一种双酶偶联合成糠醇的方法技术

本发明专利技术公开了一种双酶偶联合成高浓度糠醇的方法，以醇脱氢酶冻干菌粉和葡萄糖脱氢酶冻干菌粉混合后作为催化剂，以糠醛为底物，以葡萄糖为辅底物，以NADP

【技术实现步骤摘要】
一种双酶偶联合成糠醇的方法
(一)

[0001]本专利技术属于生物催化领域，涉及一种以糠醛为底物双酶偶联催化合成糠醇的方法。
(二)
技术介绍

[0002]糠醇是一种重要的精细化工有机合成原料，糠醇在铸造用树脂生产方面的应用最为广泛。糠醇还广泛用于合成耐寒增塑剂、添加剂、火箭燃料、合成纤维、橡胶等。此外，糠醇还是生产香料、香味剂、医药、农药的中间体，如用作合成赖氨酸、维生素C和乙酰丙酸的化学中间体。糠醇可由糠醛转化而来，糠醛主要来源于生物质材料，包括：玉米芯，甘蔗渣，玉米杆，向日葵壳、燕麦壳、棉籽壳、稻壳等。目前，糠醛工业生产工艺较为成熟，来源丰富，价格低廉。
[0003]利用糠醛生产糠醇的过程多用化学法，然而，化学法的催化剂复杂，化学反应需要高温、高压等苛刻条件，涉及有机溶剂和有毒化学品，剧毒、腐蚀性的废渣难以处理，造成严重的环境问题。另外，糠醛的C＝C比C＝O更容易被还原，如何有效地进行选择性加氢，减少副产物的生产，对化学法而言极具挑战，而生物法基于其优异的化学选择性可有效地应对这一挑战。相较于化学合成法，生物酶法具有选择性高、反应温和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种双酶偶联合成糠醇的方法，其特征在于，所述方法为：将醇脱氢酶基因工程菌和葡萄糖脱氢酶基因工程菌各自进行诱导表达并将湿菌体冻干，将获得的醇脱氢酶冻干菌粉和葡萄糖脱氢酶冻干菌粉混合后作为催化剂，以糠醛为底物，以葡萄糖为辅底物，以NADP
+
或NAD
+
为辅酶，以pH 4～9的缓冲液为反应介质构成反应体系，在20～50℃，400rpm条件下反应完全后，反应液分离纯化，获得糠醇。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述醇脱氢酶基因工程菌是将醇脱氢酶基因导入大肠杆菌构建获得的；所述醇脱氢酶基因包括但不限于核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的醇脱氢酶YsADH基因、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的醇脱氢酶AdhP基因、核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的醇脱氢酶YahK基因、核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的醇脱氢酶YjgB基因。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述葡萄糖脱氢酶基因工程菌是将葡萄糖脱氢酶基因导入大肠杆菌构建获得的；所述葡萄糖脱氢酶基因包括但不限于核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的葡萄糖脱氢酶BmGDH
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、核苷酸序列如SEQ ID NO.11所示的葡萄糖脱氢酶BsGDH、核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示的葡萄糖脱氢酶EsGDH。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，醇脱氢酶冻干菌粉和葡萄糖脱氢酶冻干菌粉以质量比0.2～5:1混合。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应体系中，催化剂加入量为20～40g/L；所述底物糠醛加入终浓度为500～1500mM，所述糠醛与葡萄糖加入浓度比为1:0.5～2.5；所述辅酶加入终浓度为0～0.5mM。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应介质为pH 7.0的50mM Tris
‑
HCl缓冲液。7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，当底物添加量为不...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁佐楠，刘训，章银军，周雪婷，金礼俊，魏萬，张飞龙，肖延铭，应向贤，
申请(专利权)人：浙江英沃迪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：