重组慢病毒载体和293T-CD3细胞系及其构建方法与应用技术

本发明专利技术提供一种重组慢病毒载体和293T

【技术实现步骤摘要】
重组慢病毒载体和293T
‑
CD3细胞系及其构建方法与应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体地说，涉及一种重组慢病毒载体和293T
‑
CD3细胞系及其构建方法与应用。

技术介绍

[0002]293T细胞是由293细胞通过基因技术派生出的细胞系，是经过腺病毒E1A基因的转染，能表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区。许多真核表达载体如pcDNA3.1中含有SV40病毒的复制起始位点，可以在表达SV40病毒T抗原的细胞系中复制，从而提高外源基因的表达水平。同时，293T细胞容易被VSV
‑
G包膜的慢病毒转导，因此293T细胞广泛应用于慢病毒的包装。
[0003]慢病毒是细胞工程领域的主要传递载体，但目前还没有统一的慢病毒滴定的标准。目前最常规的慢病毒滴度的方法是使用qPCR来估计前病毒拷贝的数量，该前病毒已经整合到了滴定细胞的基因组中。
[0004]当293T细胞用于检测表达TCR的慢病毒的病毒滴度时，如果按照传统的qPCR法通过估计前病毒拷贝的数量来本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.重组慢病毒载体，其特征在于，所述重组慢病毒载体包含CD3D的编码核酸分子、CD3G的编码核酸分子、CD3E的编码核酸分子和CD247的编码核酸分子；其中，各编码核酸分子间以2A肽编码核酸分子相连；且CD3D的编码核酸分子、CD3G的编码核酸分子、CD3E的编码核酸分子和CD247的编码核酸分子位于同一表达盒内。2.根据权利要求1所述的重组慢病毒载体，其特征在于，所述表达盒还包含抗性基因；优选地，所述抗性基因位于所述表达盒的3
’
端；和/或所述抗性基因为真核抗性基因；更优选地，所述真核抗性基因为潮霉素抗性基因、杀稻瘟菌素S抗性基因、嘌呤霉素抗性基因、遗传霉素抗性基因或腐草霉素D1抗性基因。3.根据权利要求1或2所述的重组慢病毒载体，其特征在于，所述2A肽编码核酸分子选自F2A的编码核酸分子、T2A的编码核酸分子、E2A的编码核酸分子和P2A的编码核酸分子中的至少一种；和/或CD3D的编码核酸分子、CD3G的编码核酸分子、CD3E的编码核酸分子和CD247的编码核酸分子从5
’
端到3
’
端按顺序依次连接；和/或CD3D、CD3G、CD3E和CD247的核苷酸序列分别如SEQ ID No.1
‑
4所示；优选地，所述表达盒包含编码CD3D
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F2A
‑
CD3G
‑
T2A
‑
CD3E
‑
E2A
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CD247的核酸分子；更优选地，所述表达盒包含如SEQ ID NO.5所示的核酸分子；和/或所述表达盒包含编码CD3D
‑
F2A
‑
CD3G
‑
T2A
‑
CD3E
‑
E2A
‑
CD247
‑
P2A
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋栋，谢兴旺，史云强，王雪艳，王江华，王淼，
申请(专利权)人：北京可瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：