本发明专利技术提供了基因HSF5或/和蛋白HSF5在制备用于诊断特发性不孕不育症的产品中的应用；本申请发现特发性不孕不育症与基因HSF5异常有关或/和蛋白HSF5表达水平异常有关，所述蛋白HSF5表达水平异常包括：HSF5蛋白提前终止表达，或者HSF5蛋白重要功能域中氨基酸缺失、插入或替换。表明基因HSF5或/和蛋白HSF5可以在制备用于诊断特发性不孕不育症的产品中进行应用。通过对HSF5基因或其编码蛋白表达水平的检测结果，可以对特发性不孕不育症进行早期诊断、指导治疗和预后判断。指导治疗和预后判断。指导治疗和预后判断。
【技术实现步骤摘要】
基因HSF5或/和蛋白HSF5在制备用于诊断特发性不孕不育症的产品中的应用
[0001]本专利技术涉及分子生物学和医学
，特别涉及基因HSF5或/和蛋白HSF5在制备用于诊断特发性不孕不育症的产品中的应用。
技术介绍
[0002]不孕不育由遗传因素(基因突变)在导致的配子(精子或卵子)发生障碍中占比重较大。通过探究遗传机制，发现减数分裂的精准完成对遗传信息的稳定传递至关重要。在同源染色体联会阶段，大量减数分裂特异性基因应时空表达并完成特定功能。如何检测不孕不育患者对明确特发性不孕不育的病因及靶向治疗具有重要的实践意义。
[0003]因此，需要开发用于诊断特发性不孕不育症的产品。
技术实现思路
[0004]本专利技术目的是提供基因HSF5或/和蛋白HSF5在制备用于诊断特发性不孕不育症的产品中的应用，可明确诊断特发性不孕不育症，在改善不孕不育方面具有重要的意义。
[0005]在本专利技术的第一方面，提供了基因HSF5或/和蛋白HSF5在制备用于诊断特发性不孕不育症的产品中的应用。
[0006]进一步地，所述用于诊断特发性不孕不育症的产品包括：用于检测HSF5基因异常的产品；或/和用于检测蛋白HSF5表达水平异常的产品。
[0007]进一步地，所述HSF5基因异常包括：基因序列存在单或多碱基序列缺失、插入或替换。
[0008]进一步地，所述用于检测HSF5基因异常的产品包括检测HSF5基因的引物。
[0009]进一步地，所述蛋白HSF5表达水平异常包括：HSF5蛋白提前终止表达，或者HSF5蛋白重要功能域中氨基酸缺失、插入或替换。
[0010]所述HSF5蛋白重要功能域具体为：单链DNA结合域，其他未知功能域。
[0011]进一步地，所述用于检测蛋白HSF5表达水平异常的产品包括：特异性结合所述HSF5蛋白的抗体。
[0012]在本专利技术的第二方面，提供了HSF5蛋白的抗体在制备用于诊断特发性不孕不育症的产品中的应用。
[0013]在本专利技术的第三方面，提供了用于检测HSF5基因异常的引物对在制备用于诊断特发性不孕不育症的产品中的应用。
[0014]进一步地，所述用于检测HSF5基因异常的引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO：1
‑
SEQ ID NO：12所示。
[0015]在本专利技术的第四方面，提供了一种用于诊断特发性不孕不育症的产品，所述用于诊断特发性不孕不育症的产品包括：用于检测HSF5基因异常的引物对，所述引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO：1
‑
SEQ ID NO：12所示。
[0016]本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
[0017]本申请通过研究发现，敲除模式小鼠(C57bl/6)中Hsf5，雄性小鼠表现为精子缺失和不育；在生精过程中，具体表现为精母细胞发育会阻滞到减数分裂前1期粗线期；而雌性卵巢中不表达该基因，故敲除后雌性配子发育正常且个体可孕。在其他有关哺乳动物的研究中，HSF5蛋白在野猪(Sus scrofa)的卵巢中高表达；但在饲养猪(Duroc pig)中参与雄性精子发生；另外，在马(Equus caballus)的雌性幼体中，HSF5也呈现高表达。而在人的不同组织中，HSF5呈现与小鼠相似的睾丸高表达特征。随后通过实验发现检测基因HSF5异常或/和蛋白HSF5的表达水平异常可用于诊断特发性不孕不育症，因此基因HSF5或/和蛋白HSF5可以在制备用于诊断特发性不孕不育症的产品中应用，可明确诊断特发性不孕不育症，在改善不孕不育方面具有重要的意义。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
[0019]图1为本专利技术实施例1的结果；
[0020]图2为本专利技术实施例2的结果；
[0021]图3为本专利技术实施例3的结果。
具体实施方式
[0022]下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本专利技术，本专利技术的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本专利技术，而非限制本专利技术。
[0023]在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
[0024]除非另有特别说明，本专利技术中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买获得或者可通过现有方法获得。
[0025]本申请实施例的技术方案为解决上述技术问题，总体思路如下：
[0026]本申请专利技术人在研究中发现，敲除模式小鼠(C57bl/6)中的Hsf5基因，雄性小鼠表现为精子缺失和不育；在生精过程中，具体表现为精母细胞发育会阻滞到减数分裂前1期粗线期；而雌性卵巢中不表达该基因，故敲除后雌性配子发育正常且个体可孕。
[0027]实施例1中Hsf5基因敲除导致小鼠睾丸精子发生过程受阻和数量产生严重减少，这导致小鼠生育率下降。
[0028]实施例2中纯合敲除Hsf5基因小鼠外显子2、3区段缺失，表明特发性雄性不育与Hsf5基因异常相关。
[0029]实施例3中Hsf5基因敲除鼠中HSF5蛋白表达水平和野生小鼠(对照)相比存在明显差异，Hsf5基因敲除鼠中HSF5蛋白表达提前终止，表明特发性雄性不育与Hsf5蛋白表达水
平异常相关。
[0030]下面将结合实施例及实验数据对本申请的基因HSF5或/和蛋白HSF5在制备用于诊断特发性不孕不育症的产品中的应用进行详细说明。
[0031]实施例1
[0032]1、材料
[0033]收集正常小鼠和Hsf5基因敲除小鼠的睾丸及附睾组织。
[0034]2、睾丸大小测量及称重、睾丸组织固定、切片和组织学染色检测精子数量、免疫荧光检测蛋白定位。操作如下：
[0035](1)解剖出完整的小鼠睾丸及附睾组织；摆放整齐后，使用刻度尺进行测量睾丸大小变化并进行统计学分析。
[0036](2)取每只小鼠的单侧睾丸进行石蜡切片前固定、包埋处理；将包埋好的组织进行切片、脱蜡处理。
[0037](3)对石蜡切片进行HE染色，封片处理；观察曲精小管中精子数量变化，并进行统计学分析。
[0038](4)对小鼠单侧睾丸进行总蛋白提取，免疫印迹检测蛋白表达水平。
[0039](5)对小鼠单侧睾丸进行多聚甲醛(4％)固定、蔗糖(30％)脱水处理；包埋后放置
‑
80℃冷却硬化、切片。
[0040](6)对获得的冰冻组织切片进行抗原修复、封闭、抗体孵育和荧光检测；分析蛋白表达本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.基因HSF5或/和蛋白HSF5在制备用于诊断特发性不孕不育症的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述用于诊断特发性不孕不育症的产品包括：用于检测HSF5基因异常的产品；或/和用于检测蛋白HSF5表达水平异常的产品。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述HSF5基因异常包括：基因序列存在单或多碱基序列缺失、插入或替换。4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述用于检测HSF5基因异常的产品包括检测HSF5基因的引物。5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述蛋白HSF5表达水平异常包括：HSF5蛋白提前终止表达，或者HSF5蛋白重要功能域中氨基酸缺失、插入或替换。6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：罗孟成，徐亚廷，曹羽明，孙齐，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：
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