一种生产广藿香醇的毕赤酵母重组菌株及其构建方法以及应用技术

本发明专利技术公开了一种生产广藿香醇的毕赤酵母重组菌株及其构建方法以及应用。本发明专利技术构建方法为：将广藿香植物来源的广藿香合成酶在毕赤酵母中进行表达，同时优化了内源的法尼基焦磷酸合成酶和广藿香醇合成酶两酶过表达方式，然后对其内源的甲羟戊酸前体途径进行改造以显著改善产量，最后在此基础上对关键酶拷贝数进行了优化获得高产广藿香醇的重组菌株。本发明专利技术利用毕赤酵母组合调控策略使广藿香醇的产量到达2.47g/L，为目前已报道的其他工程菌株中最高。本发明专利技术的毕赤酵母底盘细胞能够显著提高广藿香醇的合成，缓和市场需求。缓和市场需求。

【技术实现步骤摘要】
一种生产广藿香醇的毕赤酵母重组菌株及其构建方法以及应用


[0001]本专利技术涉及生物合成应用领域，具体涉及一种生产广藿香醇的毕赤酵母重组菌株及其构建方法以及应用。

技术介绍

[0002]广藿香醇(Patchoulol)又名百秋李醇，是一种三环倍半萜化合物，化学式C
15
H
26
O，CAS登录号5986
‑
55
‑
0，相对分子质量为222.37，密度为1.001g/cm3。广藿香醇呈无色，常温下是一种无色晶体，具有挥发性，能发出特殊舒缓气味，不溶于水，溶于醇、醚和常用有机溶剂。在自然界中，广藿香醇主要存在于唇形科蕊草属植物广藿香。它因其具有抗炎、抗病毒、抗癌等多种药理作用而广泛用于医药领域中，以其独特的气味还被广泛用于化妆品领域中。
[0003]目前广藿香醇获得主要通过植物提取，化学合成，微生物发酵法等方法获得。国内主要以从植物种提取广藿香醇为主，但是得率极低，不适合工业化生产。国外侧重于通过化学合成的方法，广藿香醇分子具有功能化的三环四面体的环化结构，结构复杂难以本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效生产广藿香醇的工程菌的构建方法，其特征在于：以毕赤酵母为出发菌株，在毕赤酵母基因组中整合入融合基因A，并强化MVA途径；其中：所述的融合基因A为法尼基焦磷酸合成酶编码基因ERG20和广藿香醇合成酶编码基因PTS连接所得；所述的广藿香醇合成酶编码基因PTS的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的法尼基焦磷酸合成酶编码基因ERG20的核苷酸序列如NCBI登录号：XP_002490436.1所示。2.根据权利要求1所述的高效生产广藿香醇的工程菌的构建方法，其特征在于：所述的法尼基焦磷酸合成酶编码基因ERG20和广藿香醇合成酶编码基因PTS连接的方式为：法尼基焦磷酸合成酶编码基因ERG20的C端和广藿香醇合成酶编码基因PTS的N端通过连接肽连接。3.根据权利要求2所述的高效生产广藿香醇的工程菌的构建方法，其特征在于：所述的强化MVA途径为在工程菌基因组中整合MVA途径的关键基因；所述的关键基因包括HMGS、HMGR、ERG8、ERG19和IDI1；所述的HMGS的编码基因Gene ID为8198573，所述的HMGR的编码基因Gene ID为8198637，所述的ERG8的编码基因Gene ID为8198218，所述的ERG19的编码基因Gene ID为8196843，所述的IDI1的编码基因Gene ID为8197017。4.根据权利要求1～3任一项所述的高效生产广藿香醇的工程菌的构建方法，其特征在于：所述的构建方法还包括额外再整合一个或多个拷贝的融合基因A，或额外再整合一个或多个拷贝的融合基因A与一个或多个拷贝的广藿香醇合成酶编码基因PTS。5.根据权利要求4所述的高效生产广藿香醇的工程菌的构建方法，其特征在于：所述的构建方法还包括额外再整合入两个拷贝的融合基因A；或在毕赤酵母基因组中整合入两个拷贝的融合基因与一个拷贝的广藿香醇合成酶编码基因PTS。6.根据权利要求5所述的高效生产广藿香醇的工程菌的构建方法，其特征在于：所述的毕赤酵母为毕赤酵母GS115；融合基因A、广藿香醇合成酶编码基因PTS的表达盒的启动子均为AOXm启动子，碱基序列如SEQ ID NO.3所示，终止子均为TAOX终止子，碱基序列如SEQ ID NO.4所示；MVA途径的关键基因的表达盒的启动子为AOX1启动子，碱基序列如SEQ ID NO.2所示，终止子为TAOX终止子，碱基序列如SEQ ID NO.4所示；融合基因A和广藿香醇合成酶编码基因PTS的整合、MVA途径的关键基因的整合均通过质粒pPICZA实现。7.一种高效生产广藿香醇的工程菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：林影，梁书利，罗广娟，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：