一种稳定敲除骨肉瘤细胞143B中CBX4基因的方法技术

本发明专利技术提供一种稳定敲除骨肉瘤细胞143B中CBX4基因的方法，属于生物技术领域，具体涉及一种稳定敲除骨肉瘤细胞143B中CBX4基因的方法。一种稳定敲除骨肉瘤细胞143B中CBX4基因的方法，利用CRISPR/Cas9系统对骨肉瘤细胞143B基因组中的CBX4基因进行编辑，敲除CBX4基因，得到稳定敲除CBX4基因的人骨肉瘤细胞143B细胞。本发明专利技术方法，构建时间短，操作简单，得到的稳定敲除CBX4的骨肉瘤细胞143B，增殖和转移被显著抑制。被显著抑制。被显著抑制。

【技术实现步骤摘要】
一种稳定敲除骨肉瘤细胞143B中CBX4基因的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种稳定敲除骨肉瘤细胞143B中CBX4基因的方法。

技术介绍

[0002]骨肉瘤(osteosarcoma，OS)是一种多发于儿童和青少年的侵袭性原发性骨恶性肿瘤，然而其确切病理、生理机制尚不明确。当前临床主要采用新辅助化疗加手术的方式进行治疗，患者生存率仍不理想，且目前尚未发现治疗骨肉瘤的有效靶点。
[0003]CBX4全称为E3 SUMO
‑
蛋白连接酶，亦称为Pc2，是PRC1的重要组成部分，定位于17q25.3染色体上，全长6.26kb，编码蛋白包含560个氨基酸蛋白。研究发现，CBX4介导与疾病发生、发展的信号通路，参与细胞增殖、分化等生物学过程。研究发现CBX4的高表达与骨肉瘤的临床分期晚、恶性度高和肿瘤坏死率低密切相关。为了深入研究CBX4在骨肉瘤发生发展的潜在调控机制，CBX4抑制剂及激动剂的筛选，以及开发靶向该基因的药物，迫切敲除CBX4的骨肉瘤细胞143B。

技术实现思路
<br/>[0004]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种稳定敲除骨肉瘤细胞143B中CBX4基因的方法，其特征在于利用CRISPR/Cas9系统对骨肉瘤细胞143B基因组中的CBX4基因进行编辑，敲除CBX4基因，得到稳定敲除CBX4基因的人骨肉瘤细胞143B细胞。2.根据权利要求1所述方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将序列如SEQ ID NO:1所示的sgRNA反转录形成双链DNA；(2)将步骤(1)所得双链DNA插入lentiCRISPR v2载体中，得到重组质粒lentiCRISPR
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CBX4
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sgRNA；(3)将所述重组质粒lentiCRISPR
‑
CBX4
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sgRNA与psPAX2.0和PMD2.G质粒共...

【专利技术属性】
技术研发人员：张琪，鲍晓文，马博，
申请(专利权)人：南京基树医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：