一种周细胞和内皮细胞血管模型及其构建方法和应用技术

本发明专利技术涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种周细胞和内皮细胞血管模型、其构建方法和应用。血管模型为采用真皮微血管周细胞和内皮细胞在基质胶上培养所形成的三维立体的血管样结构。构建方法为：获得真皮微血管周细胞，并制备成周细胞细胞悬液；在ibidi血管生成载玻片上形成基质胶层；将周细胞悬液加入到基质胶层上，放入培养箱中培养，弃去培养基；将内皮细胞制备得到内皮细胞悬液，加入到ibidi血管生成载玻片上，培养，形成血管模型。本发明专利技术创新的提出了一种细胞水平上的、具有三维立体的血管模型，通过细胞培养的方式即可构建获得，具有简便易得、成本低、更符合动物实验伦理学的技术优势。优势。

【技术实现步骤摘要】
一种周细胞和内皮细胞血管模型及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及细胞培养
，尤其涉及一种周细胞和内皮细胞血管模型及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]人体的血管结构主要由三个部分组成，分别是内皮细胞、基底膜以及周细胞。周细胞和内皮细胞不仅在解剖结构上关系密切，还能通过邻分泌或旁分泌信号产生重要的相互作用。研究已发现多种疾病的发生与发展都与血管的变化有关，比如脑卒中、肿瘤的形成以及冠心病等等。因此建立良好得到人体体外血管模型是亟待解决的问题。
[0003]周细胞又称Rouget细胞，分布于体内多种血管系统的内皮细胞与基底膜之间，是血管的重要组成结构。其胞浆常伸出几条大的初级突起跨越多个内皮细胞，有时还和相邻的血管分支相连。周细胞与内皮细胞不仅在解剖结构上关系密切，还能通过邻分泌或旁分泌信号产生重要的相互作用。周细胞对血管新生，血管渗漏、肿瘤形成等生理病理过程都有重要的调节作用。探索周细胞的活性以及特性已经成为了研究血管生理以及疾病对血管影响的重要方向。
[0004]对血管相关疾病的体外研究，目前主要是通过提取本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血管模型，其特征在于，所述血管模型为采用真皮微血管周细胞和内皮细胞在基质胶上培养所形成的三维立体的血管样结构；优选的，所述血管模型形成后维持的时间为至少16个小时，优选至少为24个小时。2.根据权利要求1所述的血管模型，其特征在于，所述血管模型以所述人真皮微血管周细胞为框架，所述人内皮细胞贴附于所述人真皮微血管周细胞的内侧；优选的，所述真皮微血管周细胞和所述内皮细胞的数量比为1：1。3.如权利要求1～2任一项所述的血管模型的构建方法，其特征在于，至少包括以下步骤：S1、经过提取和鉴定，获得人真皮微血管周细胞，并制备成周细胞悬液；S2、在ibidi血管生成载玻片上形成基质胶层；S3、将周细胞悬液加入到所述基质胶层上，放入培养箱中培养0.5～1.5小时后，所述人真皮微血管周细胞形成管状框架的细胞结构，弃去培养基；S4、将人内皮细胞制备得到内皮细胞悬液，加入到ibidi血管生成载玻片上，放入培养箱中培养0.5～1.5小时后，形成所述血管模型。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，在S1中，所述提取包括：S11、取皮肤组织，修剪保留真皮组织；S12、将修剪后的皮肤组织采用中性蛋白酶水解，分离表皮和真皮；S13、将真皮使用胶原酶消化；S14、将消化后的真皮过滤，收获细胞使用周细胞培养基培养细胞，培养后的细胞用于制备周细胞细胞悬液；所述鉴定包括：同时采用CD31抗体、PDGFR抗体、NG2抗体和α
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SMA抗体对培养后的细胞进行鉴定，CD31抗体鉴定结果为阴性，PDGFR、NG2和α
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SMA抗体鉴定结果为阳性的细胞，确定为真皮微血管周细胞。5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，在S12中，所述中性蛋白酶水解的条件为在0～5℃条件下孵育8～16小时；所述中性蛋白酶溶液的浓度为2mg/mL；在S13中，所述胶原酶的浓度为1.25mg/mL，所述消化的...

【专利技术属性】
技术研发人员：林煌，崔玥，马嘉兴，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京安贞医院，
类型：发明
国别省市：