一种胰腺癌免疫治疗耐药细胞系及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种胰腺癌免疫治疗耐药细胞系及其制备方法和应用，属于生物医药领域。所述胰腺癌免疫治疗耐药细胞系已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2023年1月8日，保藏编号为CCTCCNO:C202310。通过细胞功能学实验，发现该耐药细胞系的体外增殖、迁移能力不变，能显著抵抗T细胞的杀伤毒性；C57BL/6小鼠荷瘤实验发现，该耐药细胞系对PD

【技术实现步骤摘要】
一种胰腺癌免疫治疗耐药细胞系及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域，特别是涉及一种胰腺癌免疫治疗耐药细胞系及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]近年来，胰腺癌的发病率在国内外均呈明显的上升趋势。胰腺癌是恶性程度很高的消化道肿瘤之一，死亡率高，预后较差。胰腺癌患者的5年总生存率不超过5％。
[0003]目前手术切除是胰腺癌患者获得治愈机会和长期生存的唯一有效方式。但由于胰腺癌进展迅速，且早期症状不典型，临床就诊时大部分患者已属中晚期。因此在诊断时可手术切除的肿瘤不超过20％，且大多数患者出现手术后复发的情况。新辅助治疗能够提高胰腺癌的可切除率并延长患者的总生存期。但即使是局部可切除的胰腺癌患者，5年总生存率也仅约为25％。基于吉西他滨的化疗是胰腺癌的标准内科治疗方法，吉西他滨与奥沙利铂、伊立替康、氟尿嘧啶的联合使用可以降低胰腺癌死亡率，但会增加药物引起的毒性副作用。因此，胰腺癌急需新的更有效的治疗方式。
[0004]近年来，以免疫检查点抑制剂PD
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L1/PD
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1抗体为代表的免疫治疗方法在多种癌症治疗中取得了显著的效果，但在胰腺癌的治疗中并没有展现出明显的临床获益。胰腺癌对免疫治疗呈现显著的原发耐药性，极大限制了免疫治疗的应用。研究胰腺癌免疫治疗耐药的分子机制，鉴别关键生物标志物，从而选取更加合适的免疫治疗方案，有利于提高患者生存率；同时筛选新的药物靶点，继而开发免疫治疗与靶向治疗的联合疗法，能够为胰腺癌的治疗提供新的选择。而目前尚无对PD
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1抗体耐药的胰腺癌细胞株。因此，构建PD
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1抗体耐药的胰腺癌细胞株显得尤为重要。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种胰腺癌免疫治疗耐药细胞系及其制备方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术获得的耐药细胞系具有稳定的PD
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1抗体耐药性，为后期研究胰腺癌免疫治疗耐药机制，发现新的胰腺癌治疗靶点以及开发新的胰腺癌治疗手段提供基础。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种胰腺癌免疫治疗耐药细胞系PAN02
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R，所述耐药细胞系PAN02
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R已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2023年1月8日，保藏编号为CCTCCNO:C202310，地址为中国武汉武汉大学，分类命名小鼠胰腺癌细胞PAN02
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R。
[0008]进一步地，所述耐药细胞系PAN02
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R的构建方法包括以下步骤：
[0009](1)利用胰腺癌细胞系PAN02构建C57BL/6小鼠皮下瘤模型，给予免疫检查点PD
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1抗体治疗，筛选治疗后体积最大的肿瘤；
[0010](2)无菌条件下分离筛选得到的体积最大的肿瘤组织，提取肿瘤原代细胞，对肿瘤原代细胞进行体外培养并传代，利用所述肿瘤原代细胞继续构建小鼠皮下瘤模型，给予免
疫检查点PD
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1抗体治疗，筛选治疗后体积最大的肿瘤；
[0011](3)重复步骤(2)直至免疫检查点PD
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1抗体治疗组的肿瘤体积与对照组相比无显著差异，筛选治疗组体积最大的肿瘤；
[0012](4)无菌条件下分离步骤(3)中获得的肿瘤组织，提取肿瘤原代细胞，对肿瘤原代细胞进行体外培养并传代，即获得胰腺癌免疫治疗耐药细胞系PAN02
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R。
[0013]进一步地，在步骤(1)中，所述胰腺癌细胞系为鼠源性胰腺癌细胞系。
[0014]进一步地，在步骤(2)中，所述培养基为含有10％胎牛血清的DMEM培养基。
[0015]进一步地，在步骤(4)中，所述培养的条件为37℃，CO2体积浓度为5％。
[0016]本专利技术还提供一种所述的胰腺癌免疫治疗耐药细胞系PAN02
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R在筛选抗肿瘤药物靶点中的应用。
[0017]本专利技术还提供一种所述的胰腺癌免疫治疗耐药细胞系PAN02
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R在筛选抗肿瘤药物中的应用。
[0018]本专利技术还提供一种所述的胰腺癌免疫治疗耐药细胞系PAN02
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R在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0019]本专利技术还提供一种所述的胰腺癌免疫治疗耐药细胞系PAN02
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R在筛选评估抗肿瘤效果的检测试剂中的应用。
[0020]本专利技术还提供一种所述的胰腺癌免疫治疗耐药细胞系PAN02
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R在制备评估抗肿瘤效果的检测试剂中的应用。
[0021]本专利技术公开了以下技术效果：
[0022]本专利技术使用鼠源性胰腺癌细胞系PAN02及C57BL/6小鼠构建皮下瘤模型，给予PD
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1抗体治疗，从PD
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1抗体治疗耐药的小鼠肿瘤中分离肿瘤原代细胞进行培养和传代，最终获得胰腺癌PD
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1抗体耐药细胞系PAN02
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R。通过细胞功能学实验，发现胰腺癌PD
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1抗体耐药细胞系PAN02
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R的体外增殖、迁移能力不变；经靶细胞杀伤实验测定发现，耐药细胞株PAN02
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R在体外具有显著抵抗T淋巴细胞杀伤毒性的能力；C57BL/6小鼠荷瘤实验发现，耐药细胞株PAN02
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R对PD
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1抗体治疗的耐受性显著增加。获得的胰腺癌PD
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1抗体耐药细胞株PAN02
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R为深入研究胰腺癌PD
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1抗体治疗耐药的分子机制、发现新的胰腺癌治疗靶点以及开发新的胰腺癌治疗手段提供基础，具有较高的科研和临床应用价值。
附图说明
[0023]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0024]图1为胰腺癌PD
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1抗体耐药细胞系构建过程中获得的相关实验图，其中图A为利用PAN02细胞和C57BL/6小鼠构建皮下瘤模型筛选胰腺癌PD
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1抗体耐药细胞系的实验设计流程图；图B为对照组小鼠用同型对照IgG治疗后的肿瘤生长曲线，横坐标为时间(单位：天)，纵坐标为肿瘤体积(单位：mm3)；图C为实验组小鼠用PD
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1抗体治疗后的肿瘤生长曲线，横坐标为时间(单位：天)，纵坐标为肿瘤体积(单位：mm3)，其中9只小鼠肿瘤完全缓解，1只小鼠肿瘤部分缓解，选取肿瘤部分缓解的小鼠即虚线所示2号小鼠进行下一步操作；
[0025]图2为胰腺癌PD
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1抗体耐药细胞PAN02
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R的细胞形态及体外增殖、迁移、抵抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胰腺癌免疫治疗耐药细胞系PAN02
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R，其特征在于，所述耐药细胞系PAN02
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R已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2023年1月8日，保藏编号为CCTCC NO:C202310。2.根据权利要求1所述的耐药细胞系PAN02
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R，其特征在于，构建方法包括以下步骤：(1)利用胰腺癌细胞系PAN02构建C57BL/6小鼠皮下瘤模型，给予免疫检查点PD
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1抗体治疗，筛选治疗后体积最大的肿瘤；(2)无菌条件下分离筛选得到的体积最大的肿瘤组织，提取肿瘤原代细胞，对肿瘤原代细胞进行体外培养并传代，利用所述肿瘤原代细胞继续构建小鼠皮下瘤模型，给予免疫检查点PD
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1抗体治疗，筛选治疗后体积最大的肿瘤；(3)重复步骤(2)直至免疫检查点PD
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1抗体治疗组的肿瘤体积与对照组相比无显著差异，筛选治疗组体积最大的肿瘤；(4)无菌条件下分离步骤(3)中获得的肿瘤组织，提取肿瘤原代细胞，对肿瘤原代细胞进行体外培养并稳定传代，即获得胰腺癌免疫治疗耐药细胞系PAN02
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R。3.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：王飞，陈大卫，尚士洁，王瑞阳，张晶鑫，
申请(专利权)人：山东第一医科大学附属肿瘤医院山东省肿瘤防治研究院，山东省肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：