一种结合PD-1和Siglec15的双特异性抗体制造技术

本发明专利技术提供了一种双特异性抗体，其包含(a)特异性结合第一抗原的第一抗体或其抗原结合片段；和(b)特异性结合第二抗原的第二抗体或其抗原结合片段。具体地，所述第一抗原为PD

【技术实现步骤摘要】
一种结合PD
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1和Siglec15的双特异性抗体


[0001]本专利技术属于肿瘤免疫疗法和分子免疫学领域，具体涉及一种结合PD
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1和Siglec15的双特异性抗体。

技术介绍

[0002]程序性死亡分子1(programmed death
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1，PD
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1)是1992年发现的表达在T细胞表面的一个蛋白受体，参与到细胞的凋亡过程之中。PD
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1有两个配体，分别为PD
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L1和PD
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L2。PD
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L1主要表达于T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞(dendritic cell，DC)上，也表达于非骨髓来源的细胞，如血管内皮细胞、上皮细胞、骨骼肌细胞、肝细胞、肾小管上皮细胞、胰岛细胞，脑部星状细胞和各类非淋巴系肿瘤如黑色素瘤、肝癌、胃癌、肾细胞癌。而PD
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L2的表达相对较局限，主要表达在抗原呈递细胞上，如活化的巨噬细胞和树突状细胞。
[0003]当癌症肿瘤细胞表面上表达PD
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L1分子，并且肿瘤组织中有浸润的淋巴细胞，PD
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L1/PD
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1通路就能使肿瘤细胞免于T细胞攻击，达到免疫逃脱的效果。而PD
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1单抗就是为抑制PD
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L1的表达，解决此类免疫逃脱而生。然而，并非所有肿瘤细胞都表达PD
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L1，或者有PD
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L1却缺乏肿瘤浸润淋巴细胞。对于这类癌症，PD
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1单抗就无能为力。
[0004]Siglec15只在髓系细胞中正常表达，而在肿瘤细胞和肿瘤侵润髓系细胞中广泛高表达。进一步的研究表明，Siglec15特异性表达于M2
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like巨噬细胞(抑制性免疫细胞)中，其胞外部分可以识别肿瘤抗原表面唾液酸，刺激M2
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like巨噬细胞产生大量的TGF
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β。肿瘤细胞分泌的M
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CSF可诱导单核细胞分化为巨噬细胞，并伴有Siglec15的表达。TAM表面的Siglec15在识别肿瘤抗原后通过DAP12
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Syk通路促进TGF
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β的释放，促进免疫抑制环境的产生。
[0005]Siglec15的表达与PD
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L1表达互斥，PD
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L1高表达伴随着Siglec15不表达；而Siglec15高表达伴随着PD
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L1的不表达。IFN
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γ是诱导PD
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L1表达的必需因子，却下调Siglec15的表达。因此，急需研发出一种结合PD
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1和Siglec15的双特异性抗体，无论肿瘤细胞表达PD
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L1还是Siglec15，都能使T细胞发挥免疫功能，杀伤肿瘤。

技术实现思路

[0006]本专利技术提供了一种双特异性抗体，包含：
[0007](a)特异性结合第一抗原的第一抗体或其抗原结合片段；和
[0008](b)特异性结合第二抗原的第二抗体或其抗原结合片段；
[0009]其中：
[0010]所述第一抗原为PD
‑
1，并且所述第二抗原为Siglec15；或者，所述第一抗原为Siglec15，并且所述第二抗原为PD
‑
1。
[0011]在可选的实施方案中，所述第一抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链；和
[0012]第二抗体或其抗原结合片段包含scFv；
[0013]其中，所述scFv连接于第一抗体的重链或轻链的N端或C端。
[0014]在可选的实施方案中，所述第一抗体的一条重链的重链可变区与一条轻链的轻链可变区形成抗原结合部位，另一条重链的重链可变区与另一条轻链的轻链可变区形成抗原结合部位。
[0015]在可选的实施方案中，所述的双特异性抗体包含一个第一抗体和一个或多个所述的scFv。
[0016]在可选的实施方案中，所述的双特异性抗体包含一个第一抗体和一个所述的scFv，所述scFv连接于所述第一抗体或其抗原结合片段的重链或轻链的N端或C端。
[0017]在可选的实施方案中，所述的双特异性抗体包含一个第一抗体和两个所述的scFv。
[0018]在可选的实施方案中，两个所述scFv分别连接于所述第一抗体或其抗原结合片段的两条重链或两条轻链的N端；或者，两个所述scFv分别连接于所述第一抗体或其抗原结合片段的两条重链或两条轻链的C端。
[0019]在可选的实施方案中，两个所述scFv分别连接于所述第一抗体或其抗原结合片段的两条重链或两条轻链的C端。
[0020]在可选的实施方案中，所述双特异性抗体包含两条第一多肽链和两条第二多肽链，对于所述每条多肽链：
[0021](a)所述第一多肽链各自独立地包含所述第一抗体或其抗原结合片段的轻链；和
[0022](b)所述第二多肽链各自独立地包含所述第一抗体或其抗原结合片段的重链和所述scFv。
[0023]在可选的实施方案中，所述双特异性抗体包含两条第一多肽链和两条第二多肽链，对于所述每条多肽链：
[0024](a)所述第一多肽链各自独立地包含所述第一抗体或其抗原结合片段的轻链和所述scFv；和
[0025](b)所述第二多肽链各自独立地包含所述第一抗体或其抗原结合片段的重链。
[0026]在可选的实施方案中，两条第一多肽链相同或不同，和/或两条第二多肽链相同或不同。
[0027]在可选的实施方案中，所述scFv的重链可变区与轻链可变区通过连接子L2连接，和/或所述scFv通过连接子L1分别与所述第一抗体或其抗原结合片段的两条重链或两条轻链的N端或C端连接。
[0028]在可选的实施方案中，所述连接子L1和连接子L2相同或不同。
[0029]在可选的实施方案中，所述连接子L1和/或连接子L2具有如(G4S)
x
所示的氨基酸序列，x为选自1
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6的整数；优选地，所述连接子L1和/或连接子L2为(G4S)2、(G4S)3或(G4S)4。
[0030]在可选的实施方案中，所述scFv的重链可变区和轻链可变区之间存在二硫键。
[0031]在可选的实施方案中，所述第一抗体或其抗原结合片段的重链包含重链可变区和重链恒定区，并且所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区；优选地，所述第一抗体或其抗原结合片段为全长抗体。
[0032]在可选的实施方案中，所述第一抗体或其抗原结合片段的重链包含第一Fc区和第二Fc区。
[0033]在可选的实施方案中，第一Fc区和第二Fc区是相同的或不同的。
[0034]在可选的实施方案中，所述Fc区选自IgG、IgA、IgD、IgE和/或IgM。
[0035]在可本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种双特异性抗体，其特征在于，包含：(a)特异性结合第一抗原的第一抗体或其抗原结合片段；和(b)特异性结合第二抗原的第二抗体或其抗原结合片段；其中：所述第一抗原为PD
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1，并且所述第二抗原为Siglec15；或者，所述第一抗原为Siglec15，并且所述第二抗原为PD
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1。2.根据权利要求1任一项所述的双特异性抗体，其特征在于，第一抗体或其抗原结合片段包含重链和轻链；和第二抗体或其抗原结合片段包含scFv；其中，所述scFv连接于第一抗体的重链或轻链的N端或C端。3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗体，其特征在于，所述第一抗体的一条重链的重链可变区与一条轻链的轻链可变区形成抗原结合部位，另一条重链的重链可变区与另一条轻链的轻链可变区形成抗原结合部位。4.根据权利要求2或3所述的双特异性抗体，其特征在于，其包含一个第一抗体和一个或多个所述的scFv。5.根据权利要求4所述的双特异性抗体，其特征在于，其包含一个第一抗体和一个所述的scFv，所述scFv连接于所述第一抗体或其抗原结合片段的重链或轻链的N端或C端。6.根据权利要求4所...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴崇兵，姜晓玲，殷刘松，
申请(专利权)人：盛禾中国生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：