本申请涉及生物医学领域，尤其涉及一种Rhobtb1基因在诊断卵巢衰老中的应用；所述应用包括：将低于正常甲基化水平的Rhobtb1基因作为诊断卵巢衰老的标志物的应用；其中，所述的Rhobtb1基因的甲基化区域为启动子区域；所述Rhobtb1基因的甲基化水平低于所述正常Rhobtb1基因的甲基化水平的10％及以上；所述试剂盒包括检测Rhobtb1基因甲基化水平和/或RHOBTB1蛋白表达水平的试剂；卵巢功能正常小鼠和卵巢衰老小鼠在Rhobtb1基因启动子区域的甲基化水平上具有明显的差异，而该差异可以作为诊断卵巢衰老的重要依据，因此通过对Rhobtb1基因的启动子区域的甲基化水平和蛋白水平的测定，就能明确卵巢衰老的程度，使得Rhobtb1基因可以作为诊断卵巢衰老的标志物，从而填补了有关Rhobtb1基因甲基化和卵巢衰老之间关联的空白。之间关联的空白。之间关联的空白。
【技术实现步骤摘要】
一种Rhobtb1基因在诊断卵巢衰老中的应用
[0001]本申请涉及生物医学领域，尤其涉及一种Rhobtb1基因在诊断卵巢衰老中的应用。
技术介绍
[0002]卵巢作为女性的最核心生殖器官之一，兼具行使生育功能和维持机体内分泌稳态的重要作用。卵巢衰老不仅能引起的女性内分泌功能紊乱、早绝经以及不孕不育等生殖内分泌问题，还能导致一系列远期不良结局，包括加速的认知损伤、心血管疾病、骨质疏松等。因此，对卵巢衰老的预警、早期诊断和治疗在衰老领域越来越受到关注。
[0003]卵巢衰老是一个受多因素影响，逐渐积累的复杂的生物过程。卵巢衰老包括年龄相关卵巢自然衰老，还有各种原因所致的早绝经、卵巢储备下降、早发性卵巢功能不全和卵巢早衰等。卵巢衰老过程受到年龄、遗传、环境、免疫等多种复杂因素的影响，并且涉及到多种分子的调节，尤其是在转录调控水平，然而，目前对调控卵巢衰老的具体分子机制尚不明确，导致现阶段中缺乏卵巢衰老的早期预警、诊断及干预用的标志物和分子靶点。
[0004]目前，DNA甲基化在年龄相关疾患的发生发展、治疗和预后中展现出非常重要的作用。视网膜母细胞瘤蛋白Rhobtb1是第一个从分子层面上发现且定义的抑癌基因，而视网膜母细胞瘤蛋白Rhobtb1在体内行使多种机能，与细胞增殖、细胞周期进展和细胞凋亡等关键环节的调控密切相关，但是目前缺乏有关Rhobtb1基因甲基化和卵巢衰老之间的关联。因此，如何提供一种Rhobtb1基因在诊断卵巢衰老中的应用，以填补有关Rhobtb1基因甲基化和卵巢衰老之间关联的空白，是目前亟需解决的技术问题。
技术实现思路
[0005]本申请提供了一种Rhobtb1基因在诊断卵巢衰老中的应用，以填补现有技术中Rhobtb1基因甲基化和卵巢衰老之间关联的空白。
[0006]第一方面，本申请提供了一种Rhobtb1基因在作为诊断卵巢衰老的标志物的应用，所述应用包括：将低于正常甲基化水平的Rhobtb1基因作为诊断卵巢衰老的标志物的应用；其中，所述Rhobtb1基因的甲基化区域为启动子区域；所述Rhobtb1基因的甲基化水平低于正常Rhobtb1基因的甲基化水平的10％及以上。
[0007]可选的，所述Rhobtb1基因的甲基化水平和所述卵巢衰老呈负相关。
[0008]可选的，所述标志物还包括所述Rhobtb1基因所表达的RHOBTB1蛋白。
[0009]可选的，所述RHOBTB1蛋白表达水平和所述卵巢衰老呈正相关。
[0010]可选的，所述卵巢衰老的原因包括自然绝经、卵巢早衰、早发性卵巢功能不全和卵巢储备功能下降中的至少一种。
[0011]可选的，所述卵巢衰老的特征包括：卵巢的抗米勒管激素水平＜1.1ng/ml；和/或，
[0012]卵巢的窦卵泡数＜至6个；和/或，
[0013]卵巢的促卵泡生成激素水平＞10U/L。
[0014]本申请还提供了一种Rhobtb1基因在作为诊断卵巢衰老的试剂盒中的应用，所述
试剂盒包括检测Rhobtb1基因的甲基化水平和/或RHOBTB1蛋白水平的试剂；其中，所述Rhobtb1基因的甲基化区域为启动子区域。
[0015]可选的，所述试剂盒包括用于检测所述Rhobtb1基因甲基化水平的扩增引物组，所述扩增引物组包括第一组扩增引物对、第二组扩增引物对、第三组扩增引物对、第四组扩增引物对、第五组扩增引物对和第六组扩增引物对。
[0016]可选的，所述第一组扩增引物对的上游引物序列如SEQ ID NO：1所示，所述第一组扩增引物的下游引物序列如SEQ ID NO：2；和/或，
[0017]所述第二组扩增引物对的上游引物序列如SEQ ID NO：3所示，所述第二组扩增引物对的下游引物序列如SEQ ID NO：4所示；和/或，
[0018]所述第三组扩增引物对的上游引物序列如SEQ ID NO：5所示，所述第三组扩增引物对的下游引物序列如SEQ ID NO：6所示；和/或，
[0019]所述第四组扩增引物对的上游引物序列如SEQ ID NO：7所示，所述第四组扩增引物对的下游引物序列如SEQ ID NO：8所示；和/或，
[0020]所述第五组扩增引物对的上游引物序列如SEQ ID NO：9所示，所述第五组扩增引物对的下游引物序列如SEQ ID NO：10所示；和/或，
[0021]所述第六组扩增引物对的上游引物序列如SEQ ID NO：11所示，所述第六组扩增引物对的下游引物序列如SEQ ID NO：12所示。
[0022]可选的，所述试剂盒还包括：Rhobtb1基因提取试剂、RHOBTB1蛋白特异性抗体、RHOBTB1蛋白免疫印记实验试剂、甲基化片段富集试剂、DNA甲基化测序试剂和DNA甲基化分析试剂中的至少一种。
[0023]本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
[0024]本申请实施例提供的一种Rhobtb1基因在作为诊断卵巢衰老的标志物中的应用，通过动物实验发现，卵巢功能正常小鼠和卵巢衰老小鼠在Rhobtb1基因的启动子区域的甲基化水平上具有明显的差异，而该差异可以作为诊断卵巢衰老的重要依据，因此通过对Rhobtb1基因的启动子区域的甲基化水平的测定，就能明确卵巢衰老的程度，使得Rhobtb1基因可以作为诊断卵巢衰老的标志物，从而填补了有关Rhobtb1基因甲基化和卵巢衰老之间关联的空白。
附图说明
[0025]此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本申请的实施例，并与说明书一起用于解释本申请的原理。
[0026]为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0027]图1为本申请实施例提供的为C57小鼠各个年龄时间点的卵巢的RHOBTB1蛋白的免疫组化染色结果及数据分析图；
[0028]图2为本申请实施例提供在不同浓度对羟基苯甲酸丙酯的暴露之下人卵巢颗粒细胞(KGN)的凋亡情况的统计结果图；
[0029]图3为本申请实施例提供在不同浓度对羟基苯甲酸丙酯的暴露之下KGN的Rhobtb1
的启动子区域的甲基化水平检测结果图；
[0030]图4为本申请实施例提供在不同浓度对羟基苯甲酸丙酯的暴露之下KGN的RHOBTB1和凋亡相关蛋白的蛋白免疫印记检测结果图；
[0031]图5为本申请实施例提供在不同浓度对羟基苯甲酸丙酯的暴露之下Image Lab软件对KGN的RHOBTB1和凋亡相关蛋白的蛋白条带进行定量分析的结果图，其中，对照组定量为1；
[0032]图6为本申请实施例提供在不同浓度对羟基苯甲酸丙酯的暴露之下利用siRNA干扰下调Rhobtb1基因的表达后KGN的RHOBTB1和凋亡相关蛋白的蛋白表达情况结果图；
[0033]图本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种Rhobtb1基因在作为诊断卵巢衰老的标志物的应用，其特征在于，所述应用包括：将低于正常甲基化水平的Rhobtb1基因作为诊断卵巢衰老的标志物的应用；其中，所述Rhobtb1基因的甲基化区域为启动子区域；所述Rhobtb1基因的甲基化水平低于所述正常Rhobtb1基因的甲基化水平的10％及以上。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述Rhobtb1基因的甲基化水平和所述卵巢衰老呈负相关。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述标志物还包括所述Rhobtb1基因所表达的RHOBTB1蛋白。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述RHOBTB1蛋白表达水平和所述卵巢衰老呈正相关。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述卵巢衰老的原因包括自然绝经、卵巢早衰、早发性卵巢功能不全和卵巢储备功能下降中的至少一种。6.根据权利要求1或5所述的应用，其特征在于，所述卵巢衰老的特征包括：卵巢的抗米勒管激素水平＜1.1ng/ml；和/或，卵巢的窦卵泡数＜6个；和/或，卵巢的促卵泡生成激素水平＞10U/L。7.一种Rhobtb1基因在作为诊断卵巢衰老的试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂盒包括检测Rhobtb1基因甲基化水平和/或RHOBTB1蛋白水平的试剂；其中，所述Rhobtb1基因的甲基化区域为启动子区域。8.根据权利要求7所述的应用，所述试剂盒包括用于检测所述Rhobtb1基因甲基化水平的扩增...
【专利技术属性】
技术研发人员：王世宣，张金金，李咪璐，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属同济医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。