Thbs2基因或THBS2蛋白的抑制剂在制备抗肝纤维化的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开Thbs2基因或THBS2蛋白的抑制剂在制备抗肝纤维化的药物中的应用。本发明专利技术首次发现靶向沉默小鼠肝星状细胞THBS2具有抗肝纤维化的作用，基于此研究得到抗纤维化的药物，包括特异性靶向小鼠Thbs2基因转录的siRNA和shRNA，可有效抑制THBS2蛋白表达，具有较好的抗肝纤维化效果。的抗肝纤维化效果。的抗肝纤维化效果。

【技术实现步骤摘要】
Thbs2基因或THBS2蛋白的抑制剂在制备抗肝纤维化的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药领域。更具体地，涉及Thbs2基因或THBS2蛋白的抑制剂在制备抗肝纤维化的药物中的应用。

技术介绍

[0002]血小板反应蛋白2(THBS2)基因敲除小鼠结缔组织异常，包括胶原成纤维异常、血管壁厚度增加和出血性疾病，组织中细纤维束粗细不一，排列不整，呈离散状甚至崩裂状(Kyriakides TR ZY,Smith LT,Bain SD,Yang Z,Lin MT,Danielson KG,Iozzo RV,LaMarca M,McKinney CE,Ginns EI,Bornstein P.Mice that lack thrombospondin 2 display connective tissue abnormalities that are associated with disordered collagen fibrillogenesis,an increased vascular density,and a bleeding diathesis.J Cell Biol 1998；140:419
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430.)，说明THBS2参与了细胞外基质(ECM)重构。最近研究发现THBS2可抑制血管生成参与癌症进展与转移：肿瘤微环境中THBS2可减少血管形成并促进肿瘤相关淋巴管生成，促进肝内胆管癌进展(Carpino G,Cardinale V,Di Giamberardino A,Overi D,Donsante S,Colasanti T,Amato G,Mennini G,Franchitto M,Conti F,Rossi M,Riminucci M,Gaudio E,Alvaro D,Mancone C.Thrombospondin 1 and 2 along with PEDF inhibit angiogenesis and promote lymphangiogenesis in intrahepatic cholangiocarcinoma.J Hepatol 2021；75(6):1377
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1386.)；THBS2
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成纤维细胞是促进早期肺腺癌转移的重要细胞群(Yang H,Sun B,Fan L,Ma W,Xu K,Hall SRR,Wang Z,Schmid RA,Peng RW,Marti TM,Gao W,Xu J,Yang W,Yao F.Multi
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scale integrative analyses identify THBS2+cancer
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associated fibroblasts as a key orchestrator promoting aggressiveness in early
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stage lung adenocarcinoma.Theranostics 2022；12(7):3104
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3130.)。除此之外，THBS2也是非酒精性脂肪性肝炎(NASH)及其相关肝纤维化的血清标志物(Kozumi K,Kodama T,Murai H,Sakane S,Govaere O,Cockell S,Motooka D,Kakita N,Yamada Y,Kondo Y,Tahata Y,Yamada R,Hikita H,Sakamori R,Kamada Y,Daly AK,Anstee QM,Tatsumi T,Morii E,Takehara T.Transcriptomics Identify Thrombospondin
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2 as a Biomarker for NASH and Advanced Liver Fibrosis.Hepatology 2021；74(5):2452
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2466.)。
[0003]目前临床上除了去病因治疗外，尚无有效干预肝纤维化的特异性靶点和药物。前期研究发现THBS2在纤维化肝脏表达显著上调，主要位于汇管区和纤维间隔；而且THBS2在不同病因的肝纤维化患者及不同造模方式诱导的肝纤维化小鼠模型肝组织中表达均显著上调，提示THBS2表达失调不受病因扰动，为肝纤维化特异(Chen W,Wu X,Yan X,Xu A,Yang A,You H.Multitranscriptome analyses reveal prioritized genes specifically associated with liver fibrosis progression independent of etiology.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 2019；316(6):G744
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G754.)。
[0004]但是THBS2在纤维化肝脏中表达显著上调具有抗纤维化作用还是促纤维化作用，目前国内外尚无相关报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供Thbs2基因或THBS2蛋白的抑制剂在制备抗肝纤维化的药物中的应用。
[0006]为达到上述目的，本专利技术采用下述技术方案：
[0007]本专利技术首先提供了Thbs2基因或THBS2蛋白的抑制剂在制备抗肝纤维化的药物中的应用。
[0008]进一步，所述抑制剂为以THBS2蛋白或其转录本为靶序列、且能够抑制THBS2蛋白表达或Thbs2基因转录的siRNA、dsRNA、shRNA、miRNA。
[0009]进一步，所述的抑制剂为如下任一种：
[0010]c)siRNA，所述siRNA的靶序列如SEQ ID NO.1所示；
[0011]d)shRNA，所述shRNA的序列如SEQ ID NO.2所示；
[0012]c)能够表达a)所述siRNA或b)所述shRNA的载体；
[0013]d)包含c)所述载体的病毒。
[0014]本专利技术构建了腺相关病毒AAV6包被全身启动子(CMV)
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shRNA(Thbs2)载体(即AAV6
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CMV
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shRNA(Thbs2))鼠尾静脉注射小鼠，可显著抑制CCl4腹腔注射引起的肝纤维化进展，说明Thbs2基因或THBS2蛋白是抗肝纤维化的有效靶点。
[0015]进一步，所述siRNA的靶序列向导链如SEQ ID NO.3所示。
[0016]本专利技术还提供了一种siRNA分子，所述siRNA分子的靶序列如SEQ ID NO.1所示。
[0017]进一步，所述siRNA分子的靶序列向导链如SEQ ID NO.3所示。
[0018]本专利技术还提供了一种shRNA分子，所述shRNA分子的序列如SEQ ID NO.2所示。
[0019]本专利技术还提供了一种表达载体，所述表达载体能够表达所述本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Thbs2基因或THBS2蛋白的抑制剂在制备抗肝纤维化的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抑制剂为以THBS2蛋白或其转录本为靶序列、且能够抑制THBS2蛋白表达或Thbs2基因转录的siRNA、dsRNA、shRNA、miRNA。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述抑制剂为如下任一种：a)siRNA，所述siRNA的靶序列如SEQ ID NO.1所示；b)shRNA，所述shRNA的序列如SEQ ID NO.2所示；c)能够表达a)所述siRNA或b)所述shRNA的载体；d)包含c)所述载体的病毒。4.一种siRNA分子，其特征在于，所述siRNA分子的靶序列如SEQ ID NO.1所示。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：陈巍，张宁，尤红，吴晓宁，张文，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京友谊医院，
类型：发明
国别省市：