一种提高内源酶分泌的基因工程菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种提高内源酶分泌的基因工程菌及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术以多聚半乳糖醛酸酶这一内源酶为切入点，通过对正常菌株和敲除多聚半乳糖醛酸酶的菌株进行转录组测序分析，筛选出与内源酶分泌相关的关键基因Km_10019，通过实验验证该基因调控内源酶的胞外分泌。本发明专利技术对马克思克鲁维酵母进行基因工程改造，获得Km_10019过表达的基因工程菌，该菌株分泌多聚半乳糖醛酸酶的量是对照的1.7倍，本发明专利技术为蛋白分泌系统优化提供理论基础和相关基因，对于蛋白酶制剂的开发具有重要意义。开发具有重要意义。开发具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
一种提高内源酶分泌的基因工程菌及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，具体涉及基于转录组分析结果构建的一种提高内源酶分泌的基因工程菌及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]随着社会的发展，传统的化学制造所造成环境污染、高能耗和生态恶化等问题引起社会高度重视，因此需要对工业生产废弃物或废水进行处理以满足排放要求。水果罐头加工、果酱生产、果胶生产与使用企业产生含果胶的废水，称之为果胶废水，果胶废水中含有高浓度的果胶，如何去除果胶是该类废水处理的关键。
[0003]目前常规的处理方式是通过预处理分离大部分果胶，然后通过生化处理进一步降解去除果胶。主要包括复合絮凝剂处理、混凝
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吸附法处理、果胶酶处理、微生物分解处理。通过絮凝剂与果胶分子形成絮体而去除果胶是最快捷的去除果胶的方法，但容易产生二次污染，且后续程序繁琐。酶属于生物催化剂，具有专一性强、作用条件温和以及可生物降解等特点，利用果胶酶处理可以达到很好的效果，不仅对能源的消耗，废弃物的排放有重要的作用，还可以给社会带来巨大的经济效益。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的Km_10019基因在促进马克思克鲁维酵母内源酶分泌中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述Km_10019基因编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括：以马克思克鲁维酵母为出发菌，利用生物学技术手段在基因组中插入含有Km_10019基因的过表达模块或者在宿主菌中导入含有Km_10019基因的重组表达质粒，获得功能性获得的基因工程菌。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，重组表达质粒的原始质粒为pIW1146载体。5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述基因工程菌采用SD培养基进行发酵培养。6.一种提高内源酶分泌的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌以马克思克鲁维酵母为出发菌，基因工程菌中具有包含核苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：郎绪业，李舟阳，
申请(专利权)人：浙江大学杭州国际科创中心，
类型：发明
国别省市：