一种基因修饰的T细胞及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种基因修饰的T细胞，其可以共表达靶向PD

【技术实现步骤摘要】
一种基因修饰的T细胞及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种基因修饰的T细胞及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR
‑
T细胞)治疗是近些年开发出的一种肿瘤靶向过继细胞疗法。其大致原理是通过基因编辑的方法使T细胞表达能够特异性识别肿瘤抗原的嵌合抗原受体，从而赋予其对肿瘤细胞的特异性杀伤能力。靶向CD19和BCMA抗原的CAR
‑
T细胞已经在血液肿瘤治疗中显示出惊人的疗效。然而，CAR
‑
T细胞治疗实体肿瘤仍然面临着诸多挑战。在实体肿瘤治疗中影响CAR
‑
T细胞疗效的最主要因素包括：1.缺乏肿瘤特异性抗原，CAR
‑
T细胞治疗会产生脱靶毒性；2.抑制性肿瘤微环境导致CAR
‑
T细胞失能甚至凋亡；3.实体肿瘤细胞的高度异质性，识别单一肿瘤特异性抗原无法完全清除肿瘤细胞等等；因此，要想克服上述阻碍CAR
‑
T细胞有效杀灭实体肿瘤的因素，就必须通过全新的基因编辑策本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组质粒，其特征在于，包括：(1)靶向沉默PD
‑
1的shRNA序列；(2)包括NKG2D基因、CD3ζ基因、IL
‑
24基因、P2A剪切肽基因的串联序列。2.根据权利要求1所述的重组质粒，其特征在于，所述的shRNA序列根据SEQ ID NO.1
‑
3任一条siRNA设计得到。3.根据权利要求2所述的重组质粒，其特征在于，所述的shRNA序列选自以下任一：(1)正义链SEQ ID NO.5，反义链SEQ ID NO.6；(2)正义链SEQ ID NO.7，反义链SEQ ID NO.8；(3)正义链SEQ ID NO.9，反义链SEQ ID NO.10。4.根据权利要求1所述的重组质粒，其特征在于，所述的NKG2D基因与反向颠倒的CD3ζ基因拼接，再将IL
‑
24基因与上述拼接基因通过P2A剪切肽基因序列串联。5.根据权利要求4所述的重组质粒，其特征在于，所述的NKG2D基因为SEQ ID NO.13；所述的CD3ζ基因为SEQ ID NO.17；所述的IL
‑
24基因为SEQ IDNO.19；所述的P2A剪切肽基因为SEQ ID NO.15。6.根据权利要求5所述的重组质粒，其特征在于，所述的串联序列为SEQ ID NO.21。7.根据权利要求1所述的重组质粒，其特征在于，所述的shRNA序列和串联序列分别位于不同的启动子下游。8.根据权利要求7所述的重组质粒，其特征在于，所述的重组质粒的骨架为pLL3.7
‑
U6
‑
EF1a
‑
EGFP质粒。9.根据权利要求8所述的重组质粒，其特征在于，所述的shRNA序列位于U6启动子下游，所述的串联序列位于EF1a启动子下游。10.根据权利要求9所述的重组质粒，其特征在于，所述的shRNA序列的插入酶切位点为HpaI和XhoI之间；所述的串联序列插入...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴金芸，叶华衍，
申请(专利权)人：中海峡福建细胞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：