一种治疗卵巢癌且逆转顺铂耐药的中药及制备方法技术

本发明专利技术公开一种治疗卵巢癌且逆转顺铂耐药的中药，所用原料的组分及质量比如下：生黄芪30、茯苓20、通关藤20、半枝莲15、白花蛇舌草15、齐头蒿15、党参15、重楼15、白术10、虎杖10、金果榄10、夏枯草10、甘草10。各组份相互作用，具有逆转肿瘤耐药、抑制卵巢癌细胞生长增殖、诱导癌细胞凋亡、导致细胞周期阻滞、抑制癌细胞转移等疗效，可以和药学上可接受的载体制备成各种剂型药物，方便临床服用，疗效可靠，使用安全。其制备方法可操作性强，成本低、环保、可实现工业化大生产。实现工业化大生产。实现工业化大生产。

【技术实现步骤摘要】
一种治疗卵巢癌且逆转顺铂耐药的中药及制备方法


[0001]本专利技术涉及一种治疗卵巢癌的药物及制备方法，尤其是一种治疗卵巢癌、且逆转顺铂耐药的中药及制备方法。

技术介绍

[0002]卵巢癌是女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，目前临床上主要以手术切除并辅助以化疗药物（顺铂和卡钼）作为基本治疗方案。铂类药物是一种具有高度生物学活性的小分子化合物，在肿瘤细胞中通过诱导链内和链间DNA交联和DNA加合物的形成，阻断DNA复制和转录，产生DNA改变，并增加细胞的氧化水平，以此达到杀伤肿瘤细胞的作用。但是铂类药物持续使DNA损伤反应存在，故持续诱导激活损伤修复途径，进而致使DNA损伤修复能力增强，引发铂类耐药。另一方面，谷胱甘肽是目前公认的细胞内合成量最多的抗氧化因子，可有效清除ROS，修复DNA损伤，增强细胞抵抗外界有害刺激，因此人卵巢癌细胞株对顺铂的高耐药性与谷胱甘肽的合成呈显著正相关。但是谷胱甘肽的过度合成会打破肿瘤细胞原有的氧化还原平衡，使肿瘤细胞从铂类药物诱导的ROS氧化损伤中逃逸，从而降低其对铂类药物的化疗敏感性。因此，虽然化疗药物具有抑制手术无法切除的或远处转移癌细胞的生长的作用，但是在肿瘤的化疗治疗过程中，仅有80%的卵巢癌患者对含铂方案化疗敏感，约有60%的患者会复发且大部分是一线化疗后出现继发性耐药。化疗药物的不敏感性及耐药，极大地影响卵巢癌的治疗效果，使得卵巢癌５年生存率仅有30％左右，死亡率高居女性生殖系统肿瘤的首位。

技术实现思路

[0003]本专利技术是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种疗效可靠、副作用小的治疗卵巢癌、逆转顺铂耐药的中药及制备方法。
[0004]本专利技术的技术解决方案是：一种治疗卵巢癌且逆转顺铂耐药的中药，所用原料的组分及质量比如下：生黄芪30、茯苓20、通关藤20、半枝莲15、白花蛇舌草15、齐头蒿15、党参15、重楼15、白术10、虎杖10、金果榄10、夏枯草10、甘草10 。
[0005]一种上述治疗卵巢癌且逆转顺铂耐药的中药的制备方法，依次按照如下步骤进行： a. 将生黄芪、茯苓、通关藤、半枝莲、白花蛇舌草、齐头蒿、党参、重楼、白术、虎杖、金果榄、夏枯草及甘草混合并粉碎，置于烧瓶中，加入总原料8倍量的纯净水，振摇混合，浸泡30分钟得浸泡液； b. 以冷凝回流装置对浸泡液进行回流提取，回流提取1.5小时，收集一次药液并过滤；向回流提取后的药渣中加入5倍量的蒸馏水，加热提取2小时并过滤，得二次药液；将两次所得滤液合并，用旋转蒸发仪浓缩至1g/ml，得浓缩液； c. 将浓缩液放入
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80冰箱中冷冻8小时后放入冻干机，冻干成粉末。
[0006]本专利技术是以副作用小的中草药物配制而成，各组份相互作用，具有逆转肿瘤耐药、
抑制卵巢癌细胞生长增殖、诱导癌细胞凋亡、导致细胞周期阻滞、抑制癌细胞转移等疗效，可以和药学上可接受的载体制备成各种剂型药物，方便临床服用，疗效可靠，使用安全。其制备方法可操作性强，成本低、环保、可实现工业化大生产。
附图说明
[0007]图1是本专利技术实施例药物对SKOV3、A2780及IOSE
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80细胞活力的影响示意图。
[0008]图2是本专利技术实施例药物协同顺铂抑制卵巢癌细胞SKOV3/DDP的生长增殖示意图。
[0009]图3是本专利技术实施例药物通过平板细胞克隆形成实验观察SKOV3细胞克隆形成能力图。
[0010]图4是本专利技术实施例药物对SKOV3细胞凋亡作用效果图。
[0011]图5是本专利技术实施例药物流式细胞仪检测细胞内ROS水平结果图。
[0012]图6是本专利技术实施例药物流式细胞仪检测细胞周期结果图。
[0013]图7是本专利技术实施例药物划痕实验研究SKOV3细胞迁移能力结果图。
[0014]图8是本专利技术实施例药物7 对SKOV3细胞用药后纵向迁移实验结果图。
实施方式实施例
[0015]本专利技术的治疗卵巢癌且逆转顺铂耐药的中药依次按照如下步骤制备：a. 将原料生黄芪30g、茯苓20g、通关藤20g、半枝莲15g、白花蛇舌草15g、齐头蒿15g、党参15g、重楼15g、白术10g、虎杖10g、金果榄10g、夏枯草10g、甘草10g混合、粉碎，置于圆底烧瓶中，加入总原料8倍量的纯净水，振摇混合，浸泡30分钟；b. 以冷凝回流装置对浸泡液进行回流提取，回流提取1.5小时，收集一次药液并过滤；向回流提取后的药渣中加入5倍量的蒸馏水，加热提取2小时并过滤，得二次药液；将两次所得滤液合并，用旋转蒸发仪浓缩至1g/ml，得浓缩液；c. 将浓缩液放入
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80冰箱中冷冻8小时后放入冻干机，冻干成粉末。
[0016]实验：1. 细胞培养A2780、SKOV3细胞为人卵巢癌细胞，IOSE
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80细胞是卵巢正常细胞，均是贴壁细胞。取出冻存细胞，37℃水浴锅中快速摇晃融化。将细胞转移到离心管中，放入细胞所需培养液，离心（1000rpm，3min），重悬，放于直径100mm的培养皿里，加入培养液至9mL。在37℃，5%CO2，湿度10%中的培养箱中培养。当细胞密度为1
×
106个/mL时传代。
[0017]2. CCK
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8实验（1）铺板：将细胞悬液进行稀释，通过细胞计数板进行计数，取计数板四个象限的平均值，重复计数两次。孔板选择96孔板，将细胞悬液加入至96孔板内，细胞接种密度为5000个/100μL。实验包含7个实验组（接种细胞并加药），一个对照组（接种细胞但不加药）。96孔板周围一圈加入PBS防止培养基挥发。放入培养箱内进行培养24小时。
[0018]（2）加药：取药液母液，经过逐级稀释将药液配置成不同浓度。药液母液所述药液母液的制备方法是称实施例1所得冻干粉的重量后，将粉末放入研钵，钵杵研磨均匀后分装
至15mL离心管中，密封，保持干燥，保存于
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20冰箱中。使用前将药物充分溶解于培养基，配置成100mg/mL，经0.22μm孔径的滤头过滤后，即为药液母液。将96孔板内培养基吸出，按照分组，空白组及对照组加入空白培养基，加药组加入配置好的不同浓度的药，每孔加入100μL，继续放入培养箱内培养24小时。
[0019]（3）测吸光度：将空白培养基与CCK
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8检测试剂按照10：1的比例进行混合。96孔板从培养箱中取出，将96孔板内的培养基吸出，加入混合好的试剂100μL/孔，在37℃细胞培养箱中放置2小时。酶标仪设定在450nm波长，检测吸光度。
[0020]计算：细胞生存率=（SB
‑
HD组OD值
−
Blank组OD值）/（Control组OD值
−
Blank组OD值）
×
100%。实验重复三次。
[0021]3. 平板细胞克隆形成实验孔板选定为6孔板，实验时确保细胞生长状态良好，胰酶消化后，使用计数板进行计数，每孔细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种治疗卵巢癌且逆转顺铂耐药的中药，其特征在于所用原料的组分及质量比如下：生黄芪30、茯苓20、通关藤20、半枝莲15、白花蛇舌草15、齐头蒿15、党参15、重楼15、白术10、虎杖10、金果榄10、夏枯草10、甘草10。2.一种如权利要求1所述治疗卵巢癌且逆转顺铂耐药的中药的制备方法，其特征在于依次按照如下步骤进行： a. 将生黄芪、茯苓、通关藤、半枝莲、白花蛇舌草、齐头蒿、党参、重楼、白术、虎杖、金果榄、夏...

【专利技术属性】
技术研发人员：张琳，姜宝娜，曲佳琳，马俊楠，隋雪，赵志浩，丁凯悦，张柳，崔革哲，夏仑越，杨雨桐，刘艺，姚茹馨，
申请(专利权)人：大连医科大学，
类型：发明
国别省市：