piR-36249基因类似物及其在预防和治疗癌症中的用途制造技术

本发明专利技术提供了一种piR

【技术实现步骤摘要】
piR
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36249基因类似物及其在预防和治疗癌症中的用途


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种piR
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36249基因类似物及其在预防和治疗癌症中的用途。

技术介绍

[0002]PIWI
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interacting RNA(piRNA)是一种长度为23
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36个核苷酸的非编码RNA，首次在哺乳动物生殖细胞中发现。piRNA可以与PIWI蛋白形成复合物，参与转座子沉默、基因组重排、精子发生和生殖干细胞维护等重要生物学过程。PIWI
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piRNA通路被认为是生殖系统的免疫系统，PIWI
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piRNA通过识别和抑制有害的遗传元件如转座子元件来保护生殖细胞基因组。一旦转座子元件不受限制地扩散，就会引起基因组损伤和基因突变，这与男性不育、睾丸癌等生理和病理过程密切相关。
[0003]从遗传和发育角度，哺乳动物的雄性生殖细胞中可以分为两种不同类别的piRNA：前粗线期piRNA(pre
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pachytene piRNA)和粗线期piRNA(pachytene piRNA)。在成年雄性小鼠睾丸中，粗线期piRNA含量最多，占piRNA总量的95％以上，敲除粗线期piRNA通路的相关蛋白可导致精子发生停滞。例如，有研究组发现小鼠粗线期piRNA可以介导睾丸组织mRNA的切割，表明了piRNA在小鼠睾丸组织中可以发挥siRNA类似的功能，而且该功能为雄性生殖细胞发育成熟所必需。近期研究表明，正常生殖细胞向睾丸癌细胞转化过程中PIWI/piRNA通路基本丢失，其丢失可能是生殖细胞发生癌变的原因。
[0004]睾丸癌被认为是由男性生殖细胞发育异常引发的癌症，其中睾丸生殖细胞肿瘤(testicular germ
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cell tumor，TGCT)占睾丸癌的95％。组织学上，TGCT可分为精原细胞瘤和非精原细胞瘤，精原细胞肿瘤类似原始生殖细胞(primordial germ cells，PGCs)肿瘤，而非精原细胞肿瘤包括未分化的胚胎瘤、分化的胚胎畸胎瘤以及胚胎外的卵黄囊绒毛膜癌，其中胚胎瘤的发病率约占非精原细胞瘤的87％，严重危害到男性健康和生殖能力。TGCT在普通人群中是罕见的肿瘤，但在15
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44岁的男性中是最常见的恶性肿瘤之一。目前TGCT的诊断主要依靠体检检查、超声检查、磁共振成像、血清肿瘤标志物的测定和病理检查。根据欧洲泌尿外科学会(European Association of Urology，EAU)发布的睾丸癌指南，大约15
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30％的TGCT患者在一线化疗后会复发，并将需要额外的治疗。研究发现，原发性TGCT可转移至腹膜后淋巴结、大脑、颈部、心脏、肺动脉、下腔静脉和主动脉、肺、肝、胃和软骨。这反映了睾丸肿瘤的侵袭性生物学特征，同时也提出了睾丸癌治疗所面临的困难与挑战。目前TGCT的标准治疗是根治性睾丸切除术、以顺铂(Diamminedichloroplatinum，DDP)为中心的联合化疗方案、放疗以及腹膜后淋巴结清扫等。但TGCT治疗对其他器官产生的副作用将成为TGCT患者生存的长期风险因素。文献报道，TGCT患者出现肾脏疾病、继发性白血病、颈内动脉闭塞和中风等与化疗有关，严重增加了家庭经济负担和社会压力。更为重要的是，睾丸组织的正常发育和特异性的基因表达与调控是最终形成正常精子的必要条件，而精子发生异常是男性不育的主要原因。因此，寻找到一个合适的特异性靶点，开发出新的TGCT治疗策略是大家一直努力的方向。
[0005]近年来，大量的证据表明，piRNA的异常表达与多种癌症的发生、进展和侵袭显著相关，包括胃癌、乳腺癌、肾癌、结肠癌和肺癌等多种癌症。例如，piRNA
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30473通过上调m6A mRNA甲基化酶WTAP的表达，提高己糖激酶2(HK2)m6A水平，增加HK2的表达，促进弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的发展。在人乳腺癌中，SEPW1P是一个蛋白编码基因SEPW1的反转录假基因，piR
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36712引导PIWI蛋白与SEPW1P RNA结合，降解SEPW1P RNA，释放更多的miRNA结合到SEPW1 mRNA上，促进其降解。SEPW1蛋白的减少削弱了其对P53和P21的抑制，从而抑制癌细胞增殖、侵袭和迁移。因此，piRNA可能成为潜在的癌症诊断指标、预后标记物或癌症治疗靶点。虽然piRNA在多种癌症中的重要性日益被认识，但其在睾丸癌中的作用和潜在机制仍未完全了解。研究发现，小非编码RNA作为睾丸生殖细胞肿瘤中的肿瘤抑制基因或癌基因，有望成为睾丸癌的检测新生物标记物、预后的不良指标，以及未来开发新疗法的潜在目标。因此，识别与睾丸癌相关的piRNA并阐明其机制将是一项令人兴奋和有意义的工作。

技术实现思路

[0006]专利技术要解决的课题
[0007]本专利技术是鉴于上述的现有技术而完成的，其目的在于，提供一种能够预防和治疗睾丸癌的piR
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36249基因类似物。
[0008]用于解决课题的手段
[0009]本专利技术人为了解决上述问题，进行了深入研究，其结果首次发现piR
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36249基因类似物的异常表达与睾丸癌有一定的关系，由此提供了一种piR
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36249基因类似物。
[0010]具体地，本专利技术涉及以下几个方面：
[0011]1.piR
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36249基因类似物，其序列为SEQ ID NO:1所示的序列。
[0012]2.药物组合物，其包含项1所述的piR
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36249基因类似物和药用载体。
[0013]3.项1所述的piR
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36249基因类似物在制备用于抑制睾丸癌细胞增殖和侵袭的药物中的用途。
[0014]专利技术效果
[0015]根据本专利技术，piR
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36249基因类似物转染于睾丸癌细胞中时，通过靶向OAS2 mRNA的3'UTR，上调OAS2 mRNA的表达，从而能够显著抑制睾丸癌细胞的增殖、侵袭及迁移，能够促进睾丸癌细胞凋亡。
附图说明
[0016]图1A：将piR
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36249基因类似物与对照组共转入睾丸癌细胞(NT2)中，通过RT
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qPCR检测piR
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36249基因类似物的相对表达水平，确认piR
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36249基因类似物的过表达效果(n＝3)。
[0017]图1B：通过CCK8比色法检测转染piR
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36249基因类似物的NT2细胞增殖情况(n＝3)。
[0018]图1C
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D：通过荧光标记的5
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乙炔基
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脱氧尿苷(Edu)可替代胸苷掺入到细胞新合成的DNA中，检测NT2细胞增殖情况。细胞核用Ho本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.piR
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36249基因类似物，其序列为SEQ ID NO:1所示的序列。2.药物组合物，其包含权利要求1所述的piR
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【专利技术属性】
技术研发人员：宋晓元，王倩倩，陈佩泽，
申请(专利权)人：中国科学技术大学，
类型：发明
国别省市：