一种正交线性基因表达系统及其应用技术方案

本发明专利技术公开了一种正交线性基因表达系统及应用，属于基因工程领域。本发明专利技术是以苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)作为表达宿主，通过在胞内构建线性质粒，实现了基因的稳定表达。同时，本发明专利技术还实现了线性质粒拷贝数的精确控制。这不仅在苏云金芽孢杆菌内开发了一个稳定的蛋白表达系统，还为苏云金芽孢杆菌合成生物学应用奠定了基础。菌合成生物学应用奠定了基础。菌合成生物学应用奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种正交线性基因表达系统及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种正交线性基因表达系统及其应用。

技术介绍

[0002]质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，广泛存在于许多生物中，它们能为宿主提供一些额外的功能，如抗药性等。质粒DNA有三种构象，大部分质粒DNA通常呈现超螺旋的SC构型，其两条多核苷酸链均保持着完整的环形结构，也称为共价闭合环形DNA(cccDNA)；当两条多核苷酸链中只有一条保持着完整的环形结构，另一条链出现有一至数个缺口时，也称为开环DNA(ocDNA)；当质粒DNA经过限制性内切酶等核酸酶切割之后，发生双链断裂形成线性分子(lDNA)。
[0003]苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)作为革兰氏阳性微生物，在农业上被广泛用作生物农药。此外，作为通常认为安全的微生物，其生长速度快，在合成生物学领域的应用具有巨大潜力，适合作为蛋白表达和代谢工程的宿主。然而，目前对其工具的开发仍然有限。此外，目前已有的细菌质粒均为环形质粒，尚未开发出线性的DNA质粒。相比于环形质粒，线性本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种正交线性基因表达系统，其特征在于，所述正交线性基因表达系统包括以下I和II中的任一种：I、含有左复制原点、启动子、目的基因和右复制原点的第一质粒，以及含有DNA复制与控制基因簇的第二质粒；II、同时含有左复制原点、DNA复制与控制基因簇、启动子、目的基因和右复制原点的第三质粒；其中，当所述左复制原点的序列为SEQ ID NO.1时，所述右复制原点的序列为SEQ ID NO.2，所述DNA复制与控制基因簇的序列为SEQ ID NO.3；当所述左复制原点的序列为SEQ ID NO.4时，所述右复制原点的序列为SEQ ID NO.5，所述DNA复制与控制基因簇的序列为SEQ ID NO.6。2.根据权利要求1所述的正交线性基因表达系统，其特征在于：所述正交线性基因表达系统中还包括含有诱导启动子和DNA聚合酶的第四质粒。3.根据权利要求2所述的正交线性基因表达系统，其特征在于：所述DNA聚合酶的基因序列如SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8所示。4.一种含有权利要求1
‑
3任一项所述的正交线性基因表达系统的细胞。5.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘延峰，陈坚，堵国成，刘龙，李江华，吕雪芹，田荣臻，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：