一种薏苡附子散保护缺血心肌作用机制的研究方法技术

本发明专利技术一种薏苡附子散保护缺血心肌作用机制的研究方法，包括以下步骤：（1）薏苡附子散对心肌缺血模型小鼠体内NO水平及组织病理影响研究；（2）薏苡附子散对小鼠离体的胸主动脉张力影响研究；（3）薏苡附子散对人冠状动脉内皮细胞内NO活性的影响研究；研究显示薏苡附子散可以作为NO补充剂，通过NO3‑

【技术实现步骤摘要】
一种薏苡附子散保护缺血心肌作用机制的研究方法


[0001]本专利技术涉及中药
，具体涉及一种薏苡附子散保护缺血心肌作用机制的研究方法。

技术介绍

[0002]冠心病即冠状动脉粥样硬化性心脏病，是全球第一位的疾病死亡原因，多发生于中老年人群，男性多于女性，以脑力劳动者居多。China PEACE研究显示近10余年该病发病率及住院率在我国逐年上升趋势。中医药在改善CAD临床症状，提高患者生活质量，预防和延缓冠脉再狭窄等方面具有显著优势，但其缺乏科学理论依据，难以被广泛接受和认同。因此，科学家开始致力于传统中医药治疗CAD的深入研究，以期为传统中医药的使用提供科学依据并有望从中找到新的突破口。
[0003]近期研究发现，内皮细胞 (Endothelial Cells, EC) 通过血管壁中的内皮一氧化氮合酶 (eNOS) 产生的一氧化氮 (Nitric Oxide, NO)，是血流和血压的主要调节剂，可通过促进血管舒张、调节慢性组织缺血反应、减轻血管炎症、增强内皮细胞线粒体功能、抑制血小板凝集等方面发挥强大的生物活性，从而在血管稳态和心本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种薏苡附子散保护缺血心肌作用机制的研究方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）薏苡附子散对心肌缺血模型小鼠体内NO水平及组织病理影响研究：1.1）实验药物的制备：取薏苡仁颗粒剂、附子颗粒剂，按照薏苡附子散的配方配置薏苡附子散颗粒剂；再利用薏苡附子散颗粒剂制备薏苡附子散颗粒剂的浓度梯度溶液；1.2）薏苡附子散NO3‑
/NO2‑
含量检测：利用Griess法检测所述薏苡附子散颗粒剂的NO3‑
/NO2‑
含量；1.3）动物分组、造模及给药：1.31）分组：将小鼠随机分为6组：空白组、假手术组、AMI模型组、薏苡附子散颗粒剂高剂量组、薏苡附子散颗粒剂中剂量组、薏苡附子散颗粒剂低剂量组；1.32）造模：空白组按正常条件饲养；假手术组开胸穿线不接扎冠状动脉左前降支；AMI模型组、薏苡附子散颗粒剂高剂量组、薏苡附子散颗粒剂中剂量组以及薏苡附子散颗粒剂低剂量组均采用在左心耳下缘1mm结扎LAD的方法建立AMI模型；1.33）给药：除空白组外，其他各组给药前均使用腹腔注射eNOS阻滞剂抑制小鼠体内eNOS蛋白的表达；空白组、假手术组、AMI模型组分别灌生理盐水；薏苡附子散颗粒剂高剂量组、薏苡附子散颗粒剂中剂量组以及薏苡附子散颗粒剂低剂量组分别灌高中低浓度的薏苡附子散颗粒剂溶液；1.4）检测eNOS蛋白表达：利用蛋白免疫印迹法检测步骤1.33）中各组实验小鼠心肌组织eNOS蛋白表达；1.5）血清中总NO含量检测：取步骤1.33）中各组实验小鼠全血离心取上清液得到血清，利用Griess法通过总一氧化氮检测试剂盒检测各组实验小鼠血清中NO生物活性；1.6）观察心肌组织病理变化：取步骤1.33）中各组实验小鼠心脏组织样本，经过HE染色后置于显微镜下观察小鼠心肌组织病理变化情况，并拍照记录；（2）薏苡附子散对小鼠离体的胸主动脉张力影响研究：2.1）分组取血管环：将小鼠随机分为4组：生理盐水组、高剂量组、中剂量组、低剂量组，并获取各组小鼠的血管环，得到4组血管环样品；2.2）血管环的检测：将4组血管环样品分别放入含有eNOS阻滞剂L
‑
NAME的器官浴中孵育10min以阻断L
‑
精氨酸
‑
NOS
‑
NO通路，再在每组血管环样品中加入去甲肾上腺素对分离的小鼠主动脉环进行预收缩，最后在其中一组血管环样品中加入等量的生理盐水、在另外三组血管环样品中对应加入薏苡附子散颗粒剂的浓度梯度溶液，测量4组血管环样品的松弛程度并定量；（3）薏苡附子散对人冠状动脉内皮细胞内NO活性的影响研究：3.1）细胞培养：将8次传代后的HCAECs分为两大组：有氧组、缺氧组；有氧组按正常培养条件培养，缺氧组建立缺氧条件后继续分为模型组、散剂高剂量组、散剂中剂量组、散剂低剂量组，并与eNOS阻滞剂一起孵育；3.2）细胞内NO3‑
/NO2‑
含量检测：将小鼠随机分为4组：第一生理盐水组、第一高剂量组、第一中剂量组、第一低剂量组，分别对应使用生理盐水、高浓度薏苡附子散溶液、中浓度薏苡附子散溶液、低浓度薏苡附子散溶液干预；再取各组小鼠血清备用，将取得的血清灭活、除菌，再在缺氧条件下干预第8代HCAECs细胞，利用Griess法测定细胞中NO3‑
/NO2‑
的含量；
（4）统计学分析：采用SPSS 20.0软件进行统计分析，所有数据均表示为：以x
ˉ
±
s对于每项实验进行三个独立的重复，使用t检验和方差分析进行统计评估，以P<0.05表示具有统计学意义。2.根据权利要求1所述的一种薏苡附子散保护缺血心肌作用机制的研究方法，其特征在于，所述步骤1.1）中取薏苡仁颗粒剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐耀平，刘鹰，李畅，马梓珊，黄汕梅，聂莎，
申请(专利权)人：广西中医药大学，
类型：发明
国别省市：