肿瘤浸润细胞在制备抗肿瘤药物中的应用及模型构建方法技术

本发明专利技术属于细胞生物学技术领域，公开了一种肿瘤浸润细胞在制备抗肿瘤药物中的应用及模型构建方法，自体瘤旁注射CCR2高表达的肿瘤浸润CD8+T细胞联合抗PD

【技术实现步骤摘要】
肿瘤浸润细胞在制备抗肿瘤药物中的应用及模型构建方法


[0001]本专利技术属于细胞生物学
，尤其涉及一种肿瘤浸润细胞在制备抗肿瘤药物中的应用及模型构建方法。

技术介绍

[0002]肺癌是一种异质性极强的恶性肿瘤，导致近四分之一的癌症相关性死亡。世界卫生组织调查报告，肺癌的发病率占许多国家和地区的恶性肿瘤的首位。肺癌多在40多岁以上发病，发病年龄高峰在60～79岁，男女患病率为2.3:1。肺癌起源于支气管粘膜上皮，局限于基底膜内者成为瘤旁癌，可向支气管腔内或/和临近的肺组织生长，并可通过淋巴血行或经支气管转移扩散。肺癌主要有两大基本类型，即小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)。其中非小细胞肺癌(NSCLC)发生更多，约80％的肺癌患者属于这种类型。肺腺癌(LUAD)作为非小细胞肺癌的一员，是最具侵袭性的组织学类型，并在全球发病率迅速上升。目前，常用的治疗策略包括手术切除、射频消融、经动脉化疗栓塞、化放疗及辅助免疫治疗，但在提高患者生存率方面均存在一定局限性。胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发恶性肿瘤，目前临床主要治疗方案是传统手本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤浸润细胞在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，自体瘤旁注射CCR2高表达的肿瘤浸润CD8+T细胞联合抗PD
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1在制备抗肿瘤药物中的应用。2.如权利要求1所述的肿瘤浸润细胞在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤为小鼠胶质瘤及肺癌。3.一种验证如权利要求1～2任意一项所述的应用效果的动物模型的构建方法，其特征在于，包括：步骤一，进行肿瘤浸润T细胞的纯化；步骤二，慢病毒转染及分析CCR2高表达的肿瘤浸润CD8+T细胞对细胞的活化作用；步骤三，确定瘤旁注射CD8+T细胞联合皮下注射抗PD
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1的间隔时间；步骤四，分析CD8+T细胞、抗PD
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1预处理的肿瘤浸润CD8+T细胞、转染CCR2的肿瘤浸润CD8+T细胞、抗PD
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1和转染CCR2肿瘤浸润CD8+T细胞的联合处理效果差异。4.如权利要求3所述的动物模型的构建方法，其特征在于，所述步骤一中的肿瘤浸润T细胞的纯化包括：获取小鼠肿瘤组织并用剪刀剪碎至1mm大小，手术刀片切碎，同时配置消化液；组织碎块在37℃摇床下摇动25min，消化2次；通过40μm过滤器，滤液在4℃，300g离心5min，弃上清；使用肿瘤浸润淋巴细胞分离试剂盒中的组织稀释液重悬并分离出淋巴细胞，PBS洗涤2次，重悬；使用美天旎Mouse CD8+T Cell Isolation Kit纯化单细胞悬液的CD8+T细胞，磁珠和T细胞比例为：10μL：107；纯化的CD8+T细胞用RPMI1640培养液培养，每隔3h使用差速消化贴壁再次纯化CD8+T细胞，连续纯化2次。5.如权利要求4所述的动物模型的构建方法，其特征在于，所述消化液的配方为：RPMI1640培养基中含0.05mg/mL I型胶原酶、0.05mg/mL IV型胶原酶、0.05mg/mL透明质酸酶和0.01mg/mL DNase I；...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽，范天宇，万亿，王斌，张宁，刘梦阳，何信佳，张悦，邱旭，
申请(专利权)人：青岛大学，
类型：发明
国别省市：