β-淀粉样前体蛋白表达载体及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种β

【技术实现步骤摘要】
β
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淀粉样前体蛋白表达载体及其制备方法


[0001]本专利技术涉及基因工程
，特别是涉及β
‑
淀粉样前体蛋白表达载体及其制备方法。

技术介绍

[0002]老年痴呆即阿尔茨海默氏症已经严重影响到了很多人的正常生活，给国家和人民造成了严重的经济压力和社会负担。β
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淀粉样前体蛋白可用于研究老年痴呆症的病变机理研究，尤其该专利技术设计出表达β
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淀粉样前体蛋白的基因序列，其可用于转染人体神经干细胞等进而可用于观察和探索β
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淀粉样前体蛋白基因在细胞内的表达、积累等机理机制。目前，由于细胞beta淀粉样前体蛋白基因表达中各种基因元件的不合理、基因序列设计缺陷、人源细胞复杂表达系统，beta淀粉样前体蛋白基因序列容易表达不成功，限制了beta淀粉样前体蛋白基因用于老年痴呆症科学研究。

技术实现思路

[0003]基于此，有必要针对上述问题，提供一种有效提高转染效率和表达效率，异于观察和筛选的β
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淀粉样前体蛋白表达载体及其制备本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种β
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淀粉样前体蛋白表达载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：获取带有突变的β
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淀粉样前体蛋白基因序列；将所述带有突变的β
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淀粉样前体蛋白基因序列连接到慢病毒基因表达载体中形成连接产物；将所述连接产物转化感受态细胞；挑选测序正确的菌落进行扩大培养；质粒抽提，收集合格的表达β
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淀粉样前体蛋白基因序列载体。2.根据权利要求1所述的β
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淀粉样前体蛋白表达载体的制备方法，其特征在于，所述带有突变的β
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淀粉样前体蛋白基因序列为具有V6421(London)和K595N/M596L(Swedish)突变位点的基因序列，其基因序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求2所述的β
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淀粉样前体蛋白表达载体的制备方法，其特征在于，在获取带有突变的β
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淀粉样前体蛋白基因序列之后，还包括如下步骤：设计并制备获得具有V6421(London)和K595N/M596L(Swedish)突变位点的β
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淀粉样前体蛋白基因的结构元件，所述结构元件的序列为CMV
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K595N/M596L(Swedish)/V6421(London)
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3FLAG
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EF1
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ZsGreen1
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T2A
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PUROMYCIN，其基因序列如SEQ ID No.2所示，其中所述CMV为启动子，所述K595N/M596L/V6421为带有突变的β
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淀粉样前体蛋白基因序列，所述3FLAG为标签序列，所述EF1为启动子，所述ZsGreen1为绿色荧光基因，所述T2A为2A肽序列，所述PUROMYCIN为抗生素序列。4.根据权利要求3所述的β
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淀粉样前体蛋白表达载体的制备方法，其特征在于，还包括根据基因数据库获取的带有突变的β
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淀粉样前体蛋白基因序列，设计PCR扩增引物对，通过PCR扩增获得目的基因序列；所述目的基因上游扩增引物的序列如SEQ ID NO.3所示；所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张益，刘博勋，
申请(专利权)人：华清智美深圳生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：