【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于活性肽筛选及应用领域，涉及抗pd作用的海参肽及其计算机模拟筛选、合成方法和在治疗帕金森病中的应用。
技术介绍
1、帕金森病(parkinson's disease,pd)是仅次于阿尔兹海默症的第二大神经退行性疾病。由于其黑质(sn)致密部(snpc)中多巴胺能(daergic)神经元的逐渐丧失以及α-突触核蛋白(α-syn)在路易体(lb)的结构中的聚集，从而导致运动障碍，包括运动迟缓、静止性震颤和肌肉强直等。虽然pd的发病机制和进展尚未完全了解，但大量研究表明氧化应激和线粒体功能障碍在帕金森病的发病机制中起重要作用。氧化应激的主要特征是活性氧(reactive oxygen species，ros)水平升高，抗氧化系统减少或功能失调，以对抗自由基。鱼藤酮(rot)容易穿过血脑屏障，可以选择性抑制线粒体复合物i的活性可引起线粒体功能障碍、导致atp产生减少和产生大量ros，从而诱导氧化应激造成黑质纹状体多巴胺能系统损伤。目前，临床上使用的大多数治疗pd的药物难以阻止或减缓疾病进展。左旋多巴是治疗帕金森病有效缓解的药物，但是左旋多巴的长期使用可能会加剧pd患者的运动障碍。由于pd治疗的局限性，因此迫切需要开发新的药物来对抗这种疾病。
2、生物活性肽(bps)是一种含有两个以上氨基酸残基的小片段，其有着重要的营养价值，以及抗氧化、神经保护和免疫调节等多种生物活性。其中，海洋生物肽具有抗氧化、抗炎、抗疲劳、神经保护等生物活性功能，是生物活性肽的重要来源。海参(sea cucumber)是重要的传统滋补品，长期
3、海参肽(scp)有众多的生物活性功能，其中在神经保护方面发挥着非常重要的作用，但是很少有明确的scp对pd的报道。因此，本专利技术的目的是研究scp对rot诱导的pd的治疗潜力。通过体内和体外实验研究scp水解提取物缓解的pd能力。然后使用肽组学分析结合计算机模拟分析的方式，进一步筛选有潜在治疗pd活性的确切scp分子并进行合成。最后通过体内、体外实验研究其治疗pd的生物活性和作用机制。
技术实现思路
1、为了解决海参肽用于抗pd作用的问题，在第一方面，根据本申请一些实施例的活性肽，其氨基酸序列为gln-trp-phe-asp-trp。
2、在第二方面，根据本申请一些实施例的第一方面所述活性肽的制备方法，由fmoc/tbu固相法合成。
3、在第三方面，根据本申请一些实施例的海参肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4、s10.浆状海参与蒸馏水混合于反应容器中得第一混合物；
5、s20.将4％(w/w)胃蛋白酶加入第一混合物中搅拌酶解得第二混合物，酶解温度为37℃，酶解ph为2.0，酶解时间为3h；
6、s30.将4％(w/w)胰蛋白酶加入第二混合物中搅拌酶解得第三混合物，酶解温度为37℃，酶解ph为8.0，酶解时间为3h；
7、s40.将第三混合物升温至65-70℃，搅拌30min进行灭酶；
8、s50.将4％(w/w)碱性蛋白酶加入灭酶后的第三混合物中搅拌酶解得第四混合物，酶解温度为50℃，酶解ph为9.0，酶解时间为3h；
9、s60.将混合物4％(w/w)木瓜蛋白酶加入第四混合物中搅拌酶解得第五混合物，酶解温度为50℃，酶解ph为6.0，酶解时间为3h；
10、s70.将第五混合物进行沸水浴后离心，取上清液冷冻干燥得所述海参肽。
11、根据本申请一些实施例的所述制备方法，其中，浆状海参与10％(w/v)蒸馏水混合放入反应容器中；
12、其中，沸水浴10min；
13、其中，用0.1mol/lhcl和/或naoh调节ph。
14、在第四方面，根据本申请一些实施例的第三方面所述方法制备的海参肽。
15、在第五方面，根据本申请一些实施例的筛选抗pd活性海参肽的方法，包括如下步骤：
16、取第四方面所述海参肽脱盐；
17、将脱盐后的海参肽进行液相色谱-质谱分析；
18、根据质谱数据鉴定海参肽的肽段；
19、对海参肽的各肽段分析其生物活性，毒性，理化性质，吸收、分布和代谢特征，排泄特性以及抗氧化、抗炎、神经保护的活性；
20、根据分析筛选潜在抗pd活性海参肽。
21、在第六方面，根据本申请一些实施例的第五方面所述方法筛选的海参肽。
22、根据本申请一些实施例的所述海参肽，其氨基酸序列为gln-trp-phe-asp-trp。
23、在第七方面，根据本申请一些实施例的任一方面所述肽(活性肽)在制备治疗退行性神经性疾病中的应用，或在制备治疗帕金森病中的应用，或在制备治疗癫痫病药物中的应用，或在制备降低rot诱导的sh-sy5y细胞的内源ros含量药物中的应用，或在制备减轻线粒体膜电位损伤药物中的应用。
24、在第八方面，根据本申请一些实施例的计算机模拟分析在筛选抗pd活性海参肽中的应用。
25、本专利技术的有益效果：本专利技术用scp混合物处理rot诱导的c57bl/6j小鼠和sh-sy5y细胞，对小鼠的行为学水平、组织病理学水平、细胞的存活率以及其体外潜在生物活性进行评价。肽组学分析结合计算机模拟分析的方式构建海参肽谱，分析筛选具有潜在抗pd功能的新型海参肽。用鱼藤酮(rotenone,rot)诱导的7d龄斑马鱼幼鱼和sh-sy5y细胞，研究候选肽的抗pd的作用和机制。
26、海参肽混合物可以改善rot诱导的小鼠行为学水平、减轻黑质多巴胺能神经元的丢失，并提高rot诱导的s本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种活性肽，其特征在于，其氨基酸序列为Gln-Trp-Phe-Asp-Trp。
2.权利要求1所述活性肽的制备方法，其特征在于，由Fmoc/tBu固相法合成。
3.一种海参肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，其中，浆状海参与10％(w/v)蒸馏水混合放入反应容器中；
5.权利要求3或4所述方法制备的海参肽。
6.一种筛选抗PD活性海参肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：
7.权利要求6所述方法筛选的海参肽。
8.根据权利要求7所述海参肽，其特征在于，其氨基酸序列为Gln-Trp-Phe-Asp-Trp。
9.权利要求1，5，7，8任一项所述肽在制备治疗退行性神经性疾病中的应用，或在制备治疗帕金森病中的应用，或在制备治疗癫痫病药物中的应用，或在制备降低Rot诱导的SH-SY5Y细胞的内源ROS含量药物中的应用，或在制备减轻线粒体膜电位损伤药物中的应用。
10.计算机模拟分析在筛选抗PD活性海参肽中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种活性肽，其特征在于，其氨基酸序列为gln-trp-phe-asp-trp。
2.权利要求1所述活性肽的制备方法，其特征在于，由fmoc/tbu固相法合成。
3.一种海参肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，其中，浆状海参与10％(w/v)蒸馏水混合放入反应容器中；
5.权利要求3或4所述方法制备的海参肽。
6.一种筛选抗pd活性海参肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：<...
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