外泌体miRNA在制备诊断或预测犬肥胖产品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了外泌体miRNA作为诊断犬肥胖的分子标志物，外泌体miRNA为caf

【技术实现步骤摘要】
外泌体miRNA在制备诊断或预测犬肥胖产品中的应用


[0001]本专利技术涉及治疗犬肥胖
，尤其涉及外泌体miRNA在制备诊断或预测犬肥胖产品中的应用。

技术介绍

[0002]近年来，随着生活水平的提高，选择饲养宠物的家庭越来越多，其中，犬因其生性聪明勇敢，活泼好动而深得宠物主人的喜爱。越来越多的宠物犬走进家庭，随之而来的，是各种各样的宠物疾病，其中，犬的肥胖症因其发病率较高，并发症多种多样而一直是困扰临床兽医们的难题之一。根据调查资料显示，在我国，犬肥胖的发生率高达44％，当犬的肥胖发生时，通常会伴随着代谢紊乱，引起许多并发症，例如高脂血症，高胆固醇症，胰岛素抵抗等；还会引起心血管疾病，皮肤病、肿瘤等；同时，由于犬体重过大，体态浑圆，导致骨关节压力较重，很容易引起骨关节方面的疾病。这些疾病会影响宠物的健康，降低宠物生存质量，严重的可能会危及生命，所以对犬肥胖早期准确的诊断在临床对肥胖犬的干预、治疗上有着重要的作用。
[0003]通常来说，快速、成本低且对身体无创的测量方法更适合临床诊断。所以临床兽医经常选择通过体况评分法(body condition score，BCS)来判定营养状况，结合血浆生化指标来进行联合评估肥胖程度，也可以采用B超测量腰中部、腹部皮下脂肪层厚度，来评估犬肥胖或超重程度。
[0004]BCS是一种用分值来评估动物营养程度的方法，其方法是对动物整体外表的标准化评估。这种方法较为简便，主要依靠视觉和触觉进行判定。但此方法具有主观性，因此对临床医生的要求也比较高，通常只有经验丰富的医生才能得到准确结果。常用的BCS系统分为5分制和9分制，而目前使用最为广泛的是9分制，极度消瘦、非常瘦，分值为BCS1
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2；瘦、正常体重、轻微超重分值为BCS3
‑
6；超重、肥胖分值为7
‑
9。
[0005]近年来，国内外研究报道采用超声成像技术检测腹部脂肪分布的方法。超声因其便捷、无创口、成本低、速度快和零辐射等，逐渐成为测量腹部及内脏脂肪厚度的一种实用、便捷方法，在临床肥胖患者诊断中发挥的作用逐渐增大。在犬的肥胖诊断中。通常选取腰中部、腹部作为检测部位，测量皮下脂肪厚度。
[0006]外泌体是一类由活细胞分泌的粒径在30
‑
150nm的胞外盘状囊泡，可携带母细胞中所包含的信息，经体液运输作用于近端和远端组织而影响病理生理进程，在机体健康和疾病的很多方面(如免疫、发育、组织稳态以及癌症)都扮演着至关重要的角色。miRNA是外泌体中含量较为丰富的一种长度约为22nt的非编码单链RNA分子，miRNA可以调节细胞mRNA表达和翻译的非编码RNA。这些miRNA与mRNA相结合，导致RNA诱导的沉默复合物(RNA induced silencing，RISC)募集到靶mRNA，引起该mRNA翻译和降解受阻。因此，miRNA可以降低靶mRNA的蛋白表达。miRNA除了内源性作用外，还可以由外泌体通过体内循环到达细胞外环境，这些外泌体被被不同类型的细胞结合从而调节和参与受体细胞的各项功能。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的外泌体miRNA在制备诊断或预测犬肥胖产品中的应用。
[0008]本专利技术的目的之一在于：提出外泌体miRNA作为诊断犬肥胖的分子标志物，外泌体miRNA为caf
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miR
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196a、caf
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miR
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328、caf
‑
miR
‑
23b中至少一种。
[0009]优选地，外泌体为血浆外泌体。
[0010]本专利技术的目的之二在于：提出上述分子标志物的引物组合，如下所示：
[0011](1)cfa
‑
miR
‑
196a的引物：
[0012]F：CGCGCGTAGGTAGTTTCATGTT，
[0013]R：AGTGCAGGGTCCGAGGTATT；
[0014](2)cfa
‑
miR
‑
328的引物：
[0015]F：GCTGGCCCTCTCTGCCC，
[0016]R：AGTGCAGGGTCCGAGGTATT；
[0017](3)cfa
‑
miR
‑
23b的引物：
[0018]F：GCGCGATCACATTGCCAG，
[0019]R：AGTGCAGGGTCCGAGGTATT。
[0020]本专利技术的目的之三在于：提出外泌体miRNA在制备诊断或预测犬肥胖产品中的应用，外泌体miRNA为caf
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miR
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196a、caf
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miR
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328或/和caf
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miR
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23b。
[0021]优选地，产品为试剂、试剂盒和/或芯片。
[0022]本专利技术的目的之四在于：提出一种用于犬肥胖的诊断芯片，芯片包括固相载体，以及固定在固相载体上的寡核苷酸探针；寡核苷酸探针包括特异性地对应于caf
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miR
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196a、caf
‑
miR
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328或/和caf
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miR
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23b。
[0023]本专利技术的目的之五在于：提出一种用于犬肥胖的诊断试剂盒，包括用于检测受试者样本中caf
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miR
‑
196a、caf
‑
miR
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328或/和caf
‑
miR
‑
23b表达水平的试剂。
[0024]优选地，含有上述引物组合。
[0025]本专利技术的目的之六在于：提出上述诊断试剂盒的使用方法，包括如下步骤：
[0026]step1、外周血液样本采集和处理，采集用于分离血浆外泌体以及检测基因的样本；
[0027]step2、血液样本中分离血浆外泌体，采用核酸分离与纯化试剂，得到血浆外泌体miRNA；
[0028]step3、采用检测试剂检测血浆外泌体miRNA中caf
‑
miR
‑
196a、caf
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miR
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328或/和caf
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miR
‑
23b的相对表达量。
[0029]优选地，采用逻辑回归模型，综合判定受检样本的结果，评估受检者是否肥胖；逻辑回归模型中，P＝e
x
/(1+e
x
)，其中X＝
‑
8.146+0.735
×
(cfa
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miR
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196a)+0.465
×
(cfa...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.外泌体miRNA作为诊断犬肥胖的分子标志物，其特征在于，外泌体miRNA为caf
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miR
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196a、caf
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miR
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328、caf
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miR
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23b中至少一种。2.根据权利要求1所述外泌体miRNA作为诊断犬肥胖的分子标志物，其特征在于，外泌体为血浆外泌体。3.一种如权利要求1所述分子标志物的引物组合，其特征在于，所述引物组合如下所示：(1)cfa
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miR
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196a的引物：F：CGCGCGTAGGTAGTTTCATGTT，R：AGTGCAGGGTCCGAGGTATT；(2)cfa
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miR
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328的引物：F：GCTGGCCCTCTCTGCCC，R：AGTGCAGGGTCCGAGGTATT；(3)cfa
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miR
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23b的引物：F：GCGCGATCACATTGCCAG，R：AGTGCAGGGTCCGAGGTATT。4.外泌体miRNA在制备诊断或预测犬肥胖产品中的应用，其特征在于，外泌体miRNA为caf
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196a、caf
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miR
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328或/和caf
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miR
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23b。5.根据权利要求4所述应用，其特征在于，产品为试剂、试剂盒和/或芯片。6.一种用于犬肥胖的诊断芯片，其特征在于，芯片包括固相载体，以及固定在固相载体上的寡核苷酸探针；寡核苷酸探针包括特异性地对应于caf
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miR
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196a、caf
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miR
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【专利技术属性】
技术研发人员：李玉，丁红研，孟新月，赵畅，冯士彬，王希春，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：