一种BK病毒样颗粒的制备及利用该病毒样颗粒检测BK病毒抗体的应用制造技术

本发明专利技术属于医学检测技术领域，具体涉及一种BK病毒样颗粒的制备及利用该病毒样颗粒检测BK病毒抗体的应用。本发明专利技术选取BK病毒VP1基因核苷酸区域，按照大肠杆菌密码子使用偏嗜性对该核苷酸区域进行优化设计，将优化片段克隆入原核载体并在大肠杆菌中高效表达VP1蛋白，再由VP1蛋白组装成BK病毒样颗粒，进而通过纯化获得BK病毒样颗粒抗原。同时，利用该病毒样颗粒作为抗原来建立了一种检测BK病毒特异性IgA/IgM/IgG/总Ig抗体的方法。本发明专利技术实现了低成本制备VP1蛋白自组装病毒样颗粒，且使VP1蛋白在大肠杆菌表达系统中表达效率更高，更有利于形成病毒样颗粒，可以实现BK病毒感染的早期检测和预后判断。检测和预后判断。检测和预后判断。

【技术实现步骤摘要】
一种BK病毒样颗粒的制备及利用该病毒样颗粒检测BK病毒抗体的应用


[0001]本专利技术属于医学检测
，具体涉及一种BK病毒样颗粒的制备及利用该病毒样颗粒检测BK病毒抗体的应用。

技术介绍

[0002]BK病毒(BKvirus，BKV)是一种多瘤病毒。该病毒是肾移植、骨髓干细胞移植、系统性红斑狼疮等免疫低下患者中常见的致病性病毒。该病毒也是正常人群中常见的感染病毒，主要是在婴幼儿、童年时期发生感染。绝大多数正常人感染BK病毒后表现为发烧等轻度临床症状，并能自愈。然而，免疫低下患者感染BK病毒后，可导致严重的临床症状，如肾移植患者感染后会出现BK病毒感染相关的肾炎，骨髓干细胞移植患者会出现出血性膀胱炎等。因此，对免疫低下患者的进行监测具有较为重要的临床指导性意义。
[0003]BK病毒为无包膜的环状DNA病毒，其表面主要为VP1蛋白，内部则主要由VP2、VP3和DNA组成。其中，BK病毒的VP1与宿主细胞受体之间的相互作用是BK病毒侵入宿主细胞内的关键性环节。因此VP1是BK病毒中和抗体结合的主要靶蛋白，对该蛋白的抗体进行检测具有重本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种BK病毒VP1蛋白自组装病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、按照大肠杆菌密码子的使用偏嗜性对BK病毒VP1蛋白的编码基因进行优化，然后将优化的基因片段克隆入原核表达载体，并将载体转化至大肠杆菌中；S2、通过步骤S1的大肠杆菌高效表达VP1，并自行组装成病毒样颗粒，将细胞破碎释放自组装成的病毒样颗粒，最后对病毒颗粒进行纯化得到BK病毒VP1蛋白自组装病毒样颗粒。2.根据权利要求1所述的一种BK病毒VP1蛋白自组装病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤S2具体包括以下步骤：S21、用含卡那霉素的LB培养基将转化后的大肠杆菌培养至菌液OD
600
达到0.5
‑
0.7，往菌液中加入IPTG并18℃过夜培养后收集上清，往上清中加入裂解液、蛋白酶抑制剂和溶菌酶后冰中静置30
‑
60min；S22、静置后冰中超声裂解细菌，收集上清，并用0.22μm的滤膜进行过滤；S23、用ViraTrap
TM
慢病毒小量纯化试剂盒纯化过滤后的上清中的蛋白，对收集的液体通过Ultra
‑
15 100K过滤器和PBS再进行过滤处理后得到BK病毒VP1蛋白自组装病毒样颗粒。3.根据权利要求1所述的一种BK病毒VP1蛋白自组装病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，所述BK病毒VP1蛋白选自NCBI里所有可用的BK病毒VP1表达基因的序列包括如NC_001538.1/V01108.1所示的序列，或如V01108.1所示的...

【专利技术属性】
技术研发人员：冀天星，刘振卫，朱锦宏，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第二医院，
类型：发明
国别省市：