靶向CD19的嵌合抗原受体及其用途制造技术

本公开的主题提供特异性靶向CD19的嵌合抗原受体(CAR)和包含这种靶向CD19的CAR的细胞。本公开的主题还提供靶向CD19的CAR用于治疗，例如用于治疗血癌的用途。例如用于治疗血癌的用途。例如用于治疗血癌的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向CD19的嵌合抗原受体及其用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年4月24日提交的美国临时申请第63/015,362号和2020年9月1日提交的美国临时申请第63/073,133号的优先权，将其中每个的内容整体通过引用并入本文，并要求其中每个的优先权。


[0003]本公开的主题提供了使用包含特异性靶向CD19的嵌合抗原受体(CAR)的细胞治疗赘生物(例如癌症)的方法。

技术介绍

[0004]基于细胞的免疫疗法是对癌症治疗具有治愈潜力的疗法。T细胞和其它免疫细胞通过引入编码针对抗原的人工或合成受体的遗传物质被修饰为靶向肿瘤抗原，所述受体称为嵌合抗原受体(CAR)，其对所选择的抗原具有特异性。使用CAR的靶向T细胞疗法已经显示最近在治疗血液恶性肿瘤中获得临床成功。
[0005]表达具有来自小鼠单克隆抗体的结合结构域的CD19特异性CAR的T细胞已显示可治疗B细胞恶性肿瘤。对CAR的小鼠scFv抗原结合结构域具有特异性的T细胞介导的免疫应答可在人类患者中发生，并导致CAR T细胞的过早消除，增加肿瘤复发的风险。因此，需要改善的靶向CD19的CAR，其毒性和免疫原性降低和/或安全性和有效性提高。

技术实现思路

[0006]本公开的主题提供靶向CD19的嵌合抗原受体(CAR)、包含该靶向CD19的CAR的细胞、以及所述细胞用于治疗，例如用于治疗赘生物的用途。
[0007]在某些实施方式中，CAR包括特异性结合CD19的细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括单链可变片段(scFv)、Fab或F(ab)2。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括scFv。在某些实施方式中，scFv是人scFv。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括(a)重链可变区，其包括包含SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ ID NO:9中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3；和/或(b)轻链可变区，其包括：
[0008]i)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3；
[0009]ii)包含SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ ID NO:17中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3；
[0010]iii)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:
20中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ ID NO:21中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3；
[0011]iv)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ ID NO:57中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3；
[0012]v)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ ID NO:59中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3；
[0013]vi)包含SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ ID NO:61中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3；
[0014]vii)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ ID NO:63中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3；或
[0015]viii)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:65中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ ID NO:66中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3。
[0016]在某些实施方式中，重链可变区包括包含SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:9中所示氨基酸序列的CDR3。
[0017]在某些实施方式中，轻链可变区包括包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列的CDR3。
[0018]在某些实施方式中，轻链可变区包括包含SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:17中所示氨基酸序列的CDR3。
[0019]在某些实施方式中，轻链可变区包括包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:21中所示氨基酸序列的CDR3。
[0020]在某些实施方式中，轻链可变区包括包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:57中所示氨基酸序列的CDR3。
[0021]在某些实施方式中，轻链可变区包括包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:59中所示氨基酸序列的CDR3。
[0022]在某些实施方式中，轻链可变区包括包含SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:61中所示氨基酸序列的CDR3。
[0023]在某些实施方式中，轻链可变区包括包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的
CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:63中所示氨基酸序列的CDR3。
[0024]在某些实施方式中，轻链可变区包括包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:65中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:66中所示氨基酸序列的CDR3。
[0025]在某些实施方式中，重链可变区包括包含SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包括特异性结合CD19的细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，其中所述细胞外抗原结合结构域包括：a)重链可变区，其包括包含SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ ID NO:9中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3；和/或b)轻链可变区，其包括：i)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ IDNO:13中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3；ii)包含SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ ID NO:17中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3；iii)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ ID NO:21中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3；iv)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ ID NO:57中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3；v)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ ID NO:59中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3；vi)包含SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ ID NO:61中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3；vii)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ IDNO:63中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3；或viii)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR1、包含SEQ ID NO:65中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR2、以及包含SEQ ID NO:66中所示氨基酸序列或其保守修饰的CDR3。2.根据权利要求1所述的CAR，其中所述细胞外抗原结合结构域包括单链可变片段(scFv)、Fab或F(ab)2。3.根据权利要求2所述的CAR，其中所述细胞外抗原结合结构域包括scFv。4.根据权利要求3所述的CAR，其中所述scFv是人scFv。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的CAR，其中所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:9中所示氨基酸序列的CDR3。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的CAR，其中所述轻链可变区包括：(a)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ IDNO:12中所示氨基酸序列
的CDR2、以及包含SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列的CDR3；(b)包含SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ IDNO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:17中所示氨基酸序列的CDR3；(c)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ IDNO:20中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:21中所示氨基酸序列的CDR3；(d)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ IDNO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:57中所示氨基酸序列的CDR3；(e)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ IDNO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:59中所示氨基酸序列的CDR3；(f)包含SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ IDNO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:61中所示氨基酸序列的CDR3；(g)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ IDNO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:63中所示氨基酸序列的CDR3；或(h)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ IDNO:65中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:66中所示氨基酸序列的CDR3。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的CAR，其中所述轻链可变区包括：(a)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ IDNO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列的CDR3；(b)包含SEQ ID NO:16中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ IDNO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:17中所示氨基酸序列的CDR3；或(c)包含SEQ ID NO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ IDNO:20中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:21中所示氨基酸序列的CDR3。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的CAR，其中：(a)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ IDNO:9中所示氨基酸序列的CDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ IDNO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸的CDR2、以及包含SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列的CDR3；(b)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ IDNO:9中所示氨基酸序列的CDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ IDNO:16中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:17中所示氨基酸序列的CDR3；(c)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ IDNO:9中所示氨基酸序列的CDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ IDNO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:21中所示氨基酸序列的CDR3；(d)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ IDNO:9中所示氨基酸序列的CDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ IDNO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:57中所示氨基酸序列的CDR3；
(e)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ IDNO:9中所示氨基酸序列的CDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ IDNO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸的CDR2、以及包含SEQ ID NO:59中所示氨基酸序列的CDR3；(f)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ IDNO:9中所示氨基酸序列的CDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ IDNO:16中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:61中所示氨基酸序列的CDR3；(g)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ IDNO:9中所示氨基酸序列的CDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ IDNO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:63中所示氨基酸序列的CDR3；或(h)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ IDNO:9中所示氨基酸序列的CDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ IDNO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:65中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:66中所示氨基酸序列的CDR3。9.根据权利要求1
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8中任一项所述的CAR，其中：(a)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ IDNO:9中所示氨基酸序列的CDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ IDNO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸的CDR2、以及包含SEQ ID NO:13中所示氨基酸序列的CDR3；(b)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ IDNO:9中所示氨基酸序列的CDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ IDNO:16中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:12中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:17中所示氨基酸序列的CDR3；或(c)所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:7中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:8中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ IDNO:9中所示氨基酸序列的CDR3；并且所述轻链可变区包括包含SEQ IDNO:11中所示氨基酸序列的CDR1、包含SEQ ID NO:20中所示氨基酸序列的CDR2、以及包含SEQ ID NO:21中所示氨基酸序列的CDR3。10.根据权利要求1
‑
9中任一项所述的CAR，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列具有至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同一性或同源性的氨基酸序列。11.根据权利要求1
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10中任一项所述的CAR，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列。12.根据权利要求1
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11中任一项所述的CAR，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64或SEQ ID NO:67中所示氨基酸序列具有至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约
95％、约96％、约97％、约98％或约99％同一性或同源性的氨基酸序列。13.根据权利要求1
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12中任一项所述的CAR，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64或SEQ ID NO:67中所示氨基酸序列。14.根据权利要求1
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13中任一项所述的CAR，其中所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列。15.根据权利要求1
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14中任一项所述的CAR，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列具有至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同一性或同源性的氨基酸序列；并且(b)所述轻链可变区包含与SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64或SEQ ID NO:67中所示氨基酸序列具有至少约80％、约81％、约82％、约83％、约84％、约85％、约86％、约87％、约88％、约89％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％同一性或同源性的氨基酸序列。16.根据权利要求1
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15中任一项所述的CAR，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含SEQ IDNO:14、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:64或SEQ ID NO:67中所示氨基酸序列。17.根据权利要求1
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16中任一项所述的CAR，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列；并且所述轻链可变区包含SEQ IDNO:14、SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:22中所示氨基酸序列。18.根据权利要求1
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17中任一项所述的CAR，其中：(a)所述重链可变区包含SEQ ID NO:10中所示氨基酸序列，并且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14中所示氨基酸序列；(b)所述重链...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：千年制药公司斯隆凯特琳癌症研究协会癌症与相关疾病纪念医院，
类型：发明
国别省市：