一种生物组合物、其制备方法及应用技术

本申请涉及一种生物组合物、其制备方法及应用。所述生物组合物包括至少一种作为阳性标准品的阳性细胞系，至少一种作为阴性标准品的阴性细胞系，至少一种作为阳性参考品的阳性基因组载体，以及至少一种作为阴性参考品的阴性基因组载体。该生物组合物可以作为一种可以实现不同梯度阳性信号的标准品，可以对甲基化检测方法的准确性进行评估。测方法的准确性进行评估。

【技术实现步骤摘要】
一种生物组合物、其制备方法及应用


[0001]本申请涉及生物医学领域，具体的涉及一种生物组合物及其制备方法，还包括该生物组合物用于甲基化检测的标准品的应用。

技术介绍

[0002]循环DNA(cfDNA，cell free DNA)是一种存在于血液中的单链或双链形式的DNA分子，其片段长度大约144
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166bp。DNA甲基化作为一种常见的表观遗传学修饰方式，在基因表达调控中发挥着重要作用，并与肿瘤的发生发展有着密切的联系，DNA甲基化具有位点广泛，灵敏度高，可进行组织溯源等优势，结合液体活检技术创伤小，取样方便等特点，血液ctDNA甲基化检测已成为当下最具潜力的早筛技术路径。
[0003]DNA甲基化(methylation)是一种表观遗传修饰，它是由DNA甲基转移酶(DNAmethyl
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transferase，DNMT)催化S
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腺苷甲硫氨酸(S
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adenosylmethionine，SAM)作为甲基供体，将DNA的CG两个核苷酸的胞嘧啶被选择性地添加甲基，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种生物组合物，其特征在于，包括：至少一种作为阳性标准品的阳性细胞系，至少一种作为阴性标准品的阴性细胞系，至少一种作为阳性参考品的阳性基因组载体，以及至少一种作为阴性参考品的阴性基因组载体。2.如权利要求1所述的生物组合物，其特征在于，所述阳性基因组载体的碱基数小于阳性细胞系的碱基数；所述阴性基因组载体的碱基数小于阴性细胞系的碱基数。3.如权利要求2所述的生物组合物，其特征在于，所述阳性基因组载体的碱基数小于阳性细胞系的碱基数的1/100，优选地，所述阳性基因组载体的碱基数小于阳性细胞系的碱基数的1/1000，更优选地，所述阳性基因组载体的碱基数小于阳性细胞系的碱基数的1/10000；所述阴性基因组载体的碱基数小于阴性细胞系的碱基数的1/100，优选地，所述阴性基因组载体的碱基数小于阴性细胞系的碱基数的1/1000，更优选地，所述阴性基因组载体的碱基数小于阴性细胞系的碱基数的1/10000。4.如权利要求3所述的生物组合物，其特征在于，所述阴性细胞系与所述阴性基因组载体的质量比为1:2
×
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‑3至1:1
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‑6，优选为1:2
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‑4至1：1
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‑5；所述阳性细胞系与所述阳性基因组载体的质量比为1:2
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‑3至1:1
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‑6，优选为1:2
×
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‑4至1：1
×
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‑5。5.如权利要求1所述的生物组合物，其特征在于，所述阳性细胞系与阴性细胞系的质量比为0.1:99.9至25:75之间，优选为0.5:99.5至12.5:87.5之间，更优选为1:99至5:95之间。6.如权利要求1所述的生物组合物，其特征在于，所述阳性基因组载体与阴性基因组载体的质量比为1:99至25:75之间或者99:1至75:25，优选为大约1:19或者19:1。7.如权利要求1所述的生物组合物，其特征在于，所述阳性细胞系和所述阴性细胞系都经过片段化处理，平均片段大小为约140
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160bp，优选地，所述片段化处理包含生物酶酶切片段化和/或物理打断片段化。8.如权利要求1所述的生物组合物，其特征在于，所述阳性细胞系选自如下细胞系的组合：人结直肠癌细胞系(例如：SW48)，人肺腺癌细胞系(例如：H1975)，人肝癌细胞系(例如：HepG2或)，人食管癌细胞系(例如：T.T)，人卵巢癌细胞系(例如：CaoV3)，人胰腺癌细胞系(例如：PANC
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1，PSN
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1)。9.如权利要求1所述的生物组合物，其特征在于，所述阴性细胞系选自如下细胞系的组合：人B淋巴细胞(例如：GM24385、GM12878、GM24631、NCI.BL1184)或者人正常细胞系(例如：Beads
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2B及其他人正常细胞系)。10.如权利要求1所述的生物组合物，其特征在于，所述阳性基因组载体为经过甲基化转移酶处理的pUC19 DNA和/或经过甲基化转移酶处理的Lambda DNA，所述甲基化转移酶优选为M.Sssl。11.如权利要求1所述的生物组合物，其特征在于，所述阴性基因组载体为未甲基化的Lambda DNA和/或未甲基化的pUC19 DNA。12.一种如权利要求8
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11中任意一项所述的生物组合物的应用，其特征在于，所述生物组合物用于评估癌症基因检测的准确性和组织溯源的标准品。13.如权利要求12所述的应用，其特征在于，所述癌症包括：脑癌、肺癌、皮肤癌、鼻咽癌、咽喉癌、肝癌、骨癌、淋巴瘤、胰腺癌、皮肤癌、肠癌、直肠癌、甲状腺癌、膀胱癌、肾癌、口腔癌、胃癌、实体瘤、卵巢癌、食管癌、胆囊癌、胆道癌、乳腺癌、宫颈癌、子宫癌、前列腺癌、头颈癌、肉瘤、胸腔恶性肿瘤(除肺外)、黑色素瘤、和睾丸癌、白血病。
14.一种制备生物组合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)获得至少一种作为阳性标准品的阳性细胞系和至少一种作为阴性标准品的阴性细胞系；(2)将所述阳性细胞系和阴性细胞系进行细胞核分离，随后通过酶切将所述阳性细胞系和阴性细胞系转化为阳性片段化DNA和阴性片段化DNA；(3)将所述阳性片段化DNA和所述阴性片段化DNA混合；(4)获得至少一种作为阳性参考品的阳性基因组载体和至少一种作为阴性参考品的阴...

【专利技术属性】
技术研发人员：李冰思，宿静，李晓玲，张立辰，汉雨生，
申请(专利权)人：广州燃石医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：