抗呼吸道合胞病毒抗体及其相关应用制造技术

本发明专利技术涉及新的单克隆抗呼吸道合胞病毒(RSV)抗体、该抗体的制备方法、及其用于免疫检测的相关应用。本发明专利技术的单克隆抗RSV抗体表现出针对RSV的高灵敏度和高特异性，在层析平台能够用于纳克级浓度的RSV检测，在诸如化学发光法的其他平台中能够实现如皮克级浓度的更灵敏检测。灵敏检测。灵敏检测。

【技术实现步骤摘要】
抗呼吸道合胞病毒抗体及其相关应用


[0001]本专利技术涉及病毒的检测领域，并具体地涉及一种单克隆抗呼吸道合胞病毒(RSV)抗体、其制备方法及其用于免疫检测的相关应用。

技术介绍

[0002]呼吸道合胞病毒(RSV病毒)属于副黏病毒科肺病毒属，是一种有包膜的单股负链RNA病毒。RSV病毒每年会在全球引起约6400万人感染，造成超过300万的婴幼儿住院治疗，导致16万人死亡。因此针对RSV感染灵敏、快速的检测是极其重要的，而针对RSV病毒的抗体是RSV病毒感染免疫诊断的重要一环。
[0003]RSV表达两种主要的表面糖蛋白：融合蛋白(F蛋白)和附着蛋白(G蛋白)。F蛋白的遗传可变性小于G蛋白，它与宿主细胞膜表面的特异受体结合，介导病毒包膜与宿主细胞质膜的融合，引起病毒核酸进入宿主细胞内而得到复制。因此，RSV F蛋白是免疫检测和基于抗体的疗法的非常有吸引力的靶标。
[0004]目前现有的抗RSV F蛋白的抗体在灵敏度、特异性方面上都存在不足，在临床中会造成假阴性结果，仍有较大的改善空间。因此，本领域仍需要一种具有高特异性和高灵敏度的抗RSV F蛋白抗体。

技术实现思路

[0005]如前所述，本领域需要一种高特异性和高灵敏度的抗RSV抗体。
[0006]本专利技术人通过将纯化的RSV融合蛋白作为免疫原诱导小鼠产生免疫应答，再利用杂交瘤技术获得能够分泌抗RSV单抗的杂交瘤细胞株，通过体外滚瓶培养的方法收取上清，获得大量抗RSV单克隆抗体，经筛选得到具有高灵敏度和高特异性的抗RSV的抗体。由此，实现了本专利技术。
[0007]在第一方面，本专利技术提供了一种单克隆抗呼吸道合胞病毒(RSV)抗体，所述抗体为包括重链可变区和轻链可变区的单克隆抗RSV抗体，其中所述重链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:1
‑
3所示的氨基酸序列的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:4
‑
6所示的氨基酸序列的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3，其中，SEQ ID NO:6所示序列为QQYSNFPXT，其中X为C或F。
[0008]在第二方面，本专利技术提供了一种杂交瘤细胞，所述杂交瘤细胞于2022年7月14日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No.45238。
[0009]在第三方面，本专利技术提供了一种表达载体，其包含编码单克隆抗RSV抗体的基因，其中所述单克隆抗RSV抗体为包括重链可变区和轻链可变区的单克隆抗RSV抗体，其中所述重链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:1
‑
3所示的氨基酸序列的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:4
‑
6所示的氨基酸序列的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3，其中，SEQ ID NO:6所示序列为QQYSNFPXT，其中X
为C或F，尤其是X为F。
[0010]在第四方面，本专利技术提供了一种表达细胞，其包含第三方面所述的表达载体。
[0011]在第五方面，本专利技术提供了一种检测呼吸道合胞病毒(RSV)的方法，所述方法用于非诊断目的或者诊断目的，包括使用第一方面所述的单克隆抗RSV抗体的步骤。
[0012]在第六方面，本专利技术提供了第一方面所述的单克隆抗RSV抗体在制备用于检测呼吸道合胞病毒(RSV)的试剂中的用途。
[0013]在第七方面，本专利技术提供了一种用于免疫检测的单克隆抗RSV抗体组合，其包括作为标记抗体的第一单克隆抗RSV抗体和作为包被抗体的第二单克隆抗RSV抗体，其中，
[0014]所述第一单克隆抗RSV抗体为第一方面所述的单克隆抗RSV抗体；
[0015]所述第二单克隆抗RSV抗体为包括重链可变区和轻链可变区的单克隆抗RSV抗体，其中所述重链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:13
‑
15所示的氨基酸序列的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:16
‑
18所示的氨基酸序列的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3；
[0016]或者
[0017]所述第一单克隆抗RSV抗体为包括重链可变区和轻链可变区的单克隆抗RSV抗体，其中所述重链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:13
‑
15所示的氨基酸序列的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:16
‑
18所示的氨基酸序列的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3，
[0018]所述第二单克隆抗RSV抗体为本专利技术第一方面的单克隆抗RSV抗体；
[0019]或者
[0020]所述第一单克隆抗RSV抗体为包括重链可变区和轻链可变区的单克隆抗RSV抗体，其中所述重链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:7
‑
9所示的氨基酸序列的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:10
‑
12所示的氨基酸序列的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3，
[0021]所述第二单克隆抗RSV抗体为本专利技术第一方面的单克隆抗RSV抗体。
[0022]在第八方面，本专利技术提供了一种用于检测呼吸道合胞病毒(RSV)的试剂盒，所述试剂盒包括第一方面所述的单克隆抗RSV抗体以及用于指导如何检测呼吸道合胞病毒(RSV)的说明书。
[0023]综上，本专利技术提供了一种新的抗RSV单克隆抗体，其表现出针对RSV的高灵敏度和高特异性，能够用于纳克级甚至皮克级浓度的RSV检测，极大地提高了RSV检测与分析的灵敏度。本专利技术的抗RSV抗体能够适用于多种免疫层析检测如荧光微球层析、胶体金层析、彩色微球层析；ELISA检测如直接法、间接法、夹心法和竞争法；化学发光法；电化学发光法等。本专利技术的抗RSV抗体表现出针对RSV的高灵敏度和高特异性，在层析平台能够用于纳克级浓度的RSV检测，并且在诸如化学发光法的其他平台中可以实现如皮克级浓度的更灵敏检测。
附图说明
[0024]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗呼吸道合胞病毒(RSV)抗体，所述抗体为包括重链可变区和轻链可变区的单克隆抗RSV抗体，其中所述重链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:1
‑
3所示的氨基酸序列的重链互补决定区V
H
CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:4
‑
6所示的氨基酸序列的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3，其中，SEQ ID NO:6所示序列为QQYSNFPXT，其中X为C或F；优选地，所述重链可变区包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列；优选地，所述抗体的V
L CDR3为QQYSNFPCT，并且是由于2022年7月14日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)、保藏号为CGMCC No.45238的杂交瘤细胞生产的。2.一种杂交瘤细胞，所述杂交瘤细胞于2022年7月14日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号为CGMCC No.45238。3.一种表达载体，其包含编码单克隆抗RSV抗体的基因，其中所述单克隆抗RSV抗体为包括重链可变区和轻链可变区的单克隆抗RSV抗体，其中所述重链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:1
‑
3所示的氨基酸序列的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:4
‑
6所示的氨基酸序列的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3，其中，SEQ ID NO:6所示序列为QQYSNFPXT，其中X为C或F，尤其是X为F；优选地，所述重链可变区包含SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列；优选地，所述表达载体为质粒载体如pCDNA3.1、pEE12、pCAGGS。4.一种表达细胞，其包含权利要求3所述的表达载体；优选地，所述表达细胞为哺乳动物细胞，例如中国仓鼠卵巢细胞、小仓鼠肾细胞、猴肾细胞、小鼠胸腺瘤细胞、人胚胎肾细胞。5.一种检测呼吸道合胞病毒(RSV)的方法，所述方法用于非诊断目的，包括使用权利要求1所述的单克隆抗RSV抗体的步骤。6.权利要求1所述的单克隆抗RSV抗体在制备用于检测呼吸道合胞病毒(RSV)的试剂中的用途。7.根据权利要求5所述的方法或者根据权利要求6所述的用途，其中，所述检测是通过免疫层析法、酶标抗体法(ELISA)、化学发光法、电化学发光法来进行的；优选地，所述免疫层析法包括荧光微球免疫层析法、胶体金免疫层析法、基于彩色乳胶微球的免疫层析法、时间分辨荧光微球免疫层析法、磁性微球免疫层析法及量子点免疫层析法；ELISA如直接法、间接法、夹心法和竞争法。8.根据权利要求5或7所述的方法或者根据权利要求6或7所述的用途，其中，在所述检测中还使用另一种单克隆抗RSV抗体，并且所述单克隆抗RSV抗体作为包被抗体和标记抗体
中的一种使用，所述另一种单克隆抗RSV抗体作为包被抗体和标记抗体中的另一种使用；优选地，所述另一种单克隆抗RSV抗体为包括重链可变区和轻链可变区的单克隆抗RSV抗体，其中所述重链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:7
‑
9所示的氨基酸序列的重链互补决定区V
H CDR1、V
H
CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:10
‑
12所示的氨基酸序列的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3，或者所述重链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:13
‑
15所示的氨基酸序列的重链互补决定区V
H CDR1、V
H CDR2和V
H CDR3，所述轻链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:16
‑
18所示的氨基酸序列的轻链互补决定区V
L CDR1、V
L CDR2和V
L CDR3；优选地，所述重链可变区包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：21所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：22所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列，或者所述重链可变区包含SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：23所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列；更优选地，所述另一种单克隆抗RSV抗体为包括重链可变区和轻链可变区的单克隆抗RSV抗体，其中所述重链可变区包括具有分别由SEQ ID NO:13
‑
15所示的氨基酸序列的重链互补决定区V
H CDR1、V
H...

【专利技术属性】
技术研发人员：全红花，武云波，游梅香，龚春喜，池朗山，林育佳，李燕飞，吴学胜，欧阳海桥，
申请(专利权)人：深圳重链生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：