一种检测PIK3CA基因突变的试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了一种检测PIK3CA基因突变的试剂盒及方法。所述试剂盒包括正义引物、反义引物和耐高温限制性内切酶，所述正义引物和反义引物为分别结合PIK3CA基因E542K突变(G>A)的上游和下游的引物，所述耐高温限制性内切酶切割引入突变位点的PIK3CA基因E542K突变野生型片段。本发明专利技术巧妙结合PCR扩增和限制酶切，开发富集PIK3CA基因突变区片段的方法，可实现快速富集，且产物可直接进行后续检测，能够提高低丰度突变的检测灵敏性，操作简便，成本低，无需增加额外设备，利用广泛推广应用。利用广泛推广应用。利用广泛推广应用。

【技术实现步骤摘要】
一种检测PIK3CA基因突变的试剂盒及方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，涉及一种检测PIK3CA基因突变的试剂盒及方法。

技术介绍

[0002]PIK3CA基因最早发现于上世纪八十年代初，从人膀胱癌细胞系中初次分离出的一种转化基因，属于KRAS基因家族，可使NIH3T3细胞发生恶性转化，而从正常人组织中提取的DNA则无此种作用。PIK3CA基因就像体内一个“开关”，它在肿瘤细胞生长以及血管生成等过程的信号传导通路中起着重要调控作用，正常的PIK3CA基因可抑制肿瘤细胞生长，而一旦发生突变，它就会持续刺激细胞生长，打乱生长规律，从而导致肿瘤的发生。
[0003]在不同的癌症当中存在不同的PIK3CA突变的比例：胰腺癌(90％)、结肠癌(50％)、肺癌(30％)、卵巢癌(15％)、甲状腺癌(50％)、膀胱癌(6％)，红斑性狼疮(SLE)、乳腺癌、肝癌、皮肤癌、类风湿性关节炎(RA)、肾癌及某些的白血病(Leukemia)都有较高的突变水平。及时检测PIK3CA突变具有重要意义，检测PIK3CA基因突变是深入了解癌基因的情况本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测PIK3CA基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括正义引物、反义引物和耐高温限制性内切酶；所述正义引物和反义引物为分别结合PIK3CA基因E542K突变的上游和下游的引物；所述耐高温限制性内切酶切割引入酶切位点的PIK3CA基因E542K突变野生型片段。2.根据权利要求1所述的检测PIK3CA基因突变的试剂盒，其特征在于，所述正义引物的核酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列；优选地，所述反义引物的核酸序列包括SEQ ID NO.2所示的序列。3.根据权利要求1或2所述的检测PIK3CA基因突变的试剂盒，其特征在于，所述耐高温限制性内切酶包括TspRⅠ内切酶。4.根据权利要求1
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3任一项所述的检测PIK3CA基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR反应液；优选地，所述PCR反应液包括DNA聚合酶、dNTP、PCR反应缓冲液和水；优选地，所述DNA聚合酶包括高保真DNA聚合酶。5.一种富集PIK3CA基因突变区片段的方法，其特征在于，所述方法包括：取待测样本DNA作为模板，利用权利要求1
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4任一项所述的检测PIK3CA基因突变的试剂盒中正义引物和反义引物进行PCR扩增，在PCR扩增产物中加入耐高温限制性内切酶，进行酶切反应，利用酶切反应产物继续进行PCR扩增。6.根据权利要求5所述的富集PIK3CA基因突变区片段的方法，其特征在于，所述PCR扩增的条件为：93～98℃预变性3～8min；93～98℃变性25～35sec，50～55℃退火25～35sec；70～75℃延伸25～35sec，10～20个循环；优选地，所述酶切反应的条件为60～70℃反应0.5～2h。7.一种以非疾病诊断和/或治疗为目的的检测PIK3CA基因突变的方法，其特征在于，所述方法包括：以权利要求5或6所述的富集PIK3CA基因突变区片段的方法富集待测样本中PIK3CA基因突变区片段，对富集产物进行测序，根据测序结果进行对比分析，判断待测样本是否存在突变。8.根据权利要求7所述的以非疾病诊断和/或治疗为目的的检测PIK3CA基因突变的方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗迪贤，文小莎，刘权，
申请(专利权)人：华中科技大学协和深圳医院，
类型：发明
国别省市：