一种H5亚型禽流感病毒病毒样颗粒的表达制备方法技术

本发明专利技术属于生物工程及疫苗制备技术领域，公开了一种H5亚型禽流感病毒病毒样颗粒的表达制备方法。所述制备方法为：将H5亚型AIV的HA蛋白序列中的血凝素信号肽序列替换成蜂毒素信号肽序列，并设计酶切位点，得到目的基因HA；通过双酶切将目的基因HA和M1蛋白序列分别克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac1

【技术实现步骤摘要】
一种H5亚型禽流感病毒病毒样颗粒的表达制备方法


[0001]本专利技术属于生物工程及疫苗制备
，具体涉及一种H5亚型禽流感病毒病毒样颗粒的表达制备方法。

技术介绍

[0002]H5亚型禽流感病毒(H5subtypeAvianInfluenzaVirus，H5subtypeAIV)是一种重要的禽类动物疫病病原，以高发病率、高致死率、传播速度快、病毒变异快为主要特点。目前我国针对H5亚型AIV的防控主要依赖灭活疫苗免疫，但由于H5亚型AIV疫苗的生产还需要生物安全3级车间，增加了兽用疫苗生产企业的生产成本及投入。并且传统鸡胚生产的AIV病毒液含有大量杂蛋白，不利于病毒的进一步浓缩和纯化。探索AIV新型亚单位疫苗的生产制备方法，具有良好的应用前景。
[0003]病毒样颗粒(Virus
‑
likeparticles,VLPs)由病毒一种或几种结构蛋白自组装成类似于病毒天然结构的蛋白质病毒粒子，具有较强的免疫原性和生物学活性，且不携带病原微生物的遗传物质。相比传统疫苗，VLPs疫苗具有安全性、可同时刺激机体产生体液免疫应答本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种H5亚型禽流感病毒病毒样颗粒的表达制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：(1)目的基因设计与合成：在H5亚型禽流感病毒的HA蛋白序列的起始密码子之前设计Kozac序列和BamHI酶切位点，并将HA的血凝素信号肽序列替换成蜂毒素信号肽序列，在肽链C端设计6
×
His组氨酸标签和HindIII酶切位点，得到目的基因HA；(2)杆状病毒供体质粒pFastBac
‑
HA
‑
M1的构建：使用BamHI和HindIII双酶切，将目的基因HA和M1蛋白序列分别克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac1
‑
dual，然后转化至DH5α感受态细胞中，鉴定正确的质粒命名为pFastBac
‑
HA
‑
M1；(3)重组杆状病毒Bacmid
‑
HA
‑
M1的拯救：将杆状病毒供体质粒pFastBac
‑
HA
‑
M1加入到DH10Bac感受态细胞中培养，提取得到重组杆粒Bacmid
‑
HA
‑
M1；(4)病毒样颗粒的表达制备：将重组杆粒Bacmid
‑
HA
‑
M1转染至SF9昆虫细胞进行VLPs表达制备。2.根据权利要求1所述的一种H5亚型禽流感病毒病毒样颗粒的表达制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述培养步骤为：向刚化冻的DH10Bac感受态细胞中加入杆状病毒供体质粒p...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈瑞爱，李作生，刘郁夫，容芳，郝文茜，冯夏宁，
申请(专利权)人：岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心，
类型：发明
国别省市：