一种多糖或寡糖药物的含量的测定方法技术

本发明专利技术属于天然药物化学领域，涉及一种测定多糖或寡糖药物，特别是酸性糖药物、中性糖药物的含量(包括原料药含量以及药物制剂溶出度)的方法，其中以二醇基亲水色谱柱或耐水性反相色谱柱为固定相，以蒸发光散射检测器(ELSD)、示差折光检测器(RID)或电雾式检测器(CAD)进行定量检测。本发明专利技术的测定方法分离效果好、分析成本低、简单快速，适用于原料和制剂中酸性、中性糖的定量检测。中性糖的定量检测。中性糖的定量检测。

【技术实现步骤摘要】
一种多糖或寡糖药物的含量的测定方法


[0001]本专利技术属于天然药物化学领域，具体地涉及多糖或寡糖药物，特别是中性多糖或寡糖和酸性多糖或寡糖的含量的测定方法。

技术介绍

[0002]多糖或寡糖是天然来源的主要的生物活性化合物，可来自植物、真菌等。多糖的分子量大，结构复杂，因此，多糖或寡糖的含量的准确测定是一个挑战。
[0003]多糖和寡糖含量测定的常用方法为硫酸咔唑法，该方法首先以浓度及单糖标准品的显色做标准曲线，再在标准曲线上读出待测样品的含量。但是酸性糖的单糖甘露糖醛酸并没有标准品出售，若以葡萄糖醛酸为标准品，其与酸性糖的结构及显色效率存在差异，不能对酸性糖进行精确定量。
[0004]另一方面，固体制剂口服给药后，药物的吸收取决于药物从制剂中的溶出、释放、在生理条件下的溶解以及在胃肠道的渗透等因素。由于药物的溶出和溶解对吸收具有重要影响，因此，体外溶出度试验可以预测其体内溶出行为，建立普通口服固体制剂体外溶出试验方法对于以下方面具有重要作用：评价药品各批次之间质量的一致性、指导新药制剂的研发、在药品发生如处方、生产工艺、生产场所等变更后确认药品的质量和疗效的一致性。
[0005]含有酸性多糖或寡糖的药物制剂，采用药典及相关法规性文件收录的一般口服固体制剂的溶出度常规测定方法进行检测，制剂在溶剂中崩解后，采用硫酸咔唑法测定溶出介质中酸性糖的含量存在诸多问题：该方法首先以浓度及单糖标准品的显色做标准曲线，再在标准曲线上读出待测样品的含量，但是酸性糖的单糖甘露糖醛酸并没有标准品出售，若以葡萄糖醛酸为标准品，其与酸性糖的结构及显色效率存在差异，不能对酸性糖进行精确定量；且在制剂溶出曲线绘制时样品较多，比色法操作起来较为繁琐耗时；该方法自身对浓硫酸品质要求高。
[0006]因此需要开发简单快速的方法来测定多糖或寡糖药物的含量，以及其制剂的溶出度。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供了一种通过液相色谱法(例如HPLC)来测定多糖或寡糖药物的含量或者多糖或寡糖药物制剂的溶出度的方法。
[0008]示差折光检测器(RID)是通过连续测定色谱柱流出液折射率的变化而对样品浓度进行检测的，是一种非选择性液相色谱仪检测器，基本上对所有被测对象均有响应，但灵敏度较低，不适合做痕量分析，也不适合作梯度洗脱，常用于糖类等无紫外吸收物质的分析。蒸发光散射检测器(ELSD)是一种通用型检测器，不依赖于样品的光学特性，适用于半挥发性和不挥发性样品，灵敏度高于示差检测器。电雾式检测器(CAD)是通用型检测器，是一种新型原理的、高灵敏度、重现性较好的检测器，它基于雾化检测器的原理，洗脱液经雾化后形成颗粒，经过漂移管干燥后与带电氮气碰撞，使得目标化合物带上正电荷，最后，通过静
电计测量电荷的量，该测量值与目标化合物的质量成一定比例关系。
[0009]由于糖药物的紫外吸收差，一般不能直接采用紫外检测器进行含量检测，基于糖类的折光性及不挥发特性，可以采用RID、ELSD和CAD进行糖含量检测；而对于药物制剂的溶出液分析，由于其中含有大量的溶出介质，药物浓度低，低灵敏度的RID上目标峰信号低，且容易受到溶剂峰的影响，这时可以采用ELSD和CAD检测器。在色谱柱的选择方面，由于溶出液中大量溶出介质的存在，某些介质会导致杂峰的出现，严重地影响了谱图数据的准确性。本专利技术人发现，大多数类型的色谱柱难以将糖从溶剂或大量的溶出介质中有效地分离出来。但我们发现采用二醇基亲水色谱柱和耐水性反相色谱柱可以获得较好的分离效果，能对多糖或寡糖进行含量测定，且可以同时对糖药物制剂，特别是酸性糖药物制剂的多种pH体系溶出液进行定量分析。因此，本专利技术人最终建立了HPLC连用RID、ELSD和CAD分析多糖或寡糖药物含量以及其制剂在水、盐酸、醋酸
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醋酸钠缓冲体系、磷酸盐缓冲体系溶出液中的溶出度的测定方法。
[0010]为了实现对多糖或寡糖药物及其制剂的质量控制，本专利技术的一个方面提供了一种多糖或寡糖药物含量的测定方法，包含以下步骤：
[0011](1)配制多糖或寡糖药物溶液作为供试品溶液；
[0012](2)使用HPLC
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ELSD法、HPLC
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RID法或HPLC
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CAD法测定供试品溶液中多糖或寡糖的含量；
[0013]其中，HPLC的色谱柱选自二醇基亲水色谱柱或耐水性反相色谱柱。
[0014]本专利技术的另一方面提供了一种多糖或寡糖药物制剂溶出度的测定方法，其特征在于，所述测定方法包含以下步骤：
[0015](1)配制多糖或寡糖药物制剂溶出液作为供试品溶液；
[0016](2)使用HPLC
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ELSD法或HPLC
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CAD法测定供试品溶液中多糖或寡糖药物制剂的溶出度；
[0017]其中，HPLC的色谱柱选自二醇基亲水色谱柱或耐水性反相色谱柱。
[0018]与常规的比色法相比，本专利技术提供的HPLC
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ELSD法、HPLC
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RID法或HPLC
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CAD法专属性好、重复性佳、准确度良好，且简便快速，仅十分钟就能完成一针样品的分析。
附图说明
[0019]图1为Agilent Zorbax SB
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Aq色谱柱(3.5μm，4.6
×
150mm)检测甘露寡糖二酸在水溶液中的HPLC
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ELSD色谱图。
[0020]图2为Agilent Zorbax SB
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Aq色谱柱检测甘露寡糖二酸胶囊pH1.2盐酸介质溶出液的HPLC
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ELSD色谱图。
[0021]图3为Agilent Zorbax SB
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Aq色谱柱检测甘露寡糖二酸胶囊pH4.5醋酸
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醋酸钠缓冲体系溶出液的HPLC
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ELSD色谱图。
[0022]图4为Agilent Zorbax SB
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Aq色谱柱检测甘露寡糖二酸胶囊pH6.8磷酸盐缓冲体系溶出液的HPLC
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ELSD色谱图。
[0023]图5为Welch Ultimate LP
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Aq色谱柱检测甘露寡糖二酸胶囊pH1.2盐酸介质溶出液的HPLC
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ELSD色谱图。
[0024]图6为Acchrom X5H色谱柱检测甘露寡糖二酸胶囊pH1.2盐酸介质溶出液的HPLC
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ELSD色谱图。
[0025]图7为阴离子交换色谱柱(Welch Ultimate XB
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SAX)检测pH1.2盐酸介质的HPLC
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UV色谱图。
[0026]图8为阴离子交换色谱柱(Welch Ultimate XB
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SAX)检测甘露寡糖二酸胶囊pH1.2盐酸介质溶出液的HPLC
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多糖或寡糖药物含量的测定方法，其特征在于，所述测定方法包含以下步骤：(1)配制多糖或寡糖药物溶液作为供试品溶液；(2)使用HPLC
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ELSD法、HPLC
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RID法或HPLC
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CAD法测定供试品溶液中多糖或寡糖的含量；其中，HPLC的色谱柱选自二醇基亲水色谱柱或耐水性反相色谱柱。2.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述的多糖或寡糖药物为酸性多糖或寡糖药物或中性多糖或寡糖药物。3.如权利要求2所述的测定方法，其特征在于，所述的多糖或寡糖药物包括原料药和药物制剂。4.如权利要求3所述的测定方法，其特征在于，所述的酸性多糖或寡糖中含有羧基、硫酸酯基或磷酸酯基中的一种或多种。5.如权利要求4所述的测定方法，其特征在于，所述酸性多糖或寡糖选自：甘露寡糖二酸、聚甘露糖醛酸、聚古罗糖醛酸、藻酸双酯钠、聚甘露糖醛酸硫酸酯、聚古罗糖醛酸硫酸酯、肝素、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角质素、透明质酸、PI88、岩藻糖硫酸酯、卡拉胶、右旋糖酐硫酸酯；所述中性多糖或寡糖选自：灵芝多糖、香菇多糖、人参多糖。6.如权利要求5所述的测定方法，其特征在于，所述酸性多糖或寡糖选自：甘露寡糖二酸或肝素。7.如权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述色谱柱选自：Acchrom X5H、Agilent Zorbax SB
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Aq、Waters Atlantis T3 Column或Welch Ultimate LP
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Aq中的任意一种。8.如权利要求1
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7中任一项所述的测定方法，其特征在于，步骤(2)所述使用HPLC
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ELSD法、HPLC
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RID法或HPLC
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CAD法测定供试品溶液中多糖或寡糖的含量的具体步骤包括：(2
‑
1)取适量多糖或寡糖对照品，用溶出介质配制一系列不同浓度的标准溶液，作为绘制多糖或寡糖色谱峰面积
‑
浓度标准曲线的对照品溶液；(2
‑
2)取对照品溶液注入高效液相色谱，获得多糖或寡糖色谱峰峰面积，以对照品溶液的浓度的对数作为横坐标X，以色谱峰的峰面积的对数作为纵坐标Y，绘制多糖或寡糖色谱峰面积
‑
浓度标准曲线；(2
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3)取供试品溶液注入高效液相色谱，获得多糖或寡糖色谱峰峰面积，根据标准曲线计算所述供试品溶液中多糖或寡糖的含量；其中，所述高效液相色谱的色谱柱选自二醇基亲水色谱柱或耐水性反相色谱柱，并且以蒸发光散射检测器(ELSD)、示差折光检测器(RID)或电雾式检测器(CAD)进行定量检测。9.如权利要求1
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7中任一项所述的测定方法，其特征在于，步骤(2)所述使用HPLC
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ELSD法、HPLC
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RID法或HPLC
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CAD法测定供试品溶液中多糖或寡糖的含量的具体步骤包括：(2
‑
1)取适量多糖或寡糖对照品，用溶出介质配制确定浓度的标准溶液，作为对照品溶液；(2
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2)取对照品溶液注入高效液相色谱，获得多糖或寡糖色谱峰峰面积；(2
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3)取供试品溶液注入高效液相色谱，获得多糖或寡糖色谱峰峰面积，根据对照品溶液的浓度和色谱峰峰面积采用外标一点法计算所述供试品溶液中多糖或寡糖的含量；其中，所述高效液相色谱的色谱柱选自二醇基亲水色谱柱或耐水性反相色谱柱，并且以蒸发光散射检测器(ELSD...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾洋洋，蒲江华，陈美英，胡丰颖，周荣，周红涛，张海霞，张真庆，
申请(专利权)人：绿谷上海医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：