桃MIR6288b在调控植物分枝数量中的应用制造技术

本发明专利技术公开了桃MIR6288b在调控植物分枝数量中的应用，所述MIR6288b基因的前体序列如SEQ ID NO.1所示，成熟序列miR6288b

【技术实现步骤摘要】
桃MIR6288b在调控植物分枝数量中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及桃MIR6288b以及在调控植物分枝数量中的应用。

技术介绍

[0002]桃生产上主栽品种为普通型，其树型开张，分枝多，分枝角度大，随着结果年限的延长，营养生长旺盛，树体枝繁叶茂，最终造成树冠郁蔽，不仅影响透光率、果实品质的提升、加重病虫害的发生几率，还极大增加了夏剪和冬剪人工成本。国家桃产业技术体系栽培研究室统计结果表明劳动力成本已占到桃生产成本的一半以上，而人工修剪是人工投入的最主要部分。因此，为实现桃省力化栽培，对桃树树型调控机制解析迫在眉睫。
[0003]植物microRNA是一类由内源MIR基因编码的颈环结构，在DICER
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LIKE1(DCL1)酶的剪切作用下形成的长度约19～24个核苷酸的小分子单链非编码RNA，可以通过碱基互补配对的方式识别靶基因mRNA，并在转录水平或转录后水平调控基因的表达。miRNA在植物的分枝形成过程中发挥重要的调控作用。miR319靶定并降解AtTCP4以保证拟南芥根的正常生长；棉花miR164通过靶定基因GhCUC2的方式调节内源ABA含量并调节棉花分枝形成；水稻miR167a通过靶定生长素响应因子OsARF12/17/25的方式调控生长素再分布并调节水稻分蘖角度。但目前调控分枝数量的miRNA却鲜有报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供桃(Prunus persica L.)MIR6288b以及在调控植物分枝数量中的应用。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案概述如下：
[0006]桃MIR6288b的前体序列如SEQ ID NO.1所示，成熟序列miR6288b
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5p如SEQ ID NO.2所示，成熟序列miR6288b
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3p如SEQ ID NO.3所示。
[0007]本专利技术最主要的目的在于提供上述桃MIR6288b或与MIR6288b相关的生物材料的应用。具体表现为所述桃MIR6288b能够增加植物分枝数量，因此，通过抑制目的植物中MIR6288b的表达可辅助选育分枝数量少，适宜于省力化栽培的桃新品种，在植物分枝数量遗传改良方面起着重要的作用。
[0008]“抑制目的植物中的MIR6288b的表达”的实现方式可以通过敲除MIR6288b的方式来实现，具体的，可以通过基因编辑的方式获得MIR6288b缺失的突变体植物。可通过将所述植物细胞再生成植物，获得MIR6288b缺失的突变体植物。并利用农杆菌转化法将重组质粒转入植物中。
[0009]本专利技术中所述生物材料可以为含有所述MIR6288b的表达盒、重组载体、重组微生物、转基因植物细胞系、组织或器官，还可以为含有所述表达盒的重组载体、重组微生物、转基因植物细胞系、组织或器官。
[0010]本专利技术中，对于适用于本专利技术的植物没有特别的限制，只要其适合进行基因的转
化操作，如各种农作物、花卉植物或林业植物等。所述的植物比如可以是(不限于)：双子叶植物、单子叶植物、木本植物、蔷薇目植物、蔷薇科植物、桃属、桃、十字花科植物、拟南芥属植物、拟南芥等。
[0011]本专利技术中所说的“植物”包括整株植物，其亲本和子代植株以及植物的不同部位，包括种子、果实、芽、茎、叶、根(包括块茎)、花、组织和器官，在这些不同的部分均有我们目的基因或者核酸。这里所提及的“植物”也包括植物细胞、悬浮培养物、愈伤组织、胚、分生组织区、配子体、孢子体、花粉和小孢子，同样，其中每种前述对象包含目的基因/核酸。
[0012]本专利技术包括任何植物细胞，或任何由其中的方法获得或可获得的植物，以及所有的植物部分及其繁殖体。本专利也包含由任何前述方法所获得的转染细胞、组织、器官或完整植物。唯一的要求是子代表现出相同的基因型或表型特征，使用本专利中的方法获得的子代特性相同。
[0013]本专利技术还扩展到如上所述的植物的可收获的部分，但不限于种子、叶、果实、花、茎、根、根茎、块茎和球茎。同时进一步涉及植株收获后的其他衍生物，如干燥颗粒或粉末、油、脂肪和脂肪酸、淀粉或蛋白质。本专利技术还涉及由相关植物获得的食品或食品添加剂。
[0014]本专利技术还公开了一种改变植物分枝数量的方法，通过转基因、基因敲除、杂交、回交、自交或无性繁殖的方法，控制植物对MIR6288b的表达，所述MIR6288b的前体序列如sEQ ID NO.1所示。
[0015]其中，控制植物对MIR6288b的表达是指使所述MIR6288b基因在植物中超表达或降低表达。
[0016]所述转基因包括利用Ti质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、显微注射、基因枪、电导或农杆菌介导的方法将包含所述MIR6288b序列的重组表达载体导入植物，获得转基因植物株系。
[0017]所述基因敲除包括利用DNA同源重组技术、Cre/LoxP技术或CRISPR/Cas9技术将所述MIR6288b敲除，获得转基因植物株系。
[0018]本专利技术的优点：
[0019]本专利技术通过克隆桃MIR6288b构建过表达载体，用农杆菌介导的遗传转化法转入拟南芥中验证MIR6288b的功能，与野生型植株相比，转基因植株分枝数量显著增多，有利于从分子水平上阐明有关桃树发枝量方面的分子机制，从而可辅助选育分枝数量少，适宜于省力化栽培的桃新品种，还可以应用于植物分枝数量遗传改良方面的研究。
附图说明
[0020]图1是普通型桃大久保分枝数量显著高于柱型桃照手红；
[0021]图2是桃MIR6288b扩增电泳图；
[0022]图3是MIR6288b在柱型桃照手红和普通型桃大久保表达量；
[0023]图4是桃MIR6288b转基因拟南芥阳性植株鉴定；
[0024]图5是桃MIR6288b转基因拟南芥相对表达量分析；
[0025]图6是桃MIR6288b转基因拟南芥表型分析。
具体实施方式
[0026]下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但下述实施例中所涉及的具体实验方法如无特殊说明，均为常规方法或按照制造厂商说明书建议的条件实施。
[0027]若未特别指明，实施例中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。下述实施例中的试验方法，如无特别说明，均为常规方法。如无特殊说明，所采用的试剂及材料，均可以从市场中购买获得。
[0028]除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本专利技术中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
[0029]此处使用的“核酸”、“核酸序列”、“核苷酸”、“核酸分子”或“多聚核苷酸”术语意思是指包括分离的DNA分子(例如，cDNA或者基因组DNA)，RNA分子(例如，信使RNA)，自然类型，突变类型，合成的DNA或RNA分子，核苷酸类本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.桃MIR6288b或与MIR6288b相关的生物材料在调控植物分枝数量中的应用，所述MIR6288b基因的前体序列如SEQ ID NO.1所示。2.桃MIR6288b或与MIR6288b相关的生物材料在选育分枝数量少的转基因植物中的应用，所述MIR6288b的前体序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述植物为桃、拟南芥。4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述MIR6288b的成熟序列miR6288b
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5p如SEQ ID NO.2所示，成熟序列miR6288b
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3p如SEQ ID NO.3所示。5.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述生物材料为如下任何一种：含有所述MIR6288b的表达盒、重组载体、重组微生物、转基因植物细胞系、组织或器官，或含有所述表达盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：王小贝，谭彬，闫李霞，张杰，冯建灿，郑先波，张海朋，连晓东，程钧，王伟，张郎郎，侯楠，李继东，叶霞，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：