一种肠癌原代细胞的培养基及体外培养方法和用途技术

本发明专利技术提供一种肠癌原代细胞的培养基及体外培养方法及其应用。该培养基包含MST1/2激酶抑制剂；胰岛素，选自Y27632、法舒地尔、和H

【技术实现步骤摘要】
一种肠癌原代细胞的培养基及体外培养方法和用途


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及培养基及其应用，更具体涉及一种肠癌原代细胞的培养基及培养方法和用途。

技术介绍

[0002]肠癌是由遗传和环境因素作用引起的疾病，是世界范围内最常见的消化道肿瘤之一。调查数据表明(郑树等，结直肠癌的预防，中华肿瘤杂志，2004，Vol.13，No.1，pp1～2)，肠癌为最常见的肿瘤之一，且发病率和死亡率整体呈上升趋势，是当前严重威胁生命健康的恶性肿瘤。手术结合术后化疗是肠癌目前的主要治疗方式，虽然近些年来外科技术的不断进步，肠癌患者的生存率得到了提高，但是肿瘤的转移和复发仍给病人带来不良预后。在结直肠癌的精准治疗方面，靶向药物的出现为晚期结直肠癌患者带来了希望，未来的发展方向是如何合理的选择靶向药物和制定个体化治疗方案。而药敏试验技术的不断革新为靶向药物、化疗药物以及靶向药物联合的疗效预测提供了有力的技术支持，为实现肠癌患者的个体化治疗奠定坚实的基础。
[0003]现有的体外培养的肠癌细胞系主要通过将正常细胞长期培养而自发永生化或者转染促使正常细胞永生化的癌基因获得。传统方法建立的细胞系依然是细胞、分子和癌生物学研究的主要支柱。但是，这些方法改变了细胞的遗传背景，长期培养的细胞系也容易造成基因组不稳定，可能导致肿瘤细胞系的表型和体内肿瘤细胞发生人为的改变。这些细胞系中通常缺乏原发肿瘤的复杂异质性，从而限制了这些细胞系对于预测肿瘤细胞反应的应用，影响肠癌的科学研究和药物研发的准确性。另外，从肠癌组织获得的细胞培养成癌细胞的过程中，常规培养方法较难得到癌细胞，培养过程中存在被成纤维细胞干扰，形成的克隆无法传代等问题，限制了人肠癌原代细胞的应用。
[0004]2017年，Xuefeng Liu等人使用辐照的小鼠成纤维细胞和Rho相关激酶抑制剂(Y
‑
27632)来扩增上皮来源的细胞，该体系具有无需基因操作就能实现上皮来源细胞无限增长的能力(Xuefeng Liu等，Conditional reprogramming and long
‑
term expansion of normal and tumor cells from human biospecimens.Nat.Protoc.2017,12,439)。但是，Xuefeng Liu等人建立的方法的培养周期较长，不能实现细胞的快速扩增，原代细胞与基质细胞的共培养不可避免，无法解决与基质细胞共培养等培养方案所存在的一系列问题，限制了该技术的应用。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种肠癌原代细胞的培养基及体外培养方法和应用。
[0006]本专利技术的一个方面在于提供一种肠癌原代细胞的培养基，所述培养基包含MST1/2激酶抑制剂；胰岛素；选自Y27632、法舒地尔、和H
‑
1152中的至少一种的Rho蛋白激酶抑制剂；胰岛素
‑
转铁蛋白
‑
硒补充剂；谷氨酰胺添加剂；神经调节蛋白1；牛脑垂体提取物；碱性
成纤维生长因子；R
‑
spondin1；前列腺素E2；和B27。
[0007]其中，所述MST1/2激酶抑制剂包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐、或溶剂化物，
[0008][0009]其中，
[0010]R1选自C1
‑
C6烷基、C3
‑
C6环烷基、C4
‑
C8环烷基烷基、C2
‑
C6螺环烷基、以及任选地被1
‑
2个独立地R6取代的芳基(例如苯基和萘基等)、芳基C1
‑
C6烷基(例如苯甲基等)和杂芳基(例如噻吩基等)；
[0011]R2和R3各自独立地选自C1
‑
C6烷基，优选C1
‑
C3烷基，更优选甲基；
[0012]R4和R5各自独立地选自氢、C1
‑
C6烷基、C3
‑
C6环烷基、C4
‑
C8环烷基烷基、C1
‑
C6烷基羟基、C1
‑
C6卤代烷基、C1
‑
C6烷基氨基C1
‑
C6烷基、C1
‑
C6烷氧基C1
‑
C6烷基、和C3
‑
C6杂环基C1
‑
C6烷基(所述杂环基选自例如哌啶基、四氢吡喃基等)；
[0013]R6选自卤素(优选氟和氯，更优选氟)、C1
‑
C6烷基(优选甲基)、C1
‑
C6烷氧基(优选甲氧基)、和C1
‑
C6卤代烷基(优选三氟甲基)。
[0014]优选的实施方式中，MST1/2激酶抑制剂包括式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐、或溶剂化物，
[0015][0016]其中，
[0017]R1选自C1
‑
C6烷基、任选地被1
‑
2个独立地R6取代的苯基、任选地被1
‑
2个独立地R6取代的噻吩基、和任选地被1
‑
2个独立地R6取代的苯甲基，R1更优选为任选地被1
‑
2个独立地R6取代的苯基；
[0018]R5选自氢、C1
‑
C6烷基、和C3
‑
C6环烷基，R5更优选为氢；
[0019]R6各自独立地选自卤素、C1
‑
C6烷基、和C1
‑
C6卤代烷基，R6更优选为氟、甲基或三氟
甲基。
[0020]优选地，所述MST1/2抑制剂是选自以下化合物或其药学可接受的盐、或溶剂化物中的至少一种。
[0021][0022][0023][0024][0025][0026]最优选地，本专利技术的MST1/2激酶抑制剂为化合物1。
[0027]在本专利技术的实施方式中，本专利技术的培养基中各成分的含量满足以下任意一项或多
项或全部满足：
[0028](1)MST1/2激酶抑制剂在培养基中的含量为1.25～5μM；
[0029](2)胰岛素在培养基中的含量为1～9μg/mL；
[0030](3)Rho蛋白激酶抑制剂优选为Y27632，其在培养基中的含量为1.25～20μM；
[0031](4)胰岛素
‑
转铁蛋白
‑
硒补充剂相对于培养基的体积比为1:400～1:100；
[0032](5)谷氨酰胺添加剂在培养基中的含量为0.5～2mM；
[0033](6)神经调节蛋白
‑
1在培养基中的含量为2.5～40ng/ml；
[0034](7)牛脑垂体提取物相对于培养基的体积比为1:2000～1:125；
[0035](8)碱性成纤维生长因子在培养基中的含量为2.5～20n本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肠癌原代细胞的培养基，其特征在于，包含：培养基包含MST1/2激酶抑制剂；胰岛素；选自Y27632、法舒地尔、和H
‑
1152中的至少一种的Rho蛋白激酶抑制剂；胰岛素
‑
转铁蛋白
‑
硒补充剂；谷氨酰胺添加剂；神经调节蛋白1；牛脑垂体提取物；碱性成纤维生长因子；R
‑
spondin1；前列腺素E2；和B27，其中，所述MST1/2激酶抑制剂包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐、或溶剂化物，其中，R1选自C1
‑
C6烷基、C3
‑
C6环烷基、C4
‑
C8环烷基烷基、C2
‑
C6螺环烷基、以及任选地被1
‑
2个独立地R6取代的芳基、芳基C1
‑
C6烷基和杂芳基；R2和R3各自独立地选自C1
‑
C6烷基；R4和R5各自独立地选自氢、C1
‑
C6烷基、C3
‑
C6环烷基、C4
‑
C8环烷基烷基、C1
‑
C6烷基羟基、C1
‑
C6卤代烷基、C1
‑
C6烷基氨基C1
‑
C6烷基、C1
‑
C6烷氧基C1
‑
C6烷基、和C3
‑
C6杂环基C1
‑
C6烷基；R6选自卤素、C1
‑
C6烷基、C1
‑
C6烷氧基、和C1
‑
C6卤代烷基。2.如权利要求1所述的培养基，其中R1选自C1
‑
C6烷基、C3
‑
C6环烷基、C4
‑
C8环烷基烷基、C2
‑
C6螺环烷基、以及任选地被1
‑
2个独立地R6取代的苯基、萘基、苯甲基和噻吩基；R2和R3各自独立地选自C1
‑
C3烷基；R4和R5各自独立地选自氢、C1
‑
C6烷基、C3
‑
C6环烷基、C4
‑
C8环烷基烷基、C1
‑
C6烷基羟基、C1
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C6卤代烷基、C1
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C6烷基氨基C1
‑
C6烷基、C1
‑
C6烷氧基C1
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C6烷基、哌啶基C1
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C6烷基、和四氢吡喃基C1
‑
C6烷基；R6选自卤素、C1
‑
C6烷基、C1
‑
C6烷氧基、和C...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘青松，赫玉影，黄涛，陈程，
申请(专利权)人：合肥中科普瑞昇生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：