一种用于发夹小RNA类药物定量的改进型茎环引物及其定量方法技术

本发明专利技术公开了一种用于发夹小RNA类药物定量的改进型茎环引物，该茎环引物可特异性地与发夹小RNA的中间环位置处互补配对，避免了RNA发夹结构对茎环引物与发夹小RNA配对的抑制，提高了反转录效率。本发明专利技术还提供了采用上述改进型茎环引物进行发夹小RNA类药物定量的方法，该方法具有分析步骤少、成本低、效率高、准确率高的特点。确率高的特点。确率高的特点。

【技术实现步骤摘要】
一种用于发夹小RNA类药物定量的改进型茎环引物及其定量方法


[0001]本专利技术属于寡核苷酸检测
，具体涉及一种用于发夹小RNA类药物定量的改进型茎环引物及其定量方法。

技术介绍

[0002]发夹小RNA是一种形成发夹结构的RNA序列，发夹结构可显著增强其自身的稳定性，在导入细胞中后，可长期稳定存在，并通过RNA干扰途径使基因沉默，在病毒感染和异常基因疾病中具有巨大的药用潜力。目前已有许多团队在进行发夹小RNA类药物的研发，发夹小RNA的定量分析有利于促进此类药物的药代动力学和毒代动力学的研究并可用于后续的临床检测。
[0003]然而由于发夹小RNA本身已形成了碱基互补配对，很难针对其设计有效的杂交探针，这限制了杂交ELISA和质谱法对该类核酸药物进行定量分析的应用。对于另一种常见的RNA定量技术，RT
‑
qPCR，在检测发夹小RNA时存在反转录效率低的问题。因为发夹小RNA自身已形成碱基配对，阻碍了常规3
’
端配对引物与其配对，使得反转录很难进行，即使反转录成功，也因序列太短而无法设计出有效本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于发夹小RNA类药物定量的改进型茎环引物，其特征在于，所述改进型茎环引物具有6～9个未形成发夹结构的游离简并碱基(A/C/G/T)，6～9个所述游离简并碱基的具体序列以与目标发夹小RNA的中间环位置处形成互补配对为目的来设计，且所述改进型茎环引物的第一个3
’
端配对碱基距目标发夹小RNA 5
’
端大于18个碱基。2.根据权利要求1所述的改进型茎环引物，其特征在于，所述改进型茎环引物的5
’
端是由如SEQ ID NO：1所示的碱基序列构成的茎环结构，3
’
端具有6～9个所述游离简并碱基(A/C/G/T)。3.一种发夹小RNA的定量方法，其特征在于，采用权利要求1所述的改进型茎环引物进行检测。4.根据权利要求3所述的定量方法，其特征在于，包括以下步骤：采用所述改进型茎环引物对血浆或组织裂解液中的发夹小RNA进行反转录，获得目标cDNA，然后采用RT
‑
qPCR引物进行RT
‑
qPCR反应，获得所述目标发夹小RNA的定量结果。5.根据权利要求4所述的定量方法，其特征在于，反转录反应时采用温度梯度使所述改进型茎环引物的3
’
端...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏波，杨华，魏峥，李波，金晓莺，李晋鹏，
申请(专利权)人：苏州药明康德新药开发有限公司，
类型：发明
国别省市：