统恶性疾病，是成人白血病中最常见的类型。其发病机理复杂，涉及细胞分化、增殖、凋亡等多方面的异常改变。尽管在化疗、造血干细胞移植等方面取得了诸多进展，但AML患者生存率的提高仍不尽人意。总体而言，当前AML临床预后依然较差、死亡率高，其总的5年生存率不超过50％。随着我国人口老龄化加剧，近年来AML发病率呈升高态势。基于荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization，FISH)和下一代测序技术(Next generation Sequencing，NGS)的AML鉴定方法多强调异质性，且所需检定周期较长，不利于AML的快速鉴定。因此，进一步解析AML发生发展的分子机制，筛选新的生物标志物以提供有效的诊断、治疗与预后预测方案至关重要。
[0003]近年来的研究表明，非编码RNA与肿瘤的发生、发展密切相关，可作为有效的分子标志物应用于肿瘤的辅助诊断、预后判断与疾病监测，并可为治疗提供更多的靶向分子。然而在AML中，仍有大量非编码RNA的功能未被阐明，临床期待发现更多特异而敏感的非编码RNA，并将其运用于AML的临床诊疗。
[0004]FOXN3
‑
AS1(Ensembl数据库编号为ENSG00000258920)是FOXN3基因的反义转录本，隶属于长链非编码RNA(lncRNA)类。在目前研究中，lncRNA FOXN3
‑
AS1的失调仅在非小细胞肺癌与乳腺癌中发现(PMID:25590602；PMID:34703931)，需更多的功能研究来阐明lncRNA FOXN3
‑
AS1在肿瘤发生中的确切作用。当前尚无报道揭示，lncRNA FOXN3
‑
AS1在AML中的表达情况，以及是否可作为AML的标志物，也无在AML中lncRNA FOXN3
‑
AS1表达的检测方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的在于，克服现有技术中诊断AML的不足，提供一种AML相关的lncRNA标志物、检测试剂盒及方法在AML诊断与预后中的应用。本专利技术基于实时荧光定量PCR检测人lncRNA FOXN3
‑
AS1表达水平的方法，以此作为AML患者的生物标志物，为临床上AML患者的诊断及预后判断提供支持。
[0006]本专利技术的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
[0007]本专利技术一个方面提供了一种与AML相关的LncRNA标志物，所述LncRNA FOXN3
‑
AS1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
[0008]进一步地，所述的LncRNA标志物为LncRNA FOXN3
‑
AS1，对所述LncRNA FOXN3
‑
AS1具有检测特异性的引物序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。
[0009]本专利技术另一个方面提供了一种LncRNA标志物的应用，所述的LncRNA标志物在制备
AML诊断与预后试剂盒中的应用。
[0010]本专利技术又一个方面还提供了一种AML诊断与预后试剂盒，所述试剂盒用于检测急性髓系白血病组织中标志物LncRNA FOXN3
‑
AS1的相对表达量，所述试剂盒包括引物对，所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。
[0011]进一步地，所述试剂盒还包括qPCR扩增Mix和ddH2O。
[0012]进一步地，所述qPCR扩增Mix包含SYBGREEN染料。
[0013]进一步地，所述试剂盒还包扩内标系统，所示内标系统是根据内参基因GAPDH序列设计的内标引物，所述内标引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核酸序列如SEQ ID NO.4所示，所述下游引物的核酸序列如SEQ ID NO.5所示。
[0014]本专利技术再一个方面还提供了一种AML诊断与预后试剂盒检测AML标志物LncRNA FOXN3
‑
AS1的方法，该方法包括以下步骤：
[0015]S1、细胞培养：人永生化骨髓细胞株HS
‑
5、人急性髓系白血病细胞株(MOLM
‑
13、HL
‑
60、KG1A)，使用含10％胎牛血清和1％双抗的培养基DMEM在37℃、5％CO2、相对湿度为90％的培养箱中培养，2
‑
3天换液1次；
[0016]S2、RNA的提取：收集培养的细胞，按照总RNA提取试剂盒说明书指示操作进行细胞总RNA提取；
[0017]S3、RNA的逆转录：按照HiFiScript cDNA第一链合成试剂盒说明书指示操作，进行反转录合成cDNA；
[0018]S4、荧光定量PCR扩增：采用本专利技术所述的试剂盒，以步骤S3中获取的cDNA为模板，进行PCR扩增，并收集荧光信号；
[0019]荧光PCR扩增的体系组成及含量为：
[0020][0021]荧光PCR的反应条件为：95℃预变性10min，然后以95℃变性15s、60℃退火30s、72℃延伸30s，共进行38个循环。
[0022]本专利技术与现有技术相比具有明显的优点和有益效果：本专利技术首次发现了lncRNA FOXN3
‑
AS1表达水平与AML的发生具有相关性，通过检测受试者lncRNA FOXN3
‑
AS1的表达水平，可以判断受试者是否患有AML，从而使患者在患病早期就能采取相应的预防和治疗措施。本专利技术提供的lncRNA FOXN3
‑
AS1作为AML临床检测的辅助诊断标志物的优越性在于操作简单、成本低、检测精确，适合临床筛查。相比传统的诊断方法，使用lncRNA来诊断AML更具有及时性和灵敏性，从而使患者在患病早期就能采取相应的预防和治疗措施。
[0023]上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本专利技术的较佳实施例并结合附图详细说明如后。
附图说明
[0024]图1示出了lncRNA FOXN3
‑
AS1在AML患者样本及正常对照样本差异表达；
[0025]图2示出了在AML患者样本中lncRNA FOXN3
‑
AS1检测结果的ROC曲线；
[0026]图3示出了lncRNA FOXN3
‑
AS1与AML患者预后相关性分析；
[0027]图4本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与AML相关的LncRNA标志物，其特征在于，所述的LncRNA标志物为LncRNA FOXN3
‑
AS1，所述LncRNA FOXN3
‑
AS1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。2.根据权利要求1所述的与AML相关的LncRNA标志物，其特征在于，对所述LncRNA FOXN3
‑
AS1具有检测特异性的引物序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示。3.权利要求1所述的LncRNA标志物的应用，其特征在于，所述的LncRNA标志物在制备AML诊断与预后试剂盒中的应用。4.一种AML诊断与预后试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测急性髓系白血病组织中标志物LncRNA FOXN3
‑
AS1的相对表达量，所述试剂盒包括引物对，所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。5.根据权利要求4所述的AML诊断与预后试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括qPCR扩增Mix和ddH2O。6.根据权利要求5所述的AML诊断与预后试剂盒，其特征在于，所述qPCR扩增Mix包含SYBGREEN染料。7.根据权利要求4所述的AML诊断与预后试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包扩内标系...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁奕，方军，尚晓喻，何胜祥，
申请(专利权)人：安徽同科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：