【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫检测领域，具体地涉及一种特异性结合疟原虫的富组氨酸蛋白ii(hrp-ⅱ)的抗疟原虫单克隆抗体及其抗原结合片段，以及其用于检测疟疾、尤其是恶性疟疾的相关应用。
技术介绍
1、疟疾是一种由寄生虫引起、通过感染的雌性按蚊叮咬而传播给人类的疾病，可危及生命。其感染地区主要分布在热带国家。共有五种寄生虫会导致人类疟疾，恶性疟原虫(p.falciparum)、间日疟原虫(p.vivax)、三日疟原虫(p.malariae)、卵形疟原虫(p.ovale)以及诺氏疟原虫(p.knowlesi)，其中恶性疟原虫和间日疟原虫危害最大。恶性疟原虫是最致命的疟疾寄生虫，在非洲大陆上最流行。间日疟原虫是撒哈拉以南非洲之外大部分国家的主要疟疾寄生虫。
2、疟疾最常见的早期症状是发烧、头痛和发冷，通常在被受感染的蚊子叮咬后10-15天内开始。疟疾可导致极度疲劳和倦怠、意识障碍、抽搐、呼吸困难、尿色深或带血、黄疸(眼睛和皮肤发黄)和异常出血等重症，严重时还会危及生命。疟疾诊断的金标准是显微镜检查，但疟疾主要感染地区为贫穷落后国家和偏远地区，当地设备不足和技术人员有限，以及疟疾早期症状不易与其他感染症区分，这造成疟疾早期诊断不够及时，对疟疾感染的防控是很不利的。
3、抗原快速检测是基于免疫学方法建立的检测，有着简单快速、结果直观、无需复杂设备等特点，是世界卫生组织推荐的疟疾诊断方法。恶性疟原虫特有一种富组氨酸蛋白-ⅱ(histidine-rich proteinⅱ，hrp-ⅱ)，当恶性疟原虫感染人类红细胞时，会产生大量富
4、因此，本领域需要一种特异性高、灵敏度高且交叉反应少的疟原虫、尤其是恶性疟原虫的检测试剂和相关方法，从而实现对恶性疟疾的简单、快速、灵敏且特异的检测。
技术实现思路
1、本专利技术人用恶性疟原虫的富组氨酸蛋白-ⅱ(hrp-ⅱ)免疫小鼠，取小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞融合，由elisa方法筛选出对hrp-ⅱ特异结合的杂交瘤细胞株，构建重组抗体，获得重组抗hrp-ⅱ单克隆抗体。由此，实现了本专利技术。
2、因此，在第一方面，本专利技术提供一种抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括重链互补决定区vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3，所述轻链可变区包括轻链互补决定区vl cdr1、vl cdr2和vlcdr3；其中：
3、vh cdr1的氨基酸序列由seq id no:1、seq id no:7、seq id no:14或seq id no:19所示；
4、vh cdr2的氨基酸序列由seq id no:2、seq id no:8、seq id no:15或seq id no:20所示；
5、vh cdr3的氨基酸序列由seq id no:3、seq id no:9、seq id no:13、seq id no:16或seq id no:21所示；
6、vl cdr1的氨基酸序列由seq id no:4、seq id no:10、seq id no:17或seq idno:22所示；
7、vl cdr2的氨基酸序列由seq id no:5、seq id no:11或seq id no:23所示；以及
8、vl cdr3的氨基酸序列由seq id no:6、seq id no:12、seq id no:18或seq idno:24所示。
9、在第二方面，本专利技术提供了一种核酸分子，其编码第一方面的抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段。
10、在第三方面，本专利技术提供了一种载体，其包含第二方面的核酸分子。
11、在第四方面，本专利技术提供了一种表达细胞，其包含第二方面的核酸分子或第三方面的载体。
12、在第五方面，本专利技术提供了第一方面的抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于检测疟疾的试剂中的用途。
13、在第六方面，本专利技术提供了一种检测疟原虫的方法，所述方法用于非诊断目的或诊断目的，包括使用第一方面的抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段的步骤。
14、在第七方面，本专利技术提供了一种用于检测疟疾的试剂盒，其包括第一方面的抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段以及使用说明。
15、综上，本专利技术提供了一种新的抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段，其表现出结合疟原虫的富组氨酸蛋白ii(hrp-ⅱ)的高灵敏度和高特异性，能够适用于多种免疫检测，进而能够用于纳克级浓度的疟原虫、尤其是恶性疟原虫的检测，为疟疾、尤其是恶性疟疾的检测提供了一种简单、快速、灵敏且特异的方案。
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1.一种抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括重链互补决定区VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述轻链可变区包括轻链互补决定区VLCDR1、VL CDR2和VL CDR3；其中：
2.根据权利要求1所述的抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，
3.根据权利要求1或2所述的抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述重链可变区还包含重链框架区HFR1、HFR2、HFR3和HFR4，其分别具有由SEQ ID NO:25-28所示的序列或与所述序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列；所述轻链可变区还包含轻链框架区LFR1、LFR2、LFR3和LFR4，其分别具有由SEQ ID NO:29-32所示的序列或与所述序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列。
4.一种核酸分子，其编码权利要求1-3中任一项所述的抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段。
5.一种载体，其包含权利要求4所述的核酸分子；优选地，所述
6.一种表达细胞，其包含权利要求4所述的核酸分子或权利要求5所述的载体，优选地，所述表达细胞为哺乳动物细胞，例如选自中国仓鼠卵巢细胞、小仓鼠肾细胞、猴肾细胞、小鼠胸腺瘤细胞、人胚胎肾细胞。
7.根据权利要求1-3中任一项所述的抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段在制备用于检测疟疾、尤其是恶性疟疾的试剂中的用途。
8.一种检测疟原虫、尤其是恶性疟原虫的方法，所述方法用于非诊断目的，包括使用权利要求1-3中任一项所述的抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段的步骤。
9.根据权利要求7所述的用途或者权利要求8所述的方法，其中，所述检测是通过免疫层析法、酶标抗体法(ELISA)、化学发光法、电化学发光法来进行的；优选地，所述免疫层析法包括荧光微球免疫层析法、胶体金免疫层析法、基于彩色乳胶微球的免疫层析法、时间分辨荧光微球免疫层析法、磁性微球免疫层析法及量子点免疫层析法；ELISA如直接法、间接法、夹心法和竞争法。
10.一种用于检测疟疾、尤其是恶性疟疾的试剂盒，其包括权利要求1-3中任一项所述的抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段以及使用说明。
...【技术特征摘要】
1.一种抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包括重链互补决定区vh cdr1、vh cdr2和vh cdr3，所述轻链可变区包括轻链互补决定区vlcdr1、vl cdr2和vl cdr3；其中：
2.根据权利要求1所述的抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，
3.根据权利要求1或2所述的抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段，其中，所述重链可变区还包含重链框架区hfr1、hfr2、hfr3和hfr4，其分别具有由seq id no:25-28所示的序列或与所述序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列；所述轻链可变区还包含轻链框架区lfr1、lfr2、lfr3和lfr4，其分别具有由seq id no:29-32所示的序列或与所述序列具有80％以上、85％以上、90％以上或95％以上一致性的序列。
4.一种核酸分子，其编码权利要求1-3中任一项所述的抗疟原虫单克隆抗体或其抗原结合片段。
5.一种载体，其包含权利要求4所述的核酸分子；优选地，所述载体为质粒载体，例如pee12、pcaggs、ptopo、pcdna如pcdna3...
【专利技术属性】
技术研发人员：林育佳，陈立，袁克湖，
申请(专利权)人：深圳重链生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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