本发明专利技术涉及一种依达拉奉注射液有关物质的检测方法。本发明专利技术提供的检测方法采用高效液相色谱法，色谱柱使用非极性固定相作为填充剂；以磷酸盐为流动相A，以甲醇为流动相B；按照梯度洗脱方式对样品进行洗脱。本发明专利技术可以实现依达拉奉注射液中各杂质的有效分离，且依达拉奉与各杂质、各杂质之间的分离度较好，各杂质的检测限低，灵敏度高。利用本发明专利技术的检测方法可以快速准确地、以高灵敏度进行依达拉奉注射液有关物质的定量分析，保证本品的质量可控性。性。性。
【技术实现步骤摘要】
一种依达拉奉注射液有关物质的检测方法
[0001]本专利技术属于药品质量分析
，涉及一种依达拉奉有关物质的检测方法。
技术介绍
[0002]依达拉奉，化学名为3
‑
甲基
‑1‑
苯基
‑2‑
吡唑啉
‑5‑
酮，分子式为C
10
H
10
N2O，是一种脑保护剂(自由基清除剂)。机理研究表明，依达拉奉可清除自由基，抑制脂质过氧化，从而抑制脑细胞、血管内皮细胞、神经细胞的氧化损伤。
[0003]依达拉奉的结构式如下：
[0004][0005]依达拉奉最先于2001年6月在日本以注射剂的剂型上市，商品名为Radicut；该药是临床上第一个用于治疗急性脑梗死的自由基清除剂。依达拉奉具有清除自由基、抑制脂质过氧化及减轻缺血脑细胞、血管内皮细胞、神经细胞的氧化和再灌注损伤的作用，并可阻止脑水肿和脑梗死进展，改善因急性脑梗死所致的神经症状、日常生活活动能力和功能障碍，应用前景广阔。
[0006]研究发现，固体状态的依达拉奉比较稳定，但其水溶液易发生氧化还原反应而降解，杂质的存在一方面可能影响药效活性，另一方面可能增加药物的不良反应。因此，依达拉奉注射液中的有关物质含量控制，具有重要的意义。
[0007]苯肼是依达拉奉合成过程中易产生的中间体，有强烈的溶血作用，因此限度较低，一般使用另外的方法单独检测。日本药典标准(JP17)中公开了针对原研依达拉奉注射液的有关物质检测方法，但该方法需要分别单独检测杂质A和杂质I，且杂质之间的分离度不好。中国药典标准中公开的依达拉奉注射液有关物质检测方法，能检测杂质I(要求依达拉奉峰与杂质Ⅰ峰的分离度应大于8.0)，但不能同时有效检测杂质A、杂质B。因此，日本药典标准和中国药典标准中的依达拉奉注射液有关物质检测方法均无法有效同时分离本品中存在的杂质A、杂质B、杂质I。
技术实现思路
[0008]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种依达拉奉注射液有关物质的检测方法。采用本专利技术提供的检测方法可以实现依达拉奉注射液中各杂质的有效分离，且依达拉奉与各杂质、各杂质之间的分离度较好，各杂质的检测限低，灵敏度高。
[0009]本专利技术采用的技术方案如下。
[0010]一种依达拉奉注射液有关物质的检测方法，所述检测方法采用高效液相色谱法，色谱条件为：
[0011]色谱柱使用非极性固定相作为填充剂；以磷酸盐为流动相A，以甲醇为流动相B；按照梯度洗脱方式对样品进行洗脱。
[0012]进一步地，所述磷酸盐为磷酸二氢铵。
[0013]更进一步地，所述磷酸二氢铵的浓度为0.04
‑
0.06M。
[0014]更进一步地，所述磷酸二氢铵的浓度为0.045
‑
0.055M。
[0015]进一步地，所述梯度洗脱时，所述流动相A和流动相B的体积比为30
‑
90：10
‑
70。
[0016]更进一步地，按照下表进行梯度洗脱：
[0017]运行时间(min)流动相A(％)流动相B(％)070
‑
9010
‑
305
‑
1070
‑
9010
‑
3030
‑
6030
‑
5050
‑
7040
‑
8030
‑
5050
‑
7040.1
‑
10070
‑
9010
‑
3050
‑
10070
‑
9010
‑
30。
[0018]更进一步地，按照下表进行梯度洗脱：
[0019]运行时间(min)流动相A(％)流动相B(％)0821810821850406065406065.18218758218。
[0020]进一步地，所述流动相的流速为0.5
‑
2.0mL/min。
[0021]更进一步地，所述流动相的流速为0.9
‑
1.1mL/min。
[0022]更进一步地，所述流动相的流速为1.0mL/min。
[0023]进一步地，所述色谱柱使用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂。
[0024]更进一步地，所述十八烷基硅烷键合硅胶规格为250mm
×
4.6mm，3
‑
5μm。
[0025]更进一步地，所述色谱柱为Inertsustain C18色谱柱、Waters Xbridge C18色谱柱、Aglient Elipse
‑
C18色谱柱或其他效能相当的色谱柱。
[0026]进一步地，所述高效液相色谱法采用二极管阵列检测器、紫外检测器、示差折光检测器或蒸发光散射检测器进行分析。
[0027]更进一步地，所述高效液相色谱法采用紫外吸收检测器进行分析。
[0028]更进一步地，检测波长为230
‑
250nm。
[0029]更进一步地，检测波长为235
‑
245nm。
[0030]更进一步地，检测波长为238
‑
242nm。
[0031]进一步地，所述色谱柱的柱温为20
‑
50℃。
[0032]更进一步地，所述色谱柱的柱温为30
‑
40℃。
[0033]更进一步地，所述色谱柱的柱温为35℃.
[0034]进一步地，所述磷酸盐的pH为3.0
‑
4.0。
[0035]更进一步地，所述磷酸盐的pH为3.3
‑
3.7。
[0036]进一步地，所述有关物质包括依达拉奉杂质A、依达拉奉杂质B、依达拉奉杂质I、苯肼中的一种或多种。
[0037]进一步地，所述检测方法采用高效液相色谱法，色谱条件具体为：色谱柱使用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂，所述色谱柱具体为Waters Xbridge C18色谱柱，250mm
×
4.6mm，5μm；所述色谱柱的柱温为35℃；所述高效液相色谱法采用紫外吸收检测器进行分析，检测波长为240nm；以pH为3.5的磷酸二氢铵溶液为流动相A，以甲醇为流动相B；流速为1.0mL/min；按照下表进行梯度洗脱：
[0038]运行时间(min)流动相A(％)流动相B(％)0821810821850406065406065.18218758218。
附图说明
[0039]图1为实施例1中的有关物质检测方法1对应的色谱图。
[0040]图2为实施例2中的有关物质检测方法2对应的色谱图。
[0041]图3为参考例中的有关物质检测方法对应的色谱图。
具体实施方式
[0042](一本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种依达拉奉注射液有关物质的检测方法，其特征在于，所述检测方法采用高效液相色谱法，色谱条件为：色谱柱使用非极性固定相作为填充剂；以磷酸盐为流动相A，以甲醇为流动相B；按照梯度洗脱方式对样品进行洗脱。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸盐为磷酸二氢铵，优选地，所述磷酸二氢铵的浓度为0.04
‑
0.06M；更优选地，所述磷酸二氢铵的浓度为0.045
‑
0.055M。3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱时，所述流动相A和流动相B的体积比为30
‑
90：10
‑
70；优选地，按照下表进行梯度洗脱：运行时间/min流动相A/％流动相B/％070
‑
9010
‑
305
‑
1070
‑
9010
‑
3030
‑
6030
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5050
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7040
‑
8030
‑
5050
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7040.1
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10070
‑
9010
‑
3050
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10070
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9010
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30；更优选地，按照下表进行梯度洗脱：运行时间/min流动相A/％流动相B/％0821810821850406065406065.18218758218。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的检测方法，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡玉琴，姚洛芫，张峰，朱素华，张玉涵，马昀，
申请(专利权)人：南京优科制药有限公司南京力博维制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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