卵巢癌类器官的培养基、培养方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种卵巢癌类器官的培养基及培养方法。该培养基包含MST1/2激酶抑制剂；B27添加剂；N2添加剂；胰岛素

【技术实现步骤摘要】
卵巢癌类器官的培养基、培养方法及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于卵巢癌类器官培养的培养基、使用该培养基培养卵巢癌类器官的方法、及其在药物的疗效评估和筛选中的应用。

技术介绍

[0002]卵巢癌是指发生在卵巢的恶性肿瘤性疾病，是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌。卵巢癌以上皮癌最多见，其次是恶性生殖细胞肿瘤，其中卵巢上皮癌死亡率占各类妇科肿瘤的首位，对女性生命可造成严重威胁。卵巢癌早期多无症状，晚期可出现下腹不适、腹胀、食欲下降等消化道症状，主要的治疗方式包括手术切除、药物治疗和放射治疗，总体预后较差。
[0003]传统临床药物敏感性检测大多采用二维细胞培养。然而，二维培养的细胞仅在有限程度上模拟组织生理条件，缺乏体内真实的组织结构，易导致低分化水平和细胞生理功能的丢失，进而导致获得的实验结果很难预测临床实际结果。类器官，属于三维(3D)细胞培养物，主要来源于人体具有分化能力的胚胎干细胞、诱导多潜能干细胞和成体干细胞。不同组织器官都存在内源组织干细胞，在维持各器官的功能形态发挥着重要作用。这些干细胞在体外一定的诱导条件下，可以自组织形成一个直径仅为几毫米的迷你结构。肿瘤类器官是用取自患者体内原发性肿瘤，在实验室中培养出一些微型的3D肿瘤细胞模型。肿瘤类器官高度模拟了来源肿瘤组织的特征，保留了个体之间的肿瘤异质性，可用于功能性的测试，如进行高通量药物筛选和个体化精准治疗。
[0004]当前，卵巢癌类器官培养方法多采用R
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spondin
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1、Noggin以及一些昂贵的蛋白因子，导致类器官培养成本较高；且这项技术操作复杂和技术难度大，导致其大规模商业化应用受到限制。因此，需要开发一种低成本、简单且成功率高的类器官培养方法和培养基。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种用于在体外快速扩增卵巢癌类器官的培养基及培养方法。
[0006]本专利技术的一个方面在于提供一种卵巢癌类器官的培养基，所述培养基包含MST1/2激酶抑制剂；B27添加剂；N2添加剂；胰岛素
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转铁蛋白
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硒补充剂；胰岛素；表皮细胞因子；胎牛血清；碱性成纤维生长因子；成纤维细胞生长因子7；以及选自Y27632、法舒地尔、和H
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1152中的至少一种的Rho蛋白酶抑制剂。其中，所述MST1/2激酶抑制剂包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐、或溶剂化物，
[0007][0008]其中，
[0009]R1选自C1
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C6烷基、C3
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C6环烷基、C4
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C8环烷基烷基、C2
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C6螺环烷基、以及任选地被1
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2个独立地R6取代的芳基(例如苯基和萘基等)、芳基C1
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C6烷基(例如苯甲基等)和杂芳基(例如噻吩基等)；
[0010]R2和R3各自独立地选自C1
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C6烷基，优选C1
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C3烷基，更优选甲基；
[0011]R4和R5各自独立地选自氢、C1
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C6烷基、C3
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C6环烷基、C4
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C8环烷基烷基、C1
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C6烷基羟基、C1
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C6卤代烷基、C1
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C6烷基氨基C1
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C6烷基、C1
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C6烷氧基C1
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C6烷基、和C3
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C6杂环基C1
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C6烷基(所述杂环基选自例如哌啶基、四氢吡喃基等)；
[0012]R6选自卤素(优选氟和氯，更优选氟)、C1
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C6烷基(优选甲基)、C1
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C6烷氧基(优选甲氧基)、和C1
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C6卤代烷基(优选三氟甲基)。
[0013]优选的实施方式中，MST1/2激酶抑制剂包括式(Ia)的化合物或其药学可接受的盐、或溶剂化物，
[0014][0015]其中，
[0016]R1选自C1
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C6烷基、任选地被1
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2个独立地R6取代的苯基、任选地被1
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2个独立地R6取代的噻吩基、和任选地被1
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2个独立地R6取代的苯甲基，R1更优选为任选地被1
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2个独立地R6取代的苯基；
[0017]R5选自氢、C1
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C6烷基、和C3
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C6环烷基，R5更优选为氢；
[0018]R6各自独立地选自卤素、C1
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C6烷基、和C1
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C6卤代烷基，R6更优选为氟、甲基或三氟甲基。
[0019]优选地，所述MST1/2抑制剂是选自以下化合物或其药学可接受的盐、或溶剂化物中的至少一种。
[0020][0021][0022][0023][0024][0025]最优选地，本专利技术的MST1/2激酶抑制剂为化合物1。
[0026]另外优选地，本专利技术的Rho蛋白激酶抑制剂为Y27632。
[0027]在本专利技术的实施方式中，本专利技术的培养基中各成分的含量满足以下任意一项或多项或全部满足：
[0028](1)所述MST1/2激酶抑制剂的浓度范围通常为2.5～40μM，更优选为5～20μM；
[0029](2)所述B27添加剂相对于培养基的体积比范围通常为1：25～1：400，更优选为1：50～1：100；
[0030](3)所述N2添加剂相对于培养基的体积比范围通常为1：100～1：800，更优选为1：200～1：800；
[0031](4)所述表皮细胞因子的浓度范围通常为2.5～10ng/mL；
[0032](5)所述胰岛素的浓度范围通常为0.25～4μg/mL，更优选为0.5～1μg/mL；
[0033](6)所述胰岛素
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转铁蛋白
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硒补充剂相对于培养基的体积比范围通常为1:50～1:400，更优选为1:50～1:200；
[0034](7)所述Rho蛋白激酶抑制剂的浓度范围通常为2.5～40μM，更优选为5～10μM；
[0035](8)所述胎牛血清相对于培养基的体积比范围通常为1.25％(v/v)～20％(v/v)，更优选为5％(v/v)～20％(v/v)；
[0036](9)所述碱性成纤维生长因子的浓度范围通常为2.5～20ng/mL，更优选为2.5～10ng/mL；
[0037](10)所述成纤维细胞生长因子7的浓度范围通常为2.5～20ng/mL，更优选为5～20ng/mL。
[0038]在本专利技术的实施方式中，所述培养基还含有选自DMEM/F12、DMEM、F12或RPMI
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于卵巢癌类器官的培养基，其特征在于包括MST1/2激酶抑制剂；B27添加剂；N2添加剂；胰岛素
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转铁蛋白
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硒补充剂；胰岛素；表皮细胞因子；胎牛血清；碱性成纤维生长因子；成纤维细胞生长因子7；以及选自Y27632、法舒地尔、和H
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1152中的至少一种的Rho蛋白酶抑制剂，其中，所述MST1/2激酶抑制剂包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐、或溶剂化物，其中，R1选自C1
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C6烷基、C3
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C6环烷基、C4
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C8环烷基烷基、C2
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C6螺环烷基、以及任选地被1
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2个独立地R6取代的芳基、芳基C1
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C6烷基和杂芳基；R2和R3各自独立地选自C1
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C6烷基；R4和R5各自独立地选自氢、C1
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C6烷基、C3
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C6环烷基、C4
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C8环烷基烷基、C1
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C6烷基羟基、C1
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C6卤代烷基、C1
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C6烷基氨基C1
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C6烷基、C1
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C6烷氧基C1
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C6烷基、和C3
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C6杂环基C1
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C6烷基；R6选自卤素、C1
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C6烷基、C1
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C6烷氧基、和C1
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C6卤代烷基。2.如权利要求1所述的培养基，其中R1选自C1
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C6烷基、C3
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C6环烷基、C4
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C8环烷基烷基、C2
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C6螺环烷基、以及任选地被1
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2个独立地R6取代的苯基、萘基、苯甲基和噻吩基；R2和R3各自独立地选自C1
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C3烷基；R4和R5各自独立地选自氢、C1
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C6烷基、C3
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C6环烷基、C4
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C8环烷基烷基、C1
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C6烷基羟基、C1
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C6卤代烷基、C1
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C6烷基氨基C1
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C6烷基、C1
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C6烷氧基C1
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C6烷基、哌啶基C1
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C6烷基、和四氢吡喃基C1
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C6烷基；R6选自卤素、C1
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C6烷基、C1
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C6烷氧基、和C1...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘青松，赫玉影，黄涛，陈程，
申请(专利权)人：合肥中科普瑞昇生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：