用于免疫疗法的基因工程化γδT细胞制造技术

本申请提供了新的免疫疗法平台，所述平台将CAR工程化γδT细胞与可组成型或诱导型表达的装甲的白介素IL

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于免疫疗法的基因工程化
γδ
T细胞
[0001]本申请要求于2020年6月22日提交的国际专利申请号PCT/CN 2020/097439的优先权权益，将其内容通过引用以其全文并入本文。相关申请的交叉引用
[0002]本文中引用或参考的所有专利或专利申请、在其中或在它们的审查程序期间引用的所有文献(“申请引用文献”)和在这些申请引用文献中引用或参考的所有文献、以及在本文中引用或参考的所有其他文献(“本文引用的文献”)、在本文中引用的文献中引用或参考的所有文献，连同针对在本文中提及或通过引用结合在本文中的任何文献中的任何产品的任何制造商的说明书、说明、产品规格、和产品表，特此通过引用并入本文，并且可以在本专利技术的实践中采用。更特别地，将所有参考的文献通过引用并入本文，其程度就像明确且单独指出将每个单独文献通过引用并入本文一样。序列声明
[0003]以下以ASCII文本文件提交的内容通过引用以其全文并入本文：计算机可读形式(CRF)的序列表(文件名：P10828
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PCT.210617.Sequence listing_ST25本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种工程化γδT细胞，其包含：(i)第一核酸，所述第一核酸包含编码嵌合抗原受体(CAR)的第一核酸序列，所述嵌合抗原受体包含对靶点具有选择性的胞外抗原识别结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，和/或第一核酸，所述第一核酸包含编码T细胞受体(TCR)或与TCR复合物的CD3链融合的抗原识别结构域的第一核酸序列，其中所述TCR复合物包含(a)选自T细胞受体的γ链和δ链的TCR链，(b)CD3的ε链、δ链和/或γ链，或(c)CD3的ζ链；以及(ii)第二核酸，所述第二核酸包含第二核酸序列，所述第二核酸序列编码外源性细胞因子IL
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18或其功能变体、或包含IL
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18受体(IL
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18R)胞内域的嵌合细胞因子受体。2.如权利要求1所述的工程化γδT细胞，其中所述IL
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18受体包含IL
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18Rα、IL
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18Rβ或其组合。3.如权利要求1所述的工程化γδT细胞，其中所述嵌合细胞因子受体进一步包含除IL
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18以外的细胞因子的胞外结构域、或人工配体。4.如权利要求1所述的工程化γδT细胞，其中所述IL
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18呈可溶形式或膜结合形式。5.如前述权利要求中任一项所述的工程化γδT细胞，其中所述工程化γδT细胞选自由以下组成的组：γ9δ2T细胞、δ1T细胞、δ3T细胞或其组合。6.如权利要求1所述的工程化γδT细胞，其中所述第一核酸进一步包含第一调控区域，所述第一调控区域包含与所述第一核酸序列可操作地连接的启动子。7.如权利要求1所述的工程化γδT细胞，其中所述第二核酸序列进一步包含与所述第二核酸序列可操作地连接的第二调控区域。8.如权利要求7所述的工程化γδT细胞，其中所述第二调控区域包含(i)诱导型启动子，和/或(ii)启动子和一个或多个转录因子结合位点，其中所述转录因子结合位点与活化的γδT细胞中具有活性的转录因子结合。9.如权利要求8所述的工程化γδT细胞，其中所述转录因子结合位点包含选自由以下组成的组的转录因子结合位点的一个或多个拷贝：NF
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κB、AP
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1、Myc、NR4A、TOX1、TOX2、TOX3、TOX4、STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5、STAT6、或其组合。10.如权利要求8所述的工程化γδT细胞，其中所述启动子包含IFN
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β启动子、IL
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2启动子、BCL
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2启动子、GM
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CSF启动子、IL
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6启动子、IFN
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γ启动子、IL
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12启动子、IL
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4启动子、IL
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15启动子、IL
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18启动子或IL
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21启动子。11.如前述权利要求中任一项所述的工程化γδT细胞，其中所述第一核酸和所述第二核酸包含在一个载体中。12.如权利要求11所述的工程化γδT细胞，其中所述第一核酸和所述第二核酸以相反的方向转录。13.如权利要求1至10中任一项所述的工程化γδT细胞，其中所述第一核酸和所述第二核酸包含在分开的载体中。14.如权利要求11或13所述的工程化γδT细胞，其中所述载体是病毒载体。15.如权利要求14所述的工程化γδT细胞，其中所述病毒载体是慢病毒载体、逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、牛痘载体、或单纯疱疹病毒载体。16.如前述权利要求中任一项所述的工程化γδT细胞，其中所述胞外抗原识别结构域
对肿瘤抗原或传染病相关抗原具有选择性。17.如权利要求16所述的工程化γδT细胞，其中所述肿瘤抗原选自由以下组成的组：CD19、CD20、CD22、CD24、CD33、CD38、CD123、CD228、CD138、BCMA、GPC3、CEA、叶酸受体(FRα)、间皮素、CD276、gp100、5T4、GD2、EGFR、MUC
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1、PSMA、EpCAM、MCSP、SM5
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1、MICA、MICB、ULBP、HER
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2及其组合。18.如前述权利要求中任一项所述的工程化γδT细胞，其中所述胞外抗原识别结构域是多特异性的。19.如前述权利要求中任一项所述的工程化γδT细胞，其中所述CAR是串联CAR或双CAR。20.如权利要求1或19所述的工程化γδT细胞，其中所述CAR靶向同一肿瘤抗原。21.如权利要求20所述的工程化γδT细胞，其中所述CAR靶向同一肿瘤抗原上的不同表位。22.如权利要求1或19所述的工程化γδT细胞，其中所述CAR靶向不同的肿瘤抗原。23.如权利要求20至22中任一项所述的工程化γδT细胞，其中所述肿瘤抗原包含BCMA、CD19和/或GPC3。24.如权利要求19所述的工程化γδT细胞，其中所述串联CAR包含：靶向BCMA、CD19或GPC3上不同表位的多于一个抗原结合部分、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。25.如前述权利要求中任一项所述的工程化γδT细胞，其中所述胞内信号传导结构域包含衍生自信号转导分子的免疫效应细胞的初级胞内信号传导结构域，所述信号转导分子选自由以下组成的组：CD3ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD66d及其组合。26.如前述权利要求中任一项所述的工程化γδT细胞，其中所述胞内信号传导结构域包含衍生自共刺激分子的胞内共刺激结构域，所述共刺激分子选自由以下组成的组：CD27、CD28、4
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1BB、OX40、CD40、PD
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1、LFA
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1、ICOS、CD2、CD7、LIGHT、NKG2C、B7
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H3、TNFRSF9、TNFRSF4、TNFRSF8、CD40LG、ITGB2、KLRC2、TNFRSF18、TNFRSF14、HAVCR1、LGALS9、DAP10、DAP12、CD83、CD83的配体及其组合。27.如前述权利要求中任一项所述的工程化γδT细胞，其中所述跨膜结构域来自CD4、CD8α、CD28或ICOS。28.如前述权利要求中任一项所述的工程化γδT细胞，其中所述编码CAR的核酸序列进一步包含位于所述胞外抗原识别结构域与所述跨膜结构域之间的铰链区。29.如前述权利要求中任一项所述的工程化γδT细胞，其中所述第一核酸和所述第二核酸均具有前导肽。30.如前述权利要求中任一项所述的工程化γδT细胞，其中所述工程化γδT细胞包含具有核苷酸序列的核酸，所述核苷酸序列与SEQ ID NO:14、17、19、20或22具有至少约80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。31.如权利要求30所述的工程化γδT细胞，其中所述工程化γδT细胞包含具有SEQ ID NO:14、17、19、20或22中任一个的核苷酸序列的核酸。32.如前述权利要求中任一项所述的工程化γδT细胞，其中所述工程化γδT细胞是同种异体的。
33.如前述权利要求中任一项所述的工程化γδT细胞，其中所述工程化γδT细胞是自体的。34.一种工程化γδT细胞，其包含：(i)第一核酸，所述第一核酸包含与编码嵌合抗原受体(CAR)的第一核酸序列可操作地连接的第一调控区域，所述嵌合抗原受体包含对靶点具有选择性的胞外抗原识别结构域、跨膜结构域和胞内信号传导结构域，和/或第一核酸，所述第一核酸包含编码T细胞受体(TCR)或与TCR复合物的CD3链融合的抗原识别结构域的第一核酸序列，其中所述TCR复合物包含(a)选自T细胞受体的γ链和δ链的TCR链，(b)CD3的ε链、δ链和/或γ链，或(c)CD3的ζ链；以及(ii)第二核酸，所述第二核酸包含第二核酸序列，所述第二核酸序列编码外源性细胞因子IL
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18或其功能变体、或包含IL
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18受体(IL
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18R)胞内域的嵌合细胞因子受体，其中所述胞外抗原识别结构域对选自由以下组成的组的肿瘤抗原具有选择性：CD19、CD20、CD22、CD24、CD33、CD38、CD123、CD228、CD138、BCMA、GPC3、CEA、叶酸受体(FRα)、间皮素、CD276、gp100、5T4、GD2、EGFR、MUC
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1、PSMA、EpCAM、MCSP、SM5
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1、MICA、MICB、ULBP、HER
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2及其组合；所述胞内信号传导结构域包含衍生自信号转导分子的免疫效应细胞的初级胞内信号传导结构域，所述信号转导分子选自由以下组成的组：CD3ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD5、CD22、CD79a、CD79b、CD66d及其组合；并且所述胞内信号传导结构域进一步包含衍生自共刺激分子的胞内共刺激结构域，所述共刺激分子选自由以下组成的组：CD27、CD28、4

【专利技术属性】
技术研发人员：涂中原，张亚峰，武术，徐艺，
申请(专利权)人：南京传奇生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：