肝癌悬浮类器官的培养基和培养方法技术

本发明专利技术涉及一种用于肝癌悬浮类器官培养的培养基，包括MST1/2激酶抑制剂、Y27632、选自N2和B27的至少一种细胞培养添加剂、SB202190、胰岛素、成纤维细胞生长因子10、霍乱毒素、ITS细胞培养添加剂、肝细胞生长因子、GlutaMAX、和非必需氨基酸。本发明专利技术还涉及肝癌悬浮类器官的培养方法及其用途。通过使用本发明专利技术的肝癌悬浮类器官培养基，能够实现肝癌细胞的有效快速扩增，这样扩增得到的肝癌细胞保持了患者的病理特性，提高了肝癌细胞的培养成功率和扩增速率，可以为患者的个性化治疗提供研究基础。可以为患者的个性化治疗提供研究基础。

【技术实现步骤摘要】
肝癌悬浮类器官的培养基和培养方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于肝癌悬浮类器官的培养基、使用该培养基培养肝癌悬浮类器官的方法、及其在药物的疗效评估和筛选中的应用。

技术介绍

[0002]肝癌是死亡率仅次于胃癌、食道癌的第三大常见恶性肿瘤。2020年，全世界被新确诊为肝癌的人超过90万，因肝癌死亡的人超过83万，死亡人数接近新发病人数。
[0003]近几年来，肝癌术后辅助化疗作为一种新型辅助治疗方式已逐渐得到临床医生的重视与认可，包括术后TACE治疗，口服药物治疗等，但由于缺乏规范化疗方案，常规凭经验化疗，忽略个体差异，带有一定的盲目性，因此效果一直不佳，单药及联合用药的有效率低于20％(Jindal A,Thadi A,Shailubhai K.Hepatocellular Carcinoma:Etiology and Current and Future Drugs[J].J Clin Exp Hepatol,2019,9(2):221
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232)。新兴的靶向药物虽然在一定程度上降低了毒副作用，但是数量太少，治疗费用昂贵，且有效率随个体差异，难以满足大多数患者的治疗需求。由于缺乏有效的肝癌药敏试验体系，无法做到精准化疗，因此将肝癌体外药敏结果与临床体内反应相对应就成为治疗关键。
[0004]传统临床药物敏感性检测大多采用二维细胞培养。然而，二维培养的细胞仅在有限程度上模拟组织生理条件，缺乏体内真实的组织结构，易导致低分化水平和细胞生理功能的丢失，进而导致获得的实验结果很难预测临床实际结果。类器官主要来源于人体具有分化能力的胚胎干细胞、诱导多潜能干细胞和成体干细胞。不同组织器官都存在内源组织干细胞，在维持各器官的功能形态方面发挥着重要作用。这些干细胞在体外一定的诱导条件下，可以自组织形成一个直径仅为几毫米的迷你结构。肿瘤类器官是用取自患者体内原发性肿瘤，在实验室中培养出一些微型的3D肿瘤细胞模型。肿瘤类器官高度模拟了来源肿瘤组织的特征，保留了个体之间的肿瘤异质性，可用于功能性的测试，如进行高通量药物筛选和个体化精准治疗。
[0005]当前，肝癌类器官培养方法多采用R
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spondin
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1、Noggin以及一些昂贵的蛋白因子，导致类器官培养成本较高；且这项技术需要用基质胶预先进行包被处理，培养和传代操作复杂和技术难度大；由于基质胶的包被，导致其大规模培养成本较高，标准化难度大，大规模商业化应用受到限制。因此，需要开发一种低成本、简单且成功率高的类器官培养方法和培养基。

技术实现思路

[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种用于在体外快速扩增肝癌悬浮类器官的培养基及培养方法。
[0007]本专利技术的一个方面在于提供一种肝癌悬浮类器官的培养基，所述培养基包含MST1/2激酶抑制剂、Y27632、选自N2和B27的至少一种细胞培养添加剂、SB202190、胰岛素、成纤维细胞生长因子10、霍乱毒素、ITS细胞培养添加剂、肝细胞生长因子、GlutaMAX、和非
必需氨基酸。其中，所述MST1/2激酶抑制剂包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐、或溶剂化物，
[0008][0009]其中，
[0010]R1选自C1
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C6烷基、C3
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C6环烷基、C4
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C8环烷基烷基、C2
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C6螺环烷基、以及任选地被1
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2个独立地R6取代的芳基(例如苯基和萘基等)、芳基C1
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C6烷基(例如苯甲基等)和杂芳基(例如噻吩基等)；
[0011]R2和R3各自独立地选自C1
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C6烷基，优选C1
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C3烷基，更优选甲基；
[0012]R4和R5各自独立地选自氢、C1
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C6烷基、C3
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C6环烷基、C4
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C8环烷基烷基、C1
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C6烷基羟基、C1
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C6卤代烷基、C1
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C6烷基氨基C1
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C6烷基、C1
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C6烷氧基C1
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C6烷基、和C3
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C6杂环基C1
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C6烷基(所述杂环基选自例如哌啶基、四氢吡喃基等)；
[0013]R6选自卤素(优选氟和氯，更优选氟)、C1
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C6烷基(优选甲基)、C1
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C6烷氧基(优选甲氧基)、和C1
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C6卤代烷基(优选三氟甲基)。
[0014]优选的实施方式中，MST1/2激酶抑制剂包括式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐、或溶剂化物，
[0015][0016]其中，
[0017]R1选自C1
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C6烷基、任选地被1
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2个独立地R6取代的苯基、任选地被1
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2个独立地R6取代的噻吩基、和任选地被1
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2个独立地R6取代的苯甲基，R1更优选为任选地被1
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2个独立地R6取代的苯基；
[0018]R5选自氢、C1
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C6烷基、和C3
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C6环烷基，R5更优选为氢；
[0019]R6各自独立地选自卤素、C1
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C6烷基、和C1
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C6卤代烷基，R6更优选为氟、甲基或三氟甲基。
[0020]优选地，所述MST1/2抑制剂是选自以下化合物或其药学可接受的盐、或溶剂化物中的至少一种。
[0021][0022][0023][0024][0025][0026]最优选地，本专利技术的MST1/2激酶抑制剂为化合物1。
[0027]在本专利技术的实施方式中，本专利技术的培养基中各成分的含量满足以下任意一项或多项或全部满足：
[0028](1)MST1/2激酶抑制剂的浓度优选为2.5～40μM，更优选为2.5～20μM；
[0029](2)B27或N2细胞培养添加剂相对于培养基的体积比为1:25～1:200，更优选为1:25～1:100；
[0030](3)肝细胞生长因子的浓度优选为1.25～20ng/mL，更优选为1.25～10ng/mL；
[0031](4)ITS细胞培养添加剂相对于培养基的体积比优选为1:12.5～1:200，更优选为1:50～1:200；
[0032](5)SB202190的浓度优选为5～40nM，更优选为5～20nM；
[0033](6)成纤维细胞生长因子10的浓度优选为2.5～20ng/mL，更优选为2.5～10ng/mL；
[0034](7)霍乱毒素的浓度优选为1.25～20ng/mL，更优选为2.5～10ng/mL；
[0035](8)胰岛素的浓度优选为2.5～40μg/mL，更优选为2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于肝癌悬浮类器官的培养基，其特征在于包括MST1/2激酶抑制剂、Y27632、选自N2和B27的至少一种细胞培养添加剂、SB202190、胰岛素、成纤维细胞生长因子10、霍乱毒素、ITS细胞培养添加剂、肝细胞生长因子、GlutaMAX、和非必需氨基酸，其中，所述MST1/2激酶抑制剂包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐、或溶剂化物，其中，R1选自C1
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C6烷基、C3
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C6环烷基、C4
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C8环烷基烷基、C2
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C6螺环烷基、以及任选地被1
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2个独立地R6取代的芳基、芳基C1
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C6烷基和杂芳基；R2和R3各自独立地选自C1
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C6烷基；R4和R5各自独立地选自氢、C1
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C6烷基、C3
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C6环烷基、C4
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C8环烷基烷基、C1
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C6烷基羟基、C1
‑
C6卤代烷基、C1
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C6烷基氨基C1
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C6烷基、C1
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C6烷氧基C1
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C6烷基、和C3
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C6杂环基C1
‑
C6烷基；R6选自卤素、C1
‑
C6烷基、C1
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C6烷氧基、和C1
‑
C6卤代烷基。2.如权利要求1所述的培养基，其中R1选自C1
‑
C6烷基、C3
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C6环烷基、C4
‑
C8环烷基烷基、C2
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C6螺环烷基、以及任选地被1
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2个独立地R6取代的苯基、萘基、苯甲基和噻吩基；R2和R3各自独立地选自C1
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C3烷基；R4和R5各自独立地选自氢、C1
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C6烷基、C3
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C6环烷基、C4
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C8环烷基烷基、C1
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C6烷基羟基、C1
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C6卤代烷基、C1
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C6烷基氨基C1
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C6烷基、C1
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C6烷氧基C1
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C6烷基、哌啶基C1
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C6烷基、和四氢吡喃基C1
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C6烷基；R6选自卤素、C1
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C6烷基、C1
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C6烷氧基、和C1
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C6卤代烷基。3.如权利要求1所述的培养基，其中所述MST1/2激酶抑制剂包括式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐、或溶剂化物，
其中，R1选自C1
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C6烷基、任选地被1
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2个独立地R6取代的苯基、任选地被1
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2个独立地R6取代的噻吩基、和任选地被1
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2个独立地R6取代的苯甲基；R5选自氢、C1
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘青松，汪文亮，黄涛，陈程，
申请(专利权)人：合肥中科普瑞昇生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：