【技术实现步骤摘要】
CRISPR酶和系统以及应用
[0001]本申请是申请日为2022年1月29日、申请号为202210112662.2、专利技术名称为“CRISPR酶和系统以及应用”的专利技术专利申请的分案申请。
[0002]本专利技术涉及基因编辑领域,特别是规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)
具体而言,本专利技术涉及CRISPR酶和系统以及应用,具体涉及一种新型的CRISPR酶(或者,称之为CRISPR蛋白、Cas效应蛋白、Cas酶或Cas蛋白),包含此类蛋白的融合蛋白,以及编码它们的核酸分子。本专利技术还涉及用于核酸编辑(例如,基因或基因组编辑)的复合物和组合物,其包含本专利技术的Cas蛋白或融合蛋白,或编码它们的核酸分子。
技术介绍
[0003]CRISPR/Cas技术是一种被广泛使用的基因编辑技术,它通过RNA引导对基因组上的靶序列进行特异性结合并切割DNA产生双链断裂,利用生物非同源末端连接或同源重组进行定点基因编辑。
[0004]CRISPR/Cas9系统是最常用的II型CRISPR系统,它识别3
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NGG的PAM基序,对靶标序列进行平末端切割。CRISPR/Cas Type V系统是一类新发现的CRISPR系统,它具有5
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TTN的基序,对靶标序列进行粘性末端切割,例如Cpf1,C2c1,CasX,CasY。然而目前存在的不同的CRISPR/Cas各有不同的优点和缺陷。例如Cas9,C2c1和CasX均需要两条RNA进行指导RNA,而Cpf1只需要一条 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种Cas蛋白,其特征在于,所述Cas蛋白为以下I
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II任一所述的Cas蛋白:I、Cas蛋白的氨基酸序列与SEQ ID No.1相比,具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%的序列同一性,并且基本保留了SEQ ID No.1的生物学功能;II、所述Cas蛋白的氨基酸序列与SEQ ID No.1相比,具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加的序列,并且基本保留了SEQ ID No.1的生物学功能。2.根据权利要求1所述的Cas蛋白,其特征在于,所述Cas蛋白具有以下i
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iii中任意一个或任意几个功能结构域:i、PVSVMGIDLGVNPAFAYAVCT;ii、KSYIDYYKNLRLDTLKKLTCAIVRTARSHGVEIVALEDIKRVDYDDQVKRAKEN SLLSLWAPGMILERIEQELANEGIRTWRIDPRHTSQTACITDEFGY;iii、GELLRVNSDVNAAINIARRFLTR。3.一种融合蛋白,所述融合蛋白包括权利要求1或权利要求2所述的Cas蛋白和其他的修饰部分。4.一种分离的多核苷酸,其特征在于,所述多核苷酸为编码权利要求1所述Cas蛋白的多核苷酸序列,或编码权利要求2所述Cas蛋白的多核苷酸序列,或编码权利要求3所述融合蛋白的多核苷酸序列。5.一种gRNA,其特征在于,所述gRNA包括能够结合权利要求1或权利要求2所述的Cas蛋白的同向重复序列和能够靶向靶序列的引导序列。6.一种同向重复序列,其特征在于,所述同向重复序列包含SEQ ID No.3所示的序列。7.一种载体,其特征在于,所述载体包含权利要求4所述的多核苷酸以及与之可操作连接的调控元件。8.一种CRISPR
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Cas系统,其特征在于,所述系统包括权利要求1或权利要求2所述的Cas蛋白以及至少一种权利要求5所述的gRNA。9.一种载体系统,其特征在于,所述载体系统包括一种或多种载体,该一种或多种载体包括:a)第一调控元件,该第一调控元件可操作地与权利要求5所述的gRNA连接,b)第二调控元件,该第二调控元件可操作地与权利要求1或权利要求2所述的Cas蛋白连接;其中组分(a)和(b)位于该系统的相同或不同载体上。10.一种组合物,其特征在于,所述组合物包含:(i)蛋白组分,其选自:权利要求1所述的Cas蛋白或权利要求2所述的Cas蛋白或权利要求3所述的融合蛋白;(ii)核酸组分,其选自:权利要求5所述的gRNA,或编码权利要求5所述的gRNA的核酸,或权利要求5所述的gRNA的前体RNA,或编码权利要求5所述的gRNA的前体RNA核酸;所述蛋白组分与核酸组分相互结合形成复合物。11.一种活化的CRISPR复合物,所述活化的CRISPR复合物包含:(i)蛋白组分,其选自:权利要求1所述的Cas蛋白或权利要求2所述的Cas蛋白或权利要求3所述的融合蛋白;
(ii)核酸组分,其选自:权利要求5所述的gRNA,或编码权利要求5所述的gRNA的核酸,或权利要求5所述的gRNA的前体RNA,或编码权利要求5所述的gRNA的前体RNA核酸;(iii)结合在权利要求5所述的gRNA上的靶序列。12.一种工程化的宿主细胞,其特征在于,所述宿主细胞包含权利要求1所述的Cas蛋白,或权利要求2所述的Cas蛋白,或权利要求3所述的融合蛋白,或权利要求4所述的多核苷酸,或权利要求7所述的载体,或权利要求8所述的CRISPR
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Cas系统,或权利要求9所述的载体系统,或权利要求10所述的组合物,或权利要求11所述的活化的CRISPR复合物。13.权利要求1所述的Cas蛋白,或权利要求2所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员:李珊珊,梁亚峰,赵庆芝,孙洁,
申请(专利权)人:山东舜丰生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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